Как срочно похудеть на 3 кг за 3 дня: Как быстро скинуть пару лишних килограммов для особого случая

Как похудеть за 3 дня в домашних условиях на 3 кг диета

Итак, у вас есть всего 3 дня, чтобы сбросить несколько килограммов? Тогда начинаем действовать в скоростном режиме, ведь цель, наверняка имеет большое значение!

Как похудеть за 3 дня в домашних условиях

Вроде бы 3 дня – малый срок для потери лишних кило, но не стоит недооценивать время, так как за такой небольшой отрезок можно с легкостью распрощаться с тремя килограммами.

Как похудеть на 3 кг за 3 дня. Советы

1. Полностью исключите такие продукты как: хлеб, майонез, сахар, соль, быстро приготовляемую пищу (супы, пюре и т. д.), копчености, вредные сладости, чай, кофе, а также ни в коем случае не используйте способ приготовления еды – жарку.

2. Обязательно выпиваете ежедневно не менее 2-х литров чистой минеральной воды в день, чем больше жидкости вы пьете, тем быстрее происходит процесс. Также можно 2-3 раза в день пить имбирный чай, он способствует похудению.

3. Три дня питайтесь только овощами, фруктами и белковой пищей (грудка куриная и рыба). Прием еды в данном случае не должен превышать 3-х раз в день небольшими порциями (объем 1 порции должен поместиться в ладошку).

4. Чтобы похудеть быстро, вам поможет бег. На протяжении трех дней бегайте не менее 30-40 минут, так процесс по жиросжиганию ускорится в 10 раз. За 30 минут до пробежки выпейте такой напиток: в стакан с чистой холодной водой выжмите половинку лимона, после тренировки выпейте тоже самое. Для усиления эффекта от пробежек надевайте больше вещей, так лишние кило будут таять на глазах.

5. Помимо бега, необходимы упражнения на все группы мышц, поэтому не забывайте по 30-45 минут в день выполнять нужную тренировку. Больший эффект по снижению веса принесут кардио нагрузки, которые способствуют жиросжиганию. Желательно занимайтесь в специальном белье для похудения, благодаря такой одежде вес уйдет быстрее.

Диета как похудеть за 3 дня

Эта диета поможет похудеть на 3 килограмма всего за 3 дня!

Итак, вот она – палочка-выручалочка для желающих похудеть быстро:

День первый

• Завтрак: стакан чистой холодной воды с лимоном и мятой, фруктовый салат (1 яблоко, 1 апельсин, парочку любых кислых ягод или 4 шт. любых сухофруктов, столовая ложка натурального йогурта).
• Обед: отварная куриная грудка (50 грамм), салат 100 грамм (капуста, укроп, лук), стакан чистой холодной воды с лимоном.
• Ужин: легкий суп (объем размером с обычную кружку). Суп должен состоять из: брокколи, морковь, помидор, петрушка и 1 ст. ложка оливкового масла. Ничего жарить не нужно, суп готовится на воде. После ужина выпить 2 стакана холодной чистой воды с лимоном.

День второй

• Завтрак: стакан чистой холодной воды с лимоном, 50 грамм овсяной каши с изюмом (10-15 грамм), небольшое кислое яблоко.
• Обед: отварная рыба с зеленым луком (100 грамм), рис (50 грамм), огурец. Не забывать про холодную воду с лимоном.
• Ужин: овощной супчик (чеснок 3-4 зубчика, тертая свекла 1 шт., 1 средняя морковка, 1 помидор, укроп, 1ст. ложка оливкового масла). Плюс 2 стакана чистой холодной воды с лимоном.

День третий

• Завтрак: стакан холодной воды с лимоном, 1 яйцо пашот, 50 грамм обезжиренного творога.
• Обед: овощи на пару (100-150 грамм). Стакан с холодной водой и лимоном.
• Ужин: 50 грамм отварной куриной грудки, салат с редькой и чесноком (50-100 грамм). Два стакана холодной воды с лимоном.

Дополнительные советы как похудеть за 3 дня

1. Главное – как можно больше двигаться.

2. Обязательно взвешивайте пищу в готовом виде.

3. В течение трех дней откажитесь от перекусов.

4. По возможности делайте самомассаж.

5. Не употребляйте алкоголь.

6. Не добавляйте в пищу соль и соусы.

7. Отвлекайтесь, чтобы не зацикливаться на похудении.

Похудеть за 3 дня реально, главное – большое желание и выдержка!

Похожие статьи

– Что делать если нужно быстро похудеть

– Одежда, способствующая похудению

– Как похудеть за неделю в домашних условиях

– 10 ошибок худеющих

– Как обмануть аппетит, чтобы похудеть

 

революция для ленивых – Диеты – Домашний

Нужно срочно похудеть? Нет проблем! Модная интервальная диета гарантированно поможет вам сбросить до 5 кг лишнего веса без особых усилий.

Главное – не навредить здоровью. Тестируем 5 популярных экспресс-диет… Смотрите видео! 

Цель: диета направлена на очищение организма, уменьшение объемов тела, сохранение упругости кожи

Продолжительность: 9–18 дней, не чаще 2–3 раз в год

Результат: до минус 5 кг за 3 дня с детокс-эффектом на клеточном уровне

Сверхзадача: быстрое похудение перед отпуском, торжественным мероприятием или после праздничных застолий

Противопоказания: заболевания ЖКТ и почек, проблемы с пищеварением, беременность и период лактации, детский и подростковый возраст, сахарный диабет и другие хронические заболевания. Даже если у вас нет проблем со здоровьем, прежде чем сесть на диету, проконсультируйтесь с врачом! 

Минус 20 кг: самые эффективные диеты

Никак не можете похудеть и все чаще задумываетесь о том, что лучший способ сбросить лишние килограммы – просто перестать есть? 20 суперэффективных диет от Domashniy.ru помогут вам стать стройнее на 5–20 кг!

Читать далее

Как это работает:

Диета проходит в три этапа, каждый из которых включает в себя моно-употребление риса, мяса или овощей.

Уникальность трехдневной интервальной диеты заключается в том, что вы с легкостью можете подстраивать ее под себя: количество дней в каждом этапе можно варьировать от 1 до 3 по своему желанию.

Начинать диету нужно с рисовых дней, а чередовать этапы следует только в указанном порядке.

3 золотых правила интервальной диеты:

1. 1Употреблять только разрешенные продукты.

2. Ежедневно выпивать не менее 2,5 л чистой негазированной воды.

3. Количество соли нужно свести практически к нулю (допускается использование небольшого количества слабосоленого соевого соуса).

I этап – рисовые дни

Первый этап – очищающий, поэтому и начинать нужно именно с него. Рис обладает удивительными свойствами абсорбировать и выводить из организма лишнюю воду, токсины и другие вредные вещества. Интервальная диета начинается с рисового дня

shutterstock.com

Чтобы он на 100% выполнил свою задачу, его нужно заранее правильно подготовить.

1 стакан риса тщательно промыть несколько раз, пока вода не станет прозрачной. Залить тремя стаканами холодной воды и оставить на 2 часа. Замачивать рис рекомендуется не менее 3 раз, меняя воду. Затем отварить рис до готовности, а лучше – до полуготовности, без добавления соли. Переваривать рис ни в коем случае нельзя.

Как питаться в рисовые дни:

1. Обязательно употреблять зеленый чай без искусственных добавок.

2. Мед разрешается только в первой половине дня.

3. Солить еду можно только на завтрак и обед.

Что можно есть в рисовые дни и сколько:

• длиннозерный белый нешлифованный рис (также допускается красный, коричневый или черный рис) – 1 стакан сухой крупы;
• листовые салаты, огурцы, свежую зелень – до 300 г;
• любой обезжиренный кисломолочный напиток – 1 стакан;
• мед – 1 ч.л.;
• зеленый чай без сахара;
• специи и пряности.

Меню рисового дня

Завтрак: 1/3 часть готового риса, зеленый чай

Второй завтрак: микс-салат, зеленый чай с медом

Обед: 1/3 часть отваренного риса, огурец

Второй обед: салат из огурцов с зеленью

Ужин: 1/3 часть риса, 1 стакан кефира

Совет

С вечерним голодом поможет справиться салат из 1–2 свежих огурцов с мятой и петрушкой. Важно не заправлять салат маслом. Допускаются специи и немного соевого соуса.

II этап – мясные дни

На втором этапе организм важно насытить калориями, не позволив ему при этом трансформировать их в жир. Для этой цели идеально подходит животный белок: избавляет от чувства голода, формирует мышечную массу, является строительным материалом для обновления клеток кожи, поддерживает водный баланс в тканях. Для переваривания белка организму нужно много времени и энергии, которую, в отсутствие углеводов, он будет добывать из отложенного про запас жира. В мясные дни налегайте на рыбу и птицу

shutterstock.com

Как питаться в мясные дни:

1. Мясо и рыбу можно отваривать или запекать в духовке без использования масла и панировки.

2. Не рекомендуется употреблять рыбу и мясо в один день.

3. Чтобы не возникли проблемы с пищеварением, в мясные дни обязательно нужно употреблять отруби или клетчатку.

Что можно есть в белковые дни и сколько:

• куриную грудку без кожи, индейку, мясо кролика, нежирную говядину или рыбу – до 900 г готового блюда;
• яичный белок – до 4 шт;
• творог 0% – до 200 г;
• свежую зелень;
• сок лимона или лайма в качестве приправы;
• обезжиренные кисломолочные напитки – 2 стакана;
• отруби или клетчатку – 1–3 ч.л.;
• зеленый чай без сахара;

• специи и пряности.

Меню мясного дня

Завтрак: омлет из белков с зеленью, натуральный йогурт с добавлением отрубей

Второй завтрак: творог с зеленью, зеленый чай

Обед: запеченное мясо, зеленый чай

Второй обед: запеченное мясо, зелень, кефир с добавлением отрубей

Ужин: отварное мясо, зелень, зеленый чай

Совет

Если вечером донимает голод, съешьте 1–2 ч.л. отрубей или клетчатки, запив водой. 

III этап – овощные дни

На заключительном этапе обязательным условием является употребление овощей преимущественно в сыром виде. В них содержится много клетчатки, которая настраивает работу ЖКТ после белковой диеты. Полюбите овощи, их вам нужно будет есть на 3 этапе

shutterstock.com

Как питаться в овощные дни:

1. Овощи можно отваривать, запекать или употреблять в сыром виде.

2. Свеклу и морковь нужно употреблять только сырыми, так как в приготовленном виде они резко повышают уровень сахара в крови.

3. В блюда обязательно следует добавлять растительное масло, без которого невозможно усвоение жирорастворимых витаминов A, D, E и K.

4. Объемы порций должны быть умеренные. Нельзя есть до чувства тяжести в желудке.

Какие овощи можно употреблять:

• огурцы;
• помидоры;
• кабачки;
• репчатый лук;
• морковь;
• шпинат;
• свеклу;
• стебли и корень сельдерея;
• зеленую стручковую фасоль;
• болгарский перец;
• красно- и белокочанную капусту, а также брюссельскую, китайскую, цветную и капусту брокколи;

• замороженные или свежие грибы;
• обезжиренные кисломолочные напитки – до 2 стаканов;
• зеленый чай без сахара;
• растительное масло – до 2 ст.л.;
• яблочный и виноградный уксус;
• специи и пряности.

Меню овощного дня

Завтрак: салат из свежих помидоров, огурцов и зелени с 1 ч.л. растительного масла, 1 стакан кефира

Второй завтрак: салат из сельдерея с болгарским перцем и 1 ч.л. растительного масла, зеленый чай

Обед: тушеная капуста с помидорами и грибами без добавления масла

Второй обед: салат из белокочанной капусты и моркови, заправленный уксусом

Ужин: отваренная на пару брокколи, натуральный йогурт

Совет

Утолить вечерний голод поможет 1 стакан обезжиренного кефира с добавлением 2 ч.л. отрубей.

Диета моделей (2-4 кг за 3 дня)

1 июня 2015 | просмотров: 5514

Девушки-модели всегда привлекают внимание окружающих. Сохранять стройность долгие годы им удается благодаря здоровому образу жизни и системе правильного питания. Каждая девушка, работающая в сфере модельного бизнеса, имеет свои секреты красоты и успешной борьбы с лишними килограммами.

Содержание статьи:

1. Экспресс похудение – отличный результат за три дня
2. Диета с грейпфрутом в ежедневном рационе
3. Блиц-диета
4. Противопоказания
5. Отзывы о диете моделей

При необходимости срочно сбросить вес, женщины прибегают к диете моделей. С целью поддержания отличной формы обязательно следует исключить из рациона жареные, копченые блюда, а также мучное. Предпочтение рекомендуется отдать низкокалорийным продуктам, а также овощам и фруктам.

Диета моделей для похудения — здоровое тело, желаемый вес и отличное самочувствие, при условии соблюдения установленных правил. Помимо питания, важно уделять должное внимание употреблению жидкости в течение всего дня – рекомендуется выпивать воды не менее двух-трех литров ежедневно.

Экспресс похудение – отличный результат за три дня

Быстрая диета моделей является бескомпромиссным способом избавиться от лишних килограммов за несколько дней. Как правило, диеты рассчитаны на трехдневный период. За это время удается снизить вес на 2-4 кг. Но к такому способу похудения нельзя прибегать чаще, чем один раз в месяц. Преимущества такого метода заключаются в гарантированной потере лишнего веса через три дня, отсутствии неважного самочувствия и изнурительного чувства голода.

С целью быстрой потери веса, рекомендовано в 9.00 утра съесть отварное яйцо, затем в 12.00 часов дня – 125 гр нежирного творога и выпить чай без сахара (лучше отдать предпочтение качественному зеленому) и в 15.00 часов – только творог и чай. В этот период желательно достаточно времени проводить на свежем воздухе и употреблять много жидкости (воды или черного, зеленого чая) – это позволит избежать чувства голода и иметь прекрасное самочувствие на протяжении нескольких дней. Выход из данной системы «голодания» должен быть постепенным, количество еды и ее калорийность нужно понемногу ежедневно увеличивать.

Диета с грейпфрутом в ежедневном рационе

Тем, кто стремится избавиться от лишних килограммов, предлагаем еще один вариант низкокалорийной диеты. Такая диета моделей – 2, 4 кг за 3 дня – отличный способ достижения поставленных целей при минимальном вреде для организма.

В трехдневный рацион должны быть включены следующие продукты:

• 1-й день – следует выпить один или два стакана воды сразу после пробуждения. Это позволит устранить вредные вещества, накопившиеся в организме. Ближе к середине дня желательно выпить уже не менее одного литра жидкости. На завтрак рекомендуется молочный напиток, можно с медом, можно съесть сухарик и один цитрус (при отсутствии аллергии). В обед разрешено употребить 100-150 г рыбы, приготовленной на пару, и 200 г свежих овощей, можно в виде салата. На полдник – стакан обезжиренного кефира, домашнего нежирного йогурта или ряженки. На ужин рекомендовано съесть салат (не более 200 г) с ложечкой оливкового масла и небольшое количество овощного бульона. Перед сном выпить стакан кефира.
• 2-й день. На завтрак – один цитрус, лучше грейпфрут, 50-100 г творога с низкой жирностью, вода с медом или соком лимона. На обед – 150 г отварной курицы и свежие овощи. На полдник рекомендуется выпить стакан йогурта. На ужин можно приготовить салат из овощей и съесть немного творога. Перед сном не противопоказан стакан кефира.

• 3-й день. Утром рекомендуется сок из одного грейпфрута и 3-4 столовые ложки обезжиренного творога. Обед – геркулесовая каша с добавлением кусочков свежих фруктов. Полдник – стакан молока с медом и вода с чайной ложкой лимонного сока. Ужин – кусочек отварной или приготовленной на пару рыбы со свежим овощным салатом. Перед сном рекомендовано выпить стакан кефира.

Такая диета моделей — 2-4 кг 3 дня – эффективный способ снизить вес без острого ощущения голода и дискомфорта. Снижение веса происходит за счет употребления достаточного количества жидкости и не слишком калорийной пищи. Такой метод используют многие модели и достигают при этом отличных результатов.

Блиц-диета

Еще одни вариант экстренного похудения за три дня – блиц-диета топ моделей. В этом случае меню имеет большее разнообразие продуктов, за счет чего считается более щадящим и менее вредным для организма. Результат применения данного метода – снижение веса на 1-2 килограмма за 3 дня.

Итак, меню на один день включает:

• Завтрак: два вареных яйца, 50 г мяса (отварного), гренка с небольшим количеством сливочного масла, чай.
• Ланч: исключительно чай.
• Обед: 100 г мяса или рыбы (продукты можно перемежать в течение трех дней), 300 г салата (листовой зеленый салат, бобы и оливковое масло), пару любых фруктов, горячий чай.
• Полдник: чай.
• Ужин: 300 г салата из свежих зеленых овощей, два кусочка хлеба и чай. Выпить кружку горячего чая также следует непосредственно на ночь.

Лучше отдать предпочтение зеленому или чаю из трав, иногда можно заменять его на слегка подогретую воду. Такая диета моделей отзывы имеет положительные, поскольку достигается отличный результат и при этом удается избежать чувства дискомфорта. Предлагаемые продукты являются низкокалорийными, за счет чего и происходит снижение веса. Основные блюда имеют белковое происхождение, что позволяет бороться именно с лишним жиром, а не просто снижать мышечную массу. Наличие в меню углеводов позволяет не терять чувства бодрости и энергию на протяжении всех трех дней.

Противопоказания

Все вышеперечисленные диеты моделей – самые эффективные, в тех случаях, когда срочно необходимо избавиться от нескольких килограмм. Но, прежде чем решиться на данный шаг, нужно сопоставить ожидаемые результаты с возможными рисками для собственного здоровья. При наличии каких-либо заболеваний лишение организма питательных веществ, даже на короткий срок, может привести к весьма негативным последствиям. Решение быстро похудеть обязательно должно быть взвешенным и обоснованным.

Диета топ моделей – это испытание для организма, поэтому прежде чем начать процесс похудения, следует проконсультироваться со специалистом-диетологом и выяснить, нет ли возможных противопоказаний к вышеперечисленным диетам.

При наличии проблем с желудком, а также любых хронических заболеваний, особенно в период их обострений, применение методов принудительного похудения категорически запрещается.

Отзывы о диете моделей

Прежде чем применить диету моделей, отзывы и результаты все-таки рекомендуется обсудить с диетологом. Начинать процесс похудения следует с особой осторожностью и при полной уверенности в собственном здоровье. Методы экстренного похудения основаны на приеме низкокалорийной пищи небольшими порциями. Недостаток питательных веществ в ежедневном рационе на протяжении длительного периода времени может отрицательно сказаться на работе всех внутренних органов.

Предлагаемые диеты моделей отзывы имеют положительные. Преимуществом данных методов быстрого похудения является возможность избавления от лишних килограммов за короткий промежуток времени и в связи с этим, отсутствие вероятности нанесения существенного вреда здоровью. Соблюдение трехдневной жесткой диеты – наиболее безопасный способ устранения лишнего веса. В противном случае имеется риск ощутимо подорвать здоровье.

Кратковременная диета моделей, отзывы и результаты вызывает положительные, при условии соблюдения основных правил и сроков «голодания». Большинство топ-моделей прибегают к кратковременным диетам для скорейшего снижения веса, но после окончания диеты важно не нарушать правила рационального питания.

Согласно статистическим данным, около 30% опрошенных девушек, которые прибегали к жестким мерам похудения, смогли сохранить полученный результат и около 50% набрали несколько килограмм, но при этом вернулись к прежним показателям веса, которые были у них до начала «голодания».

Помимо способов экстренного похудения, не менее популярной является диета для моделей 7 дней – такой метод более продолжителен по времени, но менее вреден для организма. Какой именно диете – трехдневной или недельной отдавать предпочтение, выбирать должна только сама модель.

 

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:

Как быстро похудеть за 3 дня. Срочно похудеть – диета на три дня

Для тех, кто обладает отменным здоровьем и недостаточной силой воли, чтобы придерживаться длительного режима питания, существуют экспресс-диеты, позволяющие похудеть за 3 дня на несколько килограмм. Как правило, они предполагают довольно жесткие ограничения рациона. Потеря веса происходит за счет вывода излишней жидкости из организма и уменьшения размера желудка, который при обычном образе жизни часто перерастянут: после выхода из диеты уже не хочется есть прежними огромными порциями.

Диеты, позволяющие быстро похудеть за 3 дня, довольно тяжелы для организма, поскольку они ограничивают употребление многих продуктов, содержат минимум витаминов и дают большую нагрузку на органы пищеварения.

Как быстро похудеть за 3 дня. Кефирные вариации

Монодиета
Как ясно из названия, в этой диете используется только один продукт – кефир, – который и надо употреблять все 3 дня. Сам по себе кефир – полезнейший продукт, благоприятно влияющий на кровеносную, нервную, пищеварительную системы. Регулярное употребление этого продукта позволяет оздоровить организм, улучшить состояние волос, кожи, ногтей.

При соблюдении кефирной диеты каждый день вам придется выпивать по 1-1,5 литра свежего кефира без сахара и соли. Возникающее чувство голода перебивают порцией кефира, а весь дневной объем делят на 5-6 приемов. Если кажется невыносимым три дня питаться одни кефиром, можно добавить в рацион фрукты и овощи в количестве, достаточном для утоления чувства голода. Объем потребляемого кефира остается неизменным, 1-1,5 литра в день.

Диета позволяет похудеть за 3 дня на 3-4 килограмма.

Как похудеть за 3 дня. Зимняя диета

Этот режим питания так же рассчитан на 3 дня, а повторять диету рекомендуется не чаще раза в месяц.

Примерное меню (на выбор):

Завтрак
– кофе с молоком, омлет или яичница из 2 яиц, салат из кислой капусты;
– чай с медом, порция манной каши, 1 яйцо, ломтик хлеба с маслом.

Второй завтрак
– стакан свежего кефира;
– яблоко, ломтик нежирного сыра

Обед
– порция куриного супа, овощной салат, ломтик хлеба
– порция грибного супа, тушеная капуста с мясом

Полдник
– 2 печеных яблока
– стакан свежего кефира

Ужин
– жареная рыба с печеным картофелем, чай
– морковная запеканка с черносливом, чай с медом.

«Срочно похудеть»

Ещё один экстремальный режим питания имеет говорящее название: диета «Срочно похудеть». В этом режиме питание все три дня одинаковое: позволяется на завтрак съедать сваренное всмятку яйцо (без хлеба и соли). Через 3 часа можно съесть 150 гр. обезжиренного творога без соли и сахара, который запивают чаем. Ещё через 3 часа повторить 150 гр. творога с чаем и до следующего утра ничего не есть. Приветствуется обильное питье – обычная или минеральная вода.

Трехдневная диета

При этой диете неделя разбивается на три «голодных» и четыре «сытных дня». Она низкокалорийна, но достаточно сбалансирована, за счет чего довольно легко переносится. Поэтому такой режим питания можно соблюдать несколько недель подряд до достижения желаемого результата.

Голодные дни переносятся проще с мыслью о том, что скоро последуют дни с нормальным питанием. В «сытные» дни позволены все продукты, однако следует питаться умеренно, чтобы оставалось легкое чувства голода.
Примерное меню на 3 дня:

Завтрак
– чай или кофе без сахара, кусочек хлеба с 2 ст.ложками варенья;
– чай или кофе без сахара, 1 яйцо, кусочек хлеба;
– чай или кофе без сахара, 5 галет или крекеров, ломтик нежирного сыра.

Второй завтрак
– половинка грейпфрута;
– 1 банан;
– 1 яблоко.

Обед
– 100 гр. нежирной курятины без кожи, обжаренной с соевым соусом. По 1 стакану отварной зеленой фасоли и свеклы;
– 2 сосиски, стакан диетического борща, 1 стакан вареной моркови или брокколи, ломтик хлеба;
полстакана консервированного тунца или 200 гр.обжаренной курицы, 1 кусочек хлеба, по 1 стакану вареной свеклы и цветной капусты (или брокколи).

Полдник
– полбанки консервированного в масле тунца, 1 кусочек хлеба, 4 редиски;
– стакан творога, 5 галет или крекеров, укроп, 4 редиски;
– вареное яйцо, 1 кусочек хлеба, 1 огурец в любом виде и 4 редиски.

Ужин
– 1 яблоко;
– чай с 2-мя черносливинами;
– кусочек дыни.

Во все дни диеты следует соблюдать питьевой режим: не менее 6-8 стаканов кипяченой или минеральной воды в день.

Похудеть за 3 дня. Экспресс-диета

Позволяет срочно похудеть на 3-5 кг, но только тем, кто полностью уверен в своем хдоровье, особенно в пищеварительном тракте.

Утро
– натощак 150 мл. кипяченой воды + 1 ст.ложка меда + 5-7 капелек лимона. Смешать, выпить и подождать минут 10-15. Затем можно выпить чашку чая или кофе.

Обед
– до 500 гр. отварной нежирной курицы или индейки с вареными овощами.

Ужин
– залить 150-200 гр. капусты 150 мл.воды и отварить в течение 15-20 минут без соли и специй. Неспешно выпить отвар за 30-40 минут. Если сильно хочется есть, перед самым сном «доужинать» стаканом кефира.

Срочно похудеть за 3 дня. Виноградная монодиета

Сидя три дня на одном только винограде можно сбросить 2—3 килограмма. Все дни придется питаться только им, изо дня в день увеличивая порции. В первый день необходимо съесть полкило винограда, во второй – полтора килограмма и в третий – два кило. Весь объем разделен на равные части и принимается каждый 2 часа независимо от охватившего чувства голода.
Каждый день надо выпивать не менее 1,5 литров воды, на другие продукты и напитки наложен запрет.

Срочно похудеть – диета на три дня

И, наконец, довольно приятная диета. Приятна она тем, что не придется все три дня впихивать в себя один и тот же продукт, который и видеть-то уже не хочется. Здесь каждому продукту уделено по 1 дню:
1 день – вареный рис без соли и без масла. Ограничений по количеству нет, но съесть много несоленого постного риса будет сложновато.
2 день – вареная куриная грудки без кожицы – ок. 500 грамм на весь день.
3 день – зеленые яблоки и яблочный сок.

Александра Стимбан

Быстро похудеть за неделю »

Как быстро похудеть к Новому году. 3 эффективные экспресс-диеты, их плюсы и минусы

03 декабря 2020, 17:43

Кто из нас не хочет быстро похудеть к Новому году? Диетологи предупреждают: стремительно худеть вредно! Но что делать, если за оставшиеся недели до Нового года надо срочно сбросить вес? Предлагаем 3 экспресс-диеты – учти плюсы и минусы.

Freepik

Имей в виду, сбросить 10 килограммов за пару недель или даже за месяц все равно не получится – во всяком случае без риска для здоровья. Но подтянуть фигуру к Новому году и влезть в платье на размер меньше вполне реально.

Диета «Шесть лепестков»

shutterstock

Название этой диеты – по количеству дней, которые она длится. В каждый день-«лепесток» можно есть определенную группу продуктов.
В первый – 300–500 г тушеной или запеченной рыбы.
Во второй – 1–1,5 кг любых овощей (кроме картошки). Ешь их в салатах, туши или готовь на пару.
Третий день: в меню – источники протеинов. 500 г куриного филе (приготовленного на пару или запеченного) раздели на завт­рак, обед и ужин.
Четвертый день – злаковый. Приготовь кашу из 200 г любой крупы. Растяни это количество на 3 приема пищи.
Пятый – творожный. Ешь нежирный творог (500 г за целый день) без сметаны и сахара.
И наконец, шестой день – фруктовый. Разрешается 1–1,5 кг любых фруктов, кроме бананов и винограда.

Плюсы диеты: она довольно сытная, так что ты не будешь чувствовать голод. За 6 дней реально похудеть к Новому году и потерять 4–5 кг.

Кефирно-гречневая диета

shutterstock

Рассчитана на 3 дня. Приготовься к тому, что рацион будет очень скудным. В основе гречневой диеты – всего 2 ингредиента: кефир и гречка. Вечером перед сном залей стакан гречки двумя стаканами кипятка и укутай плотной тканью. К утру получится вкусная рассыпчатая каша (без соли и сахара!). Это твое основное блюдо на целый день. На второй завтрак, полдник и перед сном пей по стакану 1%-ного кефира. Небольшое послабление: если почувствуешь сильный голод, а на гречку смотреть сил нет, можно позволить себе яблоко или грейпфрут.

shutterstock

Плюсы диеты: гречка и кефир очень полезные. В гречке – чуть ли не половина таблицы Менделеева. А кефир помогает наладить работу ЖКТ. За 3 дня диеты можно сбросить до 3 кг.

Апельсиновая диета

shutterstock

Разгрузка на цитрусах длится всего 2 дня. Конечно, на одних апельсинах непросто протянуть и это время. Но и не нужно! Как вариант, предлагаем такое меню: на завтрак – яйцо, сваренное вкрутую, 100 г хлеба из муки грубого помола с сыром или йогуртом. Плюс апельсин (апельсины можно заменить мандаринами или другими цитрусами). На обед – 100 г отварной куриной грудки и салат из 100 г риса (без соли) и мякоти апельсина. Заправь салат 1 ст. л. растительного масла и посыпь зеленью. На ужин – фруктовый салат.

Плюсы диеты: благодаря содержанию витамина С цитрусы помогают не заболеть в сезон ОРВИ. За счет снижения калорийности за 2 дня можно сбросить до 2 кг и быстро похудеть к Новому году.

Минусы быстрых диет

Диетолог не рекомендуют увлекаться монодиетами. За несколько дней такого экспресс-марафона, как ни крути, организм не получит важные микронутриенты. А это может привести к дефициту питательных веществ. К тому же после возвращения к обычному рациону вес часто возвращается. Из трех предложенных диет наиболее сбалансированная – «Шесть лепестков». Но она может быть неполезна людям с проблемами ЖКТ. Апельсиновая диета противопоказана аллергикам. Кстати, даже у людей, не склонных к аллергии, избыток цитрусов может дать толчок к развитию пищевой непереносимости.

В любом случае экспресс-диета к Новому году – это экстренная мера, к которой стоит прибегать только в исключительных случаях. Но ведь Новый год – как раз тот случай! Поэтому, если очень нужно быстро похудеть на пару килограммов перед праздником, выбирай вариант, который больше тебе подходит, и садись на диету. А о результатах пиши нам в комментариях.

 

Мнение редакции может не совпадать с мнением автора статьи.

Как похудеть за 3 дня на 3 кг

Как быстро похудеть на 3 кг

Нужно срочно похудеть?

Не спрашиваю, зачем! Понимаю: надо – значит надо. Сразу же перехожу к делу.

Содержание:

День первый
День второй
День третий
День первый
День второй
День третий
Меню овощного дня
Меню фруктового дня

Главные принципы экспресс-похудения:

• Пить много воды (до 3 литров)
• Добавлять минимум соли и сахара
• Не пить ни грамма алкоголя.

Давайте посмотрим, как же можно  быстро сбросить вес и похудеть, без сложностей, на 3 кг. Вот быстрая, лёгкая, эффективная монодиета и её 3 варианта, которые позволят вам похудеть на 3 кг, меньше, чем за неделю. А именно, диета вам поможет за 3 дня, её ещё называют “экстренная”. С одной стороны, диета требуют жесткого соблюдения режима питания. С другой стороны, я постаралась выбрать для вас наиболее эффективные способы на 3 дня, которые не нанесут вред вашему здоровью. Да и голодать вам не придется.

Вариант первый. Диета на 3 дня на ряженке.

Быстрая диета 5 кг за 3 дня: отзывы

День первый

• Завтрак: половина стакана ряженки, ломтик дыни
• Обед: 100 грамм фруктового салата, заправленного100-150мл ряженки.
• Ужин: Половина грейпфрута, 100г отварной грудки курицы (индейки), салат из овощей.
• На ночь: половина стакана ряженки.

День второй

• Завтрак: половина стакана ряженки, 200 г мюсли или овсяных хлопьев, залитых водой.
• Обед: ломтик ананаса.
• Ужин: 1 мандарин или половинка апельсина, 200г отварной куриной грудки, листья салата.
• На ночь: половина стакана ряженки.

День третий

• Завтрак: 1 стакан ряженки, долька дыни или арбуза (150г).
• Обед: 150 г любых ягод, 1 банан, стакан яблочного сока.
• Ужин: 200 г отварной нежирной рыбы, 100 г свежей белокочанной капусты.
• На ночь: 1 стакан коктейля из ряженки и ягод.

Прошло всего три дня, а вы уже стройнее на 3 кг.

Вариант второй. Диета на 3 дня на основе гречневой каши и кефира.

День первый

• Завтрак: съешьте небольшую тарелочку гречневой кашки. Через полчаса побалуйте себя половинкой грейпфрута.
• Обед:150 г отварной куриной грудки, 200 г овощей (приправить можно лимонным соком).
• Полдник: нежирный йогурт, лучше натуральный, без сахара.
• Ужин: 150 г нежирной рыбы с вареной брокколи. Брокколи – очень полезна, и на ее переваривание энергии затрачивается больше, чем в ней содержится калорий.
• Перед сном выпейте стаканчик нежирного кефира и с легкостью ложитесь спать, ведь вы уже весите на 1 кг меньше.

День второй.

• Завтрак: опять же вас ждет тарелочка вкусной гречневой каши, а через полчаса – одно наливное яблочко.
• Обед: 150 г отварной курицы и овощной салат
• Полдник: нежирный йогурт.
• Ужин: 150 г нежирной рыбки скушайте вместе с хрустящим и сочным болгарским перцем.
• Перед сном выпейте нежирный кефир.

Поздравляю! Вы сделали это. Уже минус 2 кило.

День третий

• Завтрак: тарелку гречки, а через полчаса киви.
• Обед: 150 г нежирной рыбы и болгарский перчик.
• Полдник: чайная ложка меда и вода с соком лимона.
• Ужин: 150 г отварной курицы и 150 г брокколи.
• Перед сном выпейте победный стакан кефира.

Монодиета на 3 дня закончилась! Вставайте на весы и наслаждайтесь результатом.

Вариант третий. Вегетарианская диета на 3 дня.

Как сбросить вес вегетарианцу? Если вы не кушаете мясо, воспользуйтесь диетой, основанной на овощах и фруктах. Эта лёгкая диета поможет вам   похудеть, если вы вегетарианец. Она быстрая и расчитана на несколько дней, а именно, 3 дня. Первый и третий дни – овощные. А между ними – фруктовый. Это эффективная фруктово-овщная диета, помогла  быстро сбросить вес многим женщинам. Её могут использовать с целью похудеть на 3 кг, не только вегетарианцы. Отсутствие мяса никак не навредит а эффект  вы увидите сразу – за 3 дня вы с успехом сбросите пару килограмм.

Как быстро похудеть на 5 кг за 3 дня

Меню овощного дня.

• Завтрак: любой овощной сок (например, морковный), четыре запеченных в духовке помидора, зеленый чай с лимоном. Вы можете к морковному соку добавить 100 мл сока стеблей сельдерея. Сельдерей невероятно полезен и усилит эффект похудения за счет ускорения обмена веществ и выведения шлаков из организма.
• Обед: салат из свежих огурцов и зеленого лука. Вместо лука вы можете добавить любые салатные листья. После этого выпейте чашечку натурального черного кофе или зеленый чай с лимоном для тонуса и бодрости.
• Ужин: сезонные  овощи, приготовленные на пару или отваренные без соли, зеленый чай с лимоном.

Меню фруктового дня.

• Завтрак: фруктовый салат из яблок, половинки апельсина и одного грейпфрута, очищенных от пленок, чашечка черного натурального кофе или зеленый чай с лимоном
• Обед и ужин: половинка маленькой дыни, фруктовый салат.

Поздравляю! Экстренная диета закончилась. Вы похудели на 3 кг за 3 дня.

Как похудеть за 3 дня: быстрые диеты, рекомендации, отзывы

11 августа 2016 13751

Срочно нужно скинуть пару килограммов за короткий срок, например, к какому-нибудь праздничному событию, к встрече, к свиданию? Оказывается, это достаточно просто.

Существуют многообразные диеты, которые способны за 3 дня избавить от лишнего веса. Но ими лучше всего пользоваться, только если это действительно нужно срочно.

Кроме этого, необходимо строго следовать инструкции диетического питания, тогда действительно можно избавиться от нескольких лишних кило.

Суть, принципы и особенности быстрых методов для похудения

Диета на 3 дня – это питание, которое направлено на очистку организма от вредных веществ и токсинов. В процессе очищения ускоряется обмен веществ, который, в свою очередь, способствуют сжиганию лишнего жира.

Обязательно нужно выполнять определенные правила во время трехдневного диетического питания:

1. Постепенное похудение. Стоит помнить, что быстрое похудение — это большой стресс для организма. Поэтому лучше его подготовить заранее, что бы он адаптировался. Лучше за пару дней до диеты начать пить больше жидкости и сократить объемы потребляемой пищи;
2. На быструю диету следует садиться только при условии, если лишний вес действительно есть. Иначе вместо похудения, можно нанести вред организму и здоровью;
3. В период диеты не стоит расслабляться и уж тем более срываться;
4. Стоит помнить, что мы так уж устроены, что как только мы садимся на диету сразу же начинаем думать о еде. Лучше отвлекать себя — почаще гулять, смотреть фильмы, передачи, заниматься какими-нибудь делами;
5. Обязательно правильно входите в диету и выходите из нее;
6. Не забывайте, что диеты доставят положительный результат, только если их совмещать со спортом. Во время диет нужно каждый день выделять хотя бы полчаса на выполнения физических упражнений – бег, пресс, прыжки и так далее;
7. Дополнительно по вечерам можно посещать баню, сауну. Эти процедуры повышают выведению лишней жидкости из организма;
8. Не забывайте, что быстрые диеты подходят не всем. Не стоит худеть таким методом, если имеются заболевания – сахарный диабет, нарушения в работе желудочно-кишечном тракте, заболевания сердца и сосудов.

Как быстро похудеть за 3 дня: обзор самых лучших диет

Голодание

Первый этап — разгрузочный

Этот этап имеет огромное значение, он обеспечивает подготовку организма к последующим дням диеты. Поэтому, чтобы он принес желаемый результат, из меню следует исключить всевозможные жиры животного происхождения и белки:

• Сырную продукцию;
• Творог;
• Мясо птицы;
• Баранье мясо;
• Говядину;
• Свинину;
• Мясо кролика;
• Сливочное масло;
• Кефир;
• Молоко;
• Сливки и сметану;
• Рыбу и морские продукты.

Желательно ограничить употребление бобовых культур, мучных изделий, выпечки.

Меню первого дня:

1. Завтрак. Сразу после сна на голодный желудок следует выпить стакан минеральной воды без газа. Через 15-20 минут можно приступать к завтраку. На завтрак можно выбрать один напиток из трех – травяной чай из крапивы, липы и ромашки, зеленый чай или свежевыжатый сок из огурца, моркови, капусты или свеклы;
2. Обед должен состоять только из свежих фруктов и овощей. Из овощей или фруктов можно приготовить салаты, но в овощные салаты не стоит добавлять соль и масло. Лучше всего их заправить лимонным соком. Также овощи можно запечь в духовке, на пару или потушить. Не стоит кушать – бананы, тушенную или отварную морковь, картофель;
3. На полдник можно скушать какой-нибудь овощ или фрукт. Главное чтобы последний прием пищи был не позднее 7 часов вечера;
4. На ужин можно выпить какой-нибудь напиток, который употреблялся на завтрак.

Перед сном можно принять теплую ванну с морской солью. Она поможет расслабиться и также ускорит выведение из организма вредных токсических веществ.

Когда желание похудеть становится целью номер один, то даже те продукты, на которые вы особо не обращаете внимания, но имеете их дома, могут вам помочь. Способы применения яблочного уксуса для похудения. Вот такой невидимый, но очень даже эффективный помощник!

А здесь читайте про клетчатку для похудения. Виды, инструкция по применению, противопоказания и отзывы.

Тянет на сладкое? Перекусите батончиком Турбослим и фигура останется в порядке. В данной статье более подробно об этой продукции, а также отзывы худеющих.

Второй этап – водное очищение

В этот день потребуется запастись большим количеством воды. За весь день необходимо выпить от 3 до 4 литров воды. Кроме воды, больше ничего употреблять нельзя. В течение всего дня каждые полчаса следует выпивать по стакану воды.

Для того чтобы этот этап было проще перенести, рекомендуется соблюдать определенные правила:

• В течение всего дня не заходите на кухню. Эта комната должна стать запретной зоной;
• Желательно постоянно себя отвлекать от мыслей о еде. Лучше сходить погулять на свежий воздух, посмотреть любимый фильм, заняться каким-нибудь интересным делом;
• Если к концу дня возникнет головная боль, не стоит пугаться, это нормальная реакция. Лучше не принимать обезболивающие средства, а постараться перетерпеть это состояние;
• Перед тем как отправиться спать, желательно принять теплую ванну. Она расслабит все мышцы, снимет стресс, расширит кровеносные сосуды;
• Прямо перед сном следует выпить стакан энергетического напитка. В стакане воды нужно развести ложку лимонного сока и 1,2 ложку меда.

Третий этап – выход из голодания

К этому этапу желудок уже должен уменьшиться в размерах, а это значит, для того чтобы насытиться, достаточно съесть небольшое количество пищи. Меню этого этапа:

1. На завтрак следует выпить стакан травяного или зеленого чая. Через 1,5-2 часа можно выпить стакан свежевыжатого огуречного, капустного, морковного или свекольного сока;
2. На обед, полдник и ужин следует кушать продукты богатые клетчаткой. Именно эта пища способна быстро очистить организм от вредных веществ. Приготовьте салат из белокочанной или морской капусты, моркови, свеклы. Желательно сделать побольше, чтобы его хватило на весь день. Приправить все следует соком лимона и несколькими каплями растительного масла. Запивать все следует водой и травяным чаем.

За весь период диеты можно скинуть от 3 до 6 килограмм.

Морковно-яблочная диета

Это питание достаточно эффективное, но все такие имеет небольшие сложности для желудочно-кишечного тракта.

Если все соблюдать правильно, то диета способна за 3 дня избавить до 6 килограмм. Однако выдержать ее могут только люди с крепкой пищеварительной системой.

Снижение массы тела в этом диетическом питании осуществляется за счет жесткого очищения пищевода.

Жесткие волокна яблок и моркови, попадая в желудок, разбухают и тем самым вызывают чувство сытости. Тем временем происходит полная очистка желудочно-кишечного тракта от вредных веществ и отложений.

Меню диеты должно состоять из двух блюд:

1. Салат из моркови и яблок;
2. Пюре из моркови.

Салат из моркови и яблок следует готовить в протертом виде. Пюре — отварную морковь нужно перетереть через сито. Салат можно кушать в неограниченном количестве, пюре – 1 раз в день. Также необходимо пить как можно больше воды.

Кефирная методика

Это самая известная монодиета, которая обладает высокой эффективностью. Кроме этого, она достаточно простая, поэтому ее соблюдение не вызовет особых трудностей. В течение одного дня нужно выпивать от 1,5 до 2 литров кефира, кроме кефира кушать ничего нельзя.

В течение трех дней следует пить один кефир до 2 литров каждый день. За весь период диеты на кефире можно скинуть от 3 до 5 килограмм.

В холодное время года, кроме употребления кефира, разрешается пить горячий чай с имбирем и мятой. Чай можно пить 3 раза в день.

Это нужно для того, чтобы избежать переохлаждения организма, которое может привести к различным простудным заболеваниям. А также имбирь обеспечит ускоренное похудение, потому что он обладает жиросжигающим эффектом.

Как похудеть в ляшках (ногах) за 3 дня

Для того чтобы бедра быстро пришли в форму, следует в течение 3 дней выполнять комплекс упражнений:

• Нужно встать прямо, голову поднять вверх, руки положить на пояс, ноги расставить на ширине плеч. Медленно поднимаемся на цыпочки, затем опускаемся. Выполняем это упражнение 20-40 раз;
• Упражнение для внутренних мышц бедер. Берем мячик, сильно его зажимаем между бедрами и отпускаем. Выполняем это 15-20 раз;
• Ложимся на правый бок, правая рука находится в прямом положении под головой. Левую руку кладем на талию. Поднимаем прямую ногу вверх и опускаем. Выполняем по 15-20 подъемов на каждую ногу;
• Ложимся на пол на спину, ноги приподнимаем от пола на 30 см. Затем разводим ноги в стороны и снова сжимаем. Выполняем упражнение 10 раз;
• Садимся на пол, ноги прямые. Нагибаемся вперед и пытаемся достать руками кончики пальцев ног. Делаем упражнение 5-10 раз.

Советы и рекомендации

• Для достижения желаемого результата обязательно соблюдайте правила диет;
• Не срывайтесь и не расслабляйтесь;
• Больше выходите гулять на свежий воздух;
• Не забывайте про физические упражнения;
• Больше пейте жидкости, она ускоряет обмен веществ и очищает организм от вредных веществ;
• Кушайте часто, но небольшими порциями.

Отзывы

Мне нужно было к празднику срочно похудеть. Решила воспользоваться кефирной диетой. Сидела на ней 3 дня. Для меня она показалась сложной. Но все-таки мне удалось скинуть 4 килограмма.

Кристина, 27 лет

Давно хотела иметь красивые бедра, но никак не удавалось похудеть в этом месте. Решила воспользоваться упражнениями для похудения бедер. Правда, я ими занималась не 3 дня, а 7 дней. Да, действительно, помогают. Теперь хочу посидеть на кефире дня 3, чтобы закрепить результат.

Людмила, 29 лет

Сидела на голодной диете. Для меня она показалась слишком тяжелой. Но я ее выдержала. В результате за 3 дня я скинула 5 килограмм, для меня это настоящая победа!

Светлана, 22 года

Быстрые диеты – это сильнейший стресс для организма. Их использовать следует только в самых крайних случаях, когда это действительно нужно. Да и сидеть на них чаще 2-3 раз в год не нужно. Лучше всего использовать длительные диеты, они доставят хороший результат, и скинутые килограммы не вернутся.

Врач-диетолог Лидия Антоновна

Диета на 3 дня – это хороший способ для похудения к какому-либо событию, празднику, свиданию. Обязательно во время диетического питания нужно строго придерживаться меню и правилам диеты.

А также не забывать про физические упражнения, теплые ванны и прогулки на свежем воздухе. В результате вы сможете за 3 дня привести свое тело в желаемую форму.

Оценить статью:

7

Facebook

Twitter

Вконтакте

Одноклассники

Google+

Что еще почитать:

DR МАЙКЛ МОСЛИ: Настоящая причина того, что так много диет не работают

В Великобритании одни из самых высоких показателей ожирения в мире, и с тех пор, как Борис Джонсон столкнулся с Covid-19, появилось множество инициатив по борьбе с этим заболеванием. проблема.

Сюда входит недавно объявленный план выдачи талонов на одежду людям с избыточным весом и бесплатных поездок в тематические парки, если они достигнут определенных целей в отношении здоровья.

Но сколько из этих инициатив действительно изменит ситуацию? Боюсь, их слишком мало.

Возьмем, к примеру, план по снижению веса NHS, который вы можете бесплатно загрузить в виде приложения на свой телефон.

Это круто, и на его разработку явно потрачено много денег. Но эффективно ли оно помогает людям похудеть?

Нам давно известно, что диеты с низким содержанием жиров – не лучший способ похудеть или улучшить здоровье

Если вы хотите сбросить приличное количество веса, становится все более очевидным, что стандартная медленная диета – не лучший способ похудеть. и – стабильная диета с низким содержанием жиров и высоким содержанием углеводов вряд ли приведет к успеху.

Ответ, согласно недавнему исследованию Оксфордского университета, – решительное «нет».

Для исследования ученые набрали 512 пациентов со средним индексом массы тела (ИМТ) 35, что поместило их в категорию «страдающих ожирением», и случайным образом распределили их по одной из трех программ по снижению веса: План снижения веса NHS. , Slimming World Online (который предлагает стандартные советы по контролю калорий) и Rosemary Online (который больше не существует).

Была также контрольная группа, которую попросили продолжить как обычно.

Участники должны были придерживаться назначенной им программы в течение восьми недель, а затем сообщить, сколько веса они потеряли.

Результаты неутешительные. Люди, следующие плану NHS, потеряли в среднем менее 3 фунтов (1,3 кг), что было примерно таким же, как и в контрольной группе, в то время как те, кто был направлен в Slimming World, потеряли 3,7 фунта (1,7 кг), а те, кто следовал за Rosemary Online, потеряли 5 фунтов ( 2,3 кг).

Принуждение пациентов к выполнению этих программ, как пришли к выводу исследователи, в лучшем случае «лишь незначительно лучше, чем отсутствие вмешательства».

Так почему же изменения были такими незначительными? Я скачал приложение NHS и посмотрел.

Есть много разумных советов, и я фанат его бесплатных программ упражнений, но я был разочарован, увидев, что многие из предложенных рецептов действительно содержат мало жиров и много углеводов.

Что касается молочных продуктов, мы рекомендуем использовать обезжиренное молоко и обезжиренный йогурт для похудения.

Однако мы давно знаем, что диета с низким содержанием жиров – не лучший способ похудеть или улучшить здоровье.

В исследовании под названием Predimed 7 447 испанцев с избыточным весом были случайным образом распределены либо на диету с низким содержанием жиров, либо на средиземноморскую диету, где они получали 40 процентов своих калорий в виде жира, в основном жирной рыбы, орехов, оливкового масла и молочные продукты.

Испытание должно было длиться шесть лет, но было прекращено досрочно, потому что те, кто придерживался средиземноморской диеты с высоким содержанием жиров, чувствовали себя намного лучше: на 30 процентов меньше сердечных приступов и инсультов и на 50 процентов снизился риск развития типа 2. диабет, по сравнению с теми, кто придерживается диеты с низким содержанием жиров.

Другие исследования также показали несостоятельность подхода с низким содержанием жиров.

В испытании по изменению диеты в рамках Инициативы по охране здоровья женщин, начавшемуся в 1993 году, участвовали 48 000 американских женщин, которых случайным образом распределили либо на диету с низким содержанием жиров, либо на сохранение своих обычных привычек питания.

Те, кого попросили пойти с низким содержанием жира, получили всестороннюю консультацию и поддержку. И, ура, им удалось значительно сократить потребление жира.

Но когда испытание было остановлено через восемь лет, те, кто перестал потреблять жир, были не более здоровыми, чем контрольная группа, когда дело касалось потери веса, сердечных заболеваний или рака.

Что касается молочных продуктов, не только не существует убедительных доказательств того, что нежирные версии более полезны для здоровья, но и появляется все больше свидетельств того, что полножирные версии лучше для вас.

В исследовании, опубликованном в прошлом месяце, шведские исследователи оценили влияние употребления жирных молочных продуктов на более чем 4500 добровольцев среднего возраста.

Чтобы точно измерить, сколько они потребляли, добровольцы проверили кровь на уровни двух жирных кислот, называемых гептадекановой кислотой и транс-пальмитолеиновой кислотой, которые содержатся почти исключительно в молочных жирах.

Тогда за волонтерами наблюдали более 16 лет.

Оказалось, что у крупнейших потребителей жирных молочных продуктов самый низкий уровень сердечных приступов и инсультов.

Другие исследования показали, что люди, которые едят жирные молочные продукты, обычно худеют и реже страдают ожирением, чем те, кто этого не делает.

План снижения веса NHS, который вы можете бесплатно загрузить в виде приложения на свой телефон. , это гладко, и на его разработку явно было потрачено много денег

Как отмечают исследователи, это не было случайностью, потому что их результаты аналогичны результатам других исследований с участием более 42000 человек, проведенных в странах, в том числе U.С., Великобритания и Дания.

Что касается веса, то другие исследования показали, что люди, которые едят жирные молочные продукты, обычно худеют и реже страдают ожирением, чем те, кто этого не делает – вероятно, потому, что жир более насыщает, чем углеводы.

Хотя, к сожалению, это не дает вам права есть огромное количество сыра.

Однако, если вы хотите прилично похудеть, я имею в виду половину камня или больше, тогда становится все более очевидным, что переход на стандартную медленную и стабильную диету с низким содержанием жиров и высоким содержанием углеводов является вряд ли приведет к успеху.

Исследование оксфордской группы, проводившей описанное мною ранее исследование, в котором пациентам предлагалось попробовать низкоуглеводный подход с потреблением 800-1000 калорий, в результате средняя потеря веса за восемь недель составила 9,5 кг. ) и значительное улучшение уровня сахара в крови – изменения, которые были намного больше, чем в контрольной группе, предлагали стандартные рекомендации NHS по здоровому питанию.

Я знаю, что буду делать.

Одна любопытная вещь в старении, если вы мужчина, заключается в том, что, хотя волосы на вашей голове становятся тоньше, ваши брови становятся гуще.

С другой стороны, у женщин брови становятся тоньше.

Кто-то недавно написал мне, комментируя, что мои брови поредели, и беспокоился, что у меня низкий уровень щитовидной железы, а у меня нет.

Так что же происходит? У мужчин это связано с гормоном тестостероном.

Клетки, производящие волосы на бровях, в носу и ушах, с возрастом становятся более чувствительными к тестостерону, в результате чего волосы растут быстрее и толще, а волосковые клетки на нашей голове начинают сокращаться.

Результатом, как правило, является облысение, взъерошенные уши и много волос в носу.

У женщин ключевую роль играет эстроген, а по мере того, как его уровень падает после менопаузы, падает и рост волос.

Ничто из этого не объясняет, почему у меня редеющие брови и много волос на макушке. Но я не жалуюсь.

Сколько времени прошло до того, как у человека появятся почки от свиньи?

Как бы вы относились к пересадке сердца или почек от свиньи?

Эта возможность приблизилась недавно, когда NYU Langone Health в Нью-Йорке объявило, что почка свиньи, прикрепленная к пациенту-человеку, может образовывать и фильтровать отходы, не будучи отвергнутыми.

Эта операция была очень необычной: у пациента был мертвый мозг, а «донор» свиньи был генетически модифицирован, чтобы сделать его части тела более совместимыми с нашими.

За последние 30 лет мы заменили вышедшие из строя сердечные клапаны человека на клапаны сердца свиньи, поскольку сердце свиньи примерно того же размера, веса и структуры, что и человеческое.

Но мечта заключалась в том, чтобы пойти дальше и использовать свиней в качестве источника основных органов, таких как сердце или почки.

Как бы вы относились к пересадке сердца или почек от свиньи?

Это вызвано острой потребностью в дополнительных органах.В Великобритании более 6 100 человек ждут трансплантации органов, в том числе 4584 человека – почки.

Нехватка настолько остра, что однажды я столкнулся со случаем, когда отец отдал обе свои здоровые почки двум своим сыновьям (у которых обе почки отказали), в результате чего ему потребовался диализ.

Помимо заботы о животных, основной проблемой было отторжение органов. Ваша иммунная система распознает почку свиньи как чужеродную и атакует ее.

Свиньи настолько отличаются от нас, что одних препаратов против отторжения будет недостаточно.

Итак, нью-йоркские ученые генетически модифицировали свинью, чтобы ее почки были менее подвержены атаке нашей иммунной системы.

Ведущий хирург говорит, что пройдет год или два, прежде чем они попробуют это на живом пациенте, и гораздо дольше, прежде чем органы свиньи станут более широко доступными.

А пока вы можете помочь, сказав своей семье, что вы хотите стать донором, и записав свое решение онлайн в Реестре доноров органов Национальной службы здравоохранения.

Клинический кандидат на пероральный ингибитор SARS-CoV-2 Mpro для лечения COVID-19.

Инфекции, вызванные коронавирусом человека, являются распространенными, по крайней мере, четыре примера (229E, NL63, OC43, HKU1) в настоящее время считаются эндемичными ( 1 ).· Однако появление за последние 20 лет SARS-CoV-1, ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV) и SARS-CoV-2 как новых коронавирусов человека сигнализирует о значительном потенциале угрозы этого класса вирусов. Катастрофическая вспышка SARS-CoV-2 в 2019 году привела к 235 миллионам подтвержденных случаев COVID-19, вызвавшим более 4,8 миллиона смертей во всем мире по состоянию на октябрь 2021 года. SARS-CoV-2 – это высокоинфекционный бета-коронавирус рибонуклеиновой кислоты (РНК), который может вызвать опасную для жизни вирусную пневмонию в самых серьезных случаях.Несмотря на то, что эффективные вакцины против COVID-19 были разработаны в беспрецедентные сроки, значительное число людей либо неспособны из-за ранее существующих заболеваний, либо не хотят вакцинироваться, и глобальные проблемы доступа остаются. Для инфицированных доступны ограниченные терапевтические возможности. Оральные специфические терапевтические средства против SARS-CoV-2 срочно необходимы для предотвращения более тяжелых заболеваний, госпитализации и смерти. Лечение также может сократить период инфекционности. Переназначение одобренных лекарств в поисках низкомолекулярных противовирусных агентов, нацеленных на SARS-CoV-2, до сих пор было минимально эффективным ( 2 , 3 ).Ингибиторы вирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы, такие как молнупиравир и AT-527, в настоящее время проходят клинические испытания для лечения COVID-19 ( 4 , 5 ). Геном SARS-CoV-2 кодирует два полипротеина (pp1a и pp1ab ) и четырех структурных белков ( 6 , 7 ). Полипротеины расщепляются важнейшей основной протеазой SARS-CoV-2 (M ^pro , также называемой протеазой 3CL) в одиннадцати различных сайтах с образованием более коротких, неструктурных белков, жизненно важных для репликации вируса ( 8 , 9 ).Коронавирус M ^pro представляет собой трехдоменную цистеиновую протеазу, которая имеет каталитическую диаду Cys145-His41, расположенную в щели между доменами I и II. У субстратов M ^pro есть несколько общих черт, включая присутствие остатка Gln в P1 (с использованием номенклатуры Шехтера-Бергера ( 10 )). Ни одна из известных цистеиновых протеаз человека не расщепляется после Gln, что обеспечивает потенциальную селективность для этой вирусной мишени по сравнению с протеомом человека ( 11 – 13 ).Вирусные протеазы являются управляемыми мишенями для низкомолекулярной пероральной терапии при лечении вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ) и гепатита С (HCV) ( 14 , 15 ). Более того, недавний отчет продемонстрировал пероральную активность ингибитора M ^pro на модели трансгенных мышей с инфекцией SARS-CoV-2 ( 16 ). Учитывая ключевую роль SARS-CoV-2 M ^pro в репликации вируса, его потенциал для механистической безопасности и ожидаемое отсутствие проблем с устойчивостью к вариантам спайкового белка, ингибирование SARS-CoV-2 M ^pro представляет собой привлекательный подход с использованием малых молекул. для пероральной противовирусной терапии для лечения COVID-19.Попытка идентифицировать ингибиторы SARS-CoV-1 M ^pro в ответ на вспышку SARS в 2002 году привела к идентификации PF-00835231 ( 1 , рис. 1) как мощного ингибитора рекомбинантного SARS-CoV- 1 M ^pro в анализе расщепления субстрата на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) ( 17 ). PF-00835231 также продемонстрировал сильное ингибирование (константа ингибирования (K _i ) = 0,271 нМ) рекомбинантного SARS-CoV-2 M ^pro , что ожидается с учетом того, что SARS-CoV-1 и -CoV-2 M ^pro имеют 100% гомологию последовательностей на соответствующих сайтах связывания субстрата ( 18 ).Противовирусная активность против SARS-CoV-2 также наблюдалась с PF-00835231 (полумаксимальная эффективная концентрация (EC ₅₀ ) 231 нМ) путем мониторинга цитопатического эффекта (CPE) в эпителиальных клетках Vero E6. Поскольку клетки Vero E6 экспрессируют высокие уровни переносчика оттока P-гликопротеина, для которого 1 является субстратом ( 17 , 19 ), противовирусные анализы в этой клеточной линии проводили в присутствии оттока P-гликопротеина. ингибитор СР-100356 ( 20 ).Экспрессия TMPRSS2 не была обнаружена в клетках Vero E6 с помощью RTqPCR. Фосфатная форма пролекарства (PF-07304814) PF-00835231 в настоящее время исследуется как вариант внутривенного лечения COVID-19 у госпитализированных пациентов ( 20 ).

Рис. 1. Параметры in vitro и in vivo, оптимизированные для идентификации пероральных ингибиторов SARS-CoV-2 M ^pro .

^a Значения K _и соответствовали уравнению Моррисона с субстратом, параметры концентрации K _m и M ^pro зафиксированы на значениях, описанных в дополнительной информации.Данные представляют собой средние геометрические значения с 95% доверительным интервалом (ДИ) и повторяющиеся числа в скобках. ^b EC _{Значения 50} были рассчитаны с использованием данных, нормализованных к контрольным образцам в рамках анализа и подгоняемых к подгонке 4-параметрической логистической кривой (подробности см. В дополнительной информации). Данные представляют собой средние геометрические значения с 95% доверительным интервалом и повторяющиеся числа в скобках. ^c Кажущуюся пассивную проницаемость (P _{приложение} ) от апикального к базолатеральному направлению определяли в клетках с низким оттоком почек собак Madin-Darby (MDCK-LE) ( 21 ). ^d CL _int относится к общему внутреннему клиренсу, полученному по шкале периодов полураспада тестируемых соединений в HLM с добавлением NADPH ( 28 ). Инкубации проводили в течение одного дня в трех повторностях. ^e Фармакокинетические параметры были рассчитаны на основе данных «концентрация в плазме – время» и представлены как средние значения (n = 2–3 самцов крыс Wistar-Han / путь введения). Дополнительные сведения см. В дополнительной информации. ^f Исследования пероральной фармакокинетики проводились в сытом состоянии.Пероральная биодоступность (F) определяется как нормализованная по дозе AUC после перорального введения, деленная на нормализованную по дозе AUC после внутривенного введения. ^г Crystalline 6 вводили перорально в безводной (Форма 1), а также в форме со-сольвата безводного метил-трет-бутилового эфира. ^ч Долю пероральной дозы, абсорбированной из желудочно-кишечного тракта (F _a x F _г ), оценивали с использованием уравнения F _a x F _г = F / (1 – CL _кровь / Q) ( 27 ) (дополнительные сведения см. В дополнительном разделе).Чтобы улучшить низкую пассивную абсорбционную проницаемость (P _{приложение} ⁻⁶ см / с) ( 21 ) и плохое пероральное всасывание 1 у животных, мы стремились удалить донор водородных связей (HBD). фрагмента α-гидроксиметилкетона P1 ‘в 1 (фиг. 2A), поскольку повышенное количество HBD коррелировало с плохой пероральной биодоступностью ( 22 ). С этой целью мы параллельно исследовали две функциональные группы, которые раньше были ковалентными боеголовками для цистеиновых протеаз: нитрилы ( 23 , 24 ) и бензотиазол-2-илкетоны ( 25 , 26 ).Нитрильное соединение 2 продемонстрировало значительное увеличение пероральной абсорбции у крыс (пероральная биодоступность (F) = 7,6% и фракция пероральной дозы, абсорбированная из желудочно-кишечного тракта (F _a x F _г ) = 38%) ( 27 ), сохраняя при этом разумную метаболическую стабильность (внутренний клиренс (CL _int )) против окислительного метаболизма в микросомах печени человека (HLM) ( 28 ) по сравнению с 1 (рис. 1). Однако эффективность FRET M ^pro in vitro (K _i = 27.7 нМ) и противовирусная активность SARS-CoV-2 (ЕС ₅₀ = 1364 нМ) 2 была ниже, чем 1 . Введение 6,6-диметил-3-азабицикло [3.1.0] гексана в качестве миметика циклического лейцина в P2 (фиг. 2B) удаляет HBD из амидной связи P2 / P3. Аналог 3 , полученный в результате комбинации этого циклического фрагмента P2 с бензотиазолилкетоном P1 ’, показал высокую пассивную абсорбционную проницаемость (P _app = 10,3 × 10 ⁻⁶ см / с). Сниженная биохимическая ингибирующая способность SARS-CoV-2 M ^pro 3 (K _i = 230 нМ) по сравнению с другими зарегистрированными бензотиазол-2-ил-ингибиторами SARS-CoV-2 M ^pro ( 29 ), содержащие группы лейцина P2, можно объяснить из режима связывания, наблюдаемого для 3 (рис.2С). В то время как 6,6-диметил-3-азабицикло [3.1.0] гексан эффективно заполняет липофильный карман S2, образованный Met49, Met169, His41 и Gln 189, продуктивное водородное связывание основной цепи лиганда с Gln189 больше невозможно (рис. . 2С). Низкая эффективность SARS-CoV-2 M ^pro и высокая CL _int (337 мкл / мин / мг) препятствовали дальнейшим инвестициям в соединение 3 . Подобно 1 , индол P3 3 не выходит в карман S3 (рис. 2, A и C).Чтобы лучше занимать карман S3, мы ввели разветвленные ациклические группы P3. Метансульфонамид в соединении 4 простирается под Gln189, продуктивно связываясь с остатками кармана P3 и достигая улучшенных взаимодействий водородных связей с основной цепью Glu166 (фиг. 2D) по сравнению с 1 и 3 . Соединение 4 продемонстрировало улучшенную биохимическую активность SARS-CoV-2 M ^pro (K _i = 7,93 нМ), противовирусную активность Vero E6 (EC ₅₀ = 909 нМ) и HLM CL _инт (127 мкл / мин / мг) относительно 3 (рис.1). Исследование фармакокинетики 4 у крыс также выявило улучшение перорального всасывания (F = 10%, F _a x F _г = 84%) (рис. 1). Попытка идентифицировать группы, альтернативные кэпирующим P3 сульфонамиду, привела к трифторацетамиду 5 . Соединение 5 продемонстрировало сравнимую биохимическую активность (K _i = 12,1 нМ) с 4 , но со значительно улучшенной противовирусной активностью SARS-CoV-2 Vero E6 (EC ₅₀ = 85,3 нМ) и пассивной проницаемостью (P _{приложение} = 13.1 × 10 ⁻⁶ см / сек), а также повышенная метаболическая стабильность в HLM (CL _int = 30,3 мкл / мин / мг) (рис. 1). 5 также показывает значительно улучшенную пероральную фармакокинетику у крыс (F = 33%, F _a x F _г = 100%) (рис. 1) и обезьян (F = 7,9%, F _a x F _г = 66%) (таблица S1). Введение нитрила P1 ’в этот каркас привело к идентификации клинического кандидата PF-07321332 ( 6 , фиг. 1). Соединение 6 является мощным ингибитором биохимической активности SARS-CoV-2 M ^pro (K _i = 3.11 нМ) с улучшенной противовирусной активностью Vero E6 (ЕС ₅₀ = 74,5 нМ) по сравнению с соединениями 2 – 4 . Соединение 6 демонстрирует режим связывания, аналогичный (фиг. 2E) соединению 4 . P1 ’нитрил 6 образует обратимый ковалентный тиоимидатный аддукт с каталитическим Cys145 (фиг. 2F). Обратимость ингибирования M ^pro с помощью 6 была продемонстрирована при инкубации SARS-CoV-2 M ^pro (2 мМ) с 2 мМ либо 6 , либо необратимым ингибитором M ^pro (соединение 7 , Инжир.3A) ( 17 ) в течение 30 мин и мониторинг активности M ^pro после 100-кратного разбавления инкубационных смесей. После инкубации M ^pro с 7 восстановления активности не наблюдалось. Восстановление> 50% активности M ^pro после инкубации с 6 указывает на то, что ингибирование SARS-CoV-2 M ^pro является обратимым (рис. 3A). Мы выбрали нитрильное соединение 6 (названное PF-07321332) по сравнению с соединением 5 в качестве клинического кандидата на основании простоты масштабирования синтетических материалов, повышенной растворимости, которая позволила создать простой состав носителя в поддержку доклинической токсикологии и снижение склонности к эпимеризации в стереоцентре P1.

Рис. 2. SARS-CoV-2 M ^pro структурная биология.

( A ) Совместная кристаллическая структура PF-00835231 ( 1 ) с SARS-CoV-2 M ^pro . Указаны ключевые взаимодействия. ( B ) Смоделированное перекрытие диметил-бицикло [3.1.0] пролина с соединением 3 (синий) как имитатор остатка лейцина P2 (циан), обнаруженного в субстрате вирусного полипротеина, и 1 . Это допустимое изменение P2 устраняет донор Н-связи из получаемых ингибиторов.( C ) Соединение 3 эффективно заполняет липофильный карман S2, образованный Met49, Met165 и His41, но продуктивная водородная связь с Gln189 больше невозможна. ( D ) Соединение 4 с оптимизированной ациклической группой P3 и восстановленным взаимодействием Gln189. ( E ) SARS-CoV-2 M ^pro связанная кристаллическая структура клинического кандидата PF-07321332 ( 6 ). ( F ) Обратимый ковалентный аддукт Cys145 образуется с нитрильным заместителем в соединении 6 .

Рис. 3. PF-07321332 Биохимическая и противовирусная активность . ( A ) PF-07321332 является обратимым ингибитором SARS-CoV-2 M ^pro , что демонстрируется восстановлением ферментативной активности после 100-кратного разбавления комплекса ингибиторов ферментов. Соединение 7 (PF-00956378), необратимый ингибитор, было включено в качестве контроля. Данные представляют 3 независимых эксперимента. ( B ) PF-07321332 является мощным ингибитором протеолитической активности SARS-CoV-2 M ^pro , а также родственных коронавирусов в анализах FRET.Показанные данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение от 3 независимых экспериментов. ( C ) PF-07321332 демонстрирует сильную противовирусную клеточную активность SARS-CoV-2. PF-07321332 ингибировал индуцированный SARS-CoV-2 цитопатический эффект (CPE) в клетках Vero E6, обогащенных ACE2. Ингибитор P-гликопротеина, CP-100356 (ингибитор оттока, EI) добавляли в концентрации 2 мкМ для ингибирования опосредованного P-гликопротеином оттока PF-07321332. В клетках Vero E6 без EI ЕС ₅₀ для PF-07321332 (95% доверительный интервал (ДИ)) составлял 4,48 мкМ (3.От 55 до 5,65 мкМ) (N = 8, n = 20). Цитотоксичность PF-07321332 оценивали на неинфицированных клетках, и CC ₅₀ составлял> 100 мкМ (таблица S4). PF-07321332 подавляет репликацию SARS-CoV-2 в клетках A549, экспрессирующих ACE2, в 4 независимых экспериментах. CC ₅₀ в неинфицированных клетках A549 было> 3 мкМ (таблица S4). В дифференцированных нормальных клетках бронхиального эпителия человека (dNHBE) PF-07321332 снижал репликацию вируса SARS-CoV-2 (N = 3). Показанные данные представляют собой среднее геометрическое и 95% доверительный интервал (ДИ).( D ) PF-07321332 демонстрирует противовирусную активность панкоронавируса. PF-07321332 Ингибирование в вирусно-индуцированных анализах CPE: SARS-CoV-1 в клетках Vero E6 (в присутствии 2 мкМ EI CP-100356), h-CoV-229E в клетках MRC-5 и MERS в клетках Vero 81 ( в присутствии 1 мкМ EI CP-100356). Показанные данные представляют собой среднее значение и стандартное отклонение. Значения CC ₅₀ , определенные во всех анализах, были> 100 мкМ (таблица S4). PF-07321332 продемонстрировал сильное ингибирование в анализах FRET M ^pro , представляющих M ^pro от всех типов коронавирусов, которые, как известно, инфицируют людей ( 6 , 7 , 30 ), включая бета-коронавирусы (SARS-CoV-2, SARS-CoV-1, HKU1, OC43, MERS), а также альфа-коронавирусы (229E, NL63) (рис.3B и таблица S2). Не было отмечено никаких ингибирующих эффектов против некоторых цистеиновых (каспаза 2, катепсин B, катепсин L), сериновых (химотрипсин, эластаза, тромбин) и аспартил (катепсин D) протеаз млекопитающих в самой высокой испытанной концентрации (100 мкМ) PF-07321332 (таблица S3). Это также относится к протеазе ВИЧ-1, вирусной аспартилпротеазе (таблица S3). Противовирусная активность PF-07321332 in vitro также оценивалась в двух физиологически релевантных клеточных системах; альвеолярные базальные эпителиальные клетки человека (A549), происходящие из аденокарциномы человека, конститутивно экспрессирующие ACE2 ( 19 ) и дифференцированные нормальные клетки бронхиального эпителия человека (dNHBE) ( 31 ).В отличие от клеток Vero E6, клетки A549 и dNHBE не экспрессируют чрезмерно Р-гликопротеин, и поэтому совместное дозирование с ингибитором Р-гликопротеина не было необходимым для измерения противовирусной активности в этих клеточных линиях ( 19 ). PF-07321332 ингибировал репликацию SARS-CoV-2 по оценке с использованием репортерного вируса нанолюциферазы в клетках A549-ACE2 со значениями EC ₅₀ и EC ₉₀ 77,9 нМ и 215 нМ соответственно, при этом цитотоксичность не обнаруживалась при концентрациях до 3 мкМ (рис.3C и таблица S4). Обработка клеток dNHBE различными концентрациями PF-07321332 в течение 3 дней приводила к ингибированию репликации вируса SARS-CoV-2 со значениями EC ₅₀ и EC ₉₀ 61,8 нМ и 181 нМ, соответственно (рис. 3C), как показано на рис. контролировали титрованием вируса, собранного из апикального компартмента, используя анализ 50% -ной инфицирующей дозы культуры клеток (CCID ₅₀ ) в клетках Vero76. Увеличение продолжительности исследования dNHBE до 5 дней показало, что репликация вируса ингибировалась с ЕС ₅₀ и ЕС ₉₀ значениями 32.6 нМ и 56,1 нМ (рис. 3C). Поскольку оптимальная терапевтическая эффективность имеющихся на рынке ингибиторов вирусных протеаз и других противовирусных агентов обычно достигается, когда минимальные системные несвязанные концентрации ингибитора в плазме (C _мин ) поддерживаются выше клеточного противовирусного EC ₉₀ ( 32 ), мы выбрали более консервативный день 3 EC ₉₀ значение 181 нМ PF-07321332 в анализе dNHBE как C _мин , которое необходимо поддерживать при прогнозировании эффективности на животных моделях и в клинике.Мы также оценили in vitro клеточную противовирусную активность PF-07321332 против SARS-CoV-1, MERS и коронавируса человека 229E с использованием анализов цитопатического эффекта (CPE). PF-07321332 продемонстрировал сильную противовирусную активность против SARS-CoV-1 (EC ₉₀ = 317 нМ), MERS (EC ₉₀ = 351 нМ) и 229E (EC ₉₀ = 620 нМ) в соответствующих клеточных анализах ( Рис. 3D и таблица S5). Мы оценили противовирусную активность PF-07321332 in vivo на адаптированной к мышам модели SARS-CoV-2 (SARS-CoV-2 MA10) ( 33 ).Интраназальное инфицирование мышей BALB / c SARS-CoV-2 MA10 приводит к потере массы тела ~ 10% и минимальной смертности у 10-недельных мышей. Как показано на фиг. 4A, после заражения SARS-CoV-2 MA10 мыши, получавшие два раза в день PF-07321332 (как в дозах 300 мг / кг, так и в дозах 1000 мг / кг), были защищены от потери веса по сравнению с мышами, получавшими носитель. . Через 4 дня после заражения мышей умерщвляли и титры вируса в легких оценивали в анализах CCID ₅₀ . Зараженные животные в группе плацебо (n = 12, два независимых исследования) имели устойчивую инфекцию в легких (средний титр в легких log ₁₀ 4.93 ± 0,140 CCID ₅₀ / мл SARS-CoV-2 MA10) (рис. 4B), тогда как уровни вируса у мышей, получавших PF-07321332, были значительно снижены (средние титры в легких log ₁₀ 3,53 ± 0,187 и log ₁₀ 3,02 ± 0,423 CCID ₅₀ / мл для групп, получавших 300 и 1000 мг / кг PF-07321332, соответственно). В сателлитной группе неинфицированных мышей доза PF-07321332 BID в дозе 300 мг / кг BID, использованная в исследовании эффективности вируса, адаптированного для мышей, in vivo, поддерживала несвязанные концентрации C _мин в плазме выше ~ 0.9 x EC ₉₀ (фиг. 4C), как определено в анализе первичных клеток dNHBE. Доза 1000 мг / кг BID PF-07321332 поддерживала несвязанную плазменную концентрацию C _мин ~ 4 x EC ₉₀ (фиг. 4C). Это подтверждает, что PF-07321332 эффективен для снижения вирусной нагрузки SARS-CoV-2 MA10 в легких мышей в концентрациях, согласующихся с наблюдаемой противовирусной активностью in vitro, и тех, которые являются целевыми клинически.

Рис. 4. Эффективность PF-07321332 in vivo против инфекции SARS-CoV-2 MA10 у мышей.

Шесть мышей / группу заражали интраназально 1 × 10 ^5,0 50% инфекционными дозами в культуре клеток SARS-CoV-2 MA10 (CCID ₅₀ ). Животным перорально вводили 300 или 1000 мг / кг PF-07321332 или носитель (плацебо) два раза в день (BID) через 4 часа после заражения. Животных умерщвляли через 4 дня после инфицирования (dpi) и собирали легкие для определения титров вируса. Данные для A-D собраны из двух независимых исследований (n = 12, мыши BALB / c). ( A ) Снижение веса при заражении.Мышей взвешивали ежедневно. ( B ) Титр вируса в легких при 4 dpi. Титры в легких представлены в виде среднего значения Log ₁₀ CCID ₅₀ / мл +/- стандартная ошибка среднего. Пунктирная линия представляет предел обнаружения для анализа CCID ₅₀ . ( C ) PF-07321332 уровни воздействия в дозах 300 и 1000 мг / кг в течение 12 часов у неинфицированных мышей, получавших перорально. EC ₉₀ , представленный как определено в анализе первичных клеток dNHBE на 3 день ( D ). Гистопатологические баллы по шкале от 0 до 5, где 0 – нормальное здоровое легкое, а 5 – тяжелые сливающиеся области некроза и сливающиеся области воспаления.( E ) Иммуногистохимия белка нуклеокапсида SARS-CoV-2. Сканирование с помощью цифрового светового микроскопа срезов ткани легких мышей ложно инфицированных мышей, получавших плацебо, 300 мг / кг PF-07321332 и 1000 мг / кг PF-07321332, окрашенных нуклеокапсидными антителами SARS-CoV-2. Данные представляют собой сканированные изображения одного исследования. Масштабные линейки представляют 2 мм. Показано увеличение 1x.

Заболевание в этой модели проявляется потерей веса и патологическими изменениями в легких инфицированных мышей ( 33 ). Гистопатологический анализ и иммуноокрашивание легких мышей, инфицированных SARS-CoV-2 MA10, показывают, что PF-07321332 ограничивает клеточную инфильтрацию (рис.4D и рис. S2) и защищает легочную ткань от повреждения из-за репликации вируса (рис. 4E). Иммуногистохимический анализ с использованием вирусного нуклеокапсидного антитела для определения уровней вирусного антигена в легких показал, что PF-07321332 ингибирует репликацию вируса дозозависимым образом (фиг. 4E). Легкие инфицированных мышей, обработанных носителем, показали наиболее сильное окрашивание, тогда как легкие с ложной инфекцией были отрицательными для окрашивания нуклеокапсида. Гистопатологическая оценка легких мышей, которым вводили носитель, продемонстрировала признаки усиленного периваскулярного воспаления, дегенерации или некроза бронхиального или бронхиолярного эпителия, бронхиального или бронхиолярного воспаления, клеточного мусора в просвете альвеол, а также альвеолярного воспаления и утолщения альвеолярной перегородки по сравнению с PF-07321332 -обработанных мышей и мышей с ложной инфекцией (рис.S2). У большинства инфицированных мышей наблюдались мультифокальные легочные поражения, которые были значительно уменьшены у мышей, получавших PF-07321332. PF-07321332 демонстрировал умеренный плазменный клиренс (CL _p ) у крыс и обезьян с периодом полувыведения (t _{1 / 2} ) в течение 5 часов и _a x F _г ) и значения пероральной доступности (F) в диапазоне 65-95% и 34-50% соответственно, в зависимости от используемой кристаллической формы (рис.1 и таблица S6) . Пероральное введение PF-07321332 (10 мг / кг) обезьянам привело к относительно низкому F, равному 8.5% (F _a x F _г = 20%) (таблица S6), что связано с метаболизмом первого прохождения по желудочно-кишечному тракту ферментами цитохрома P450 (CYP), что соответствует быстрому (t _1/2 = 20,5 мин, CL _int = 33,8 мкл / мин / мг) НАДФН-зависимый метаболический оборот PF-07321332 в микросомах кишечника обезьян (таблица S7). PF-07321332 был устойчивым (t _1/2 > 240 мин, CL _{int u, p} ) = 0,478), обезьяна (среднее f _{u, p} = 0.434) и человека (среднее f _{ед., P} = 0,310) в условиях равновесного диализа ( 34 ). Также были изучены ферменты, метаболизирующие лекарственные средства, участвующие в метаболизме PF-07321332. В HLM с добавлением NADPH PF-07321332 продемонстрировал умеренный CL _int (24,5 мкл / мин / мг) (рис.1 и таблица S7), который значительно ингибировался (≥82%) селективным ингибитором CYP3A4 / 5 кетоконазолом ( 28 ) (таблица S8). Кроме того, профиль окислительного метаболизма PF-07321332 в HLM, который включает модификации P2 6,6-диметил-3-азабицикло [3.1.0] гексан, трет, -бутильная группа в положении P3 и пирролидиноновое кольцо P1 были воспроизведены при инкубации PF-07321332 с рекомбинантным человеческим CYP3A4 (фиг. S1). Эти исследования in vitro, которые установили преобладающую роль CYP3A4 в метаболизме PF-07321332, также предоставили возможность повысить терапевтические концентрации PF-07321332 в клинике путем совместного дозирования с мощным инактиватором CYP3A4 ритонавиром (RTV), который используется в качестве фармакокинетического усилителя некоторых имеющихся в продаже ингибиторов протеаз (например,g., дарунавир, лопинавир), которые подвергаются метаболическому клиренсу через CYP3A4 ( 35 , 36 ) .PF-07321332 продемонстрировал благоприятный профиль селективности вне мишени в широкой панели рецепторов, киназ, транспортеров, связанных с G-белком. и ингибитор фермента фосфодиэстеразы, и был лишен активности против сердечных ионных каналов K _v 1,1, Ca _v 1,2 и Na _v 1,5 (таблицы S9 и S10). PF-07321332 не был мутагенным или кластогенным в исследованиях генетической токсичности in vitro и был отрицательным в анализе микроядер in vivo на крысах (таблица S11).Повторное пероральное введение PF-07321332 в 2-недельных исследованиях регуляторной токсичности на обезьянах (60-600 мг / кг) и крысах (40-1000 мг / кг) привело к дозозависимому увеличению обеих максимальных концентраций в плазме (C _max ) и кривые зависимости площади под плазмой от времени (AUC) (фиг. 5, A и B, и таблица S12). Это привело к несвязанному C _max и средним концентрациям (C _av ) в 273 и 65 раз у крыс (день 14, 1000 мг / кг) и в 510 и 245 раз у обезьян (день 15). , 600 мг / кг) по сравнению с измеренным значением несвязанного EC ₉₀ PF-07321332, определенным в клеточном анализе dNHBE SARS-CoV-2 на третий день.PF-07321332 хорошо переносился без каких-либо побочных эффектов ни у одного вида; соответствующие уровни отсутствия наблюдаемых побочных эффектов (NOAEL) были самыми высокими испытанными дозами (600 мг / кг / день для обезьян и 1000 мг / кг / день для крыс).

Рис. 5. Доклиническая токсикология и воздействие однократной возрастающей дозы на здоровых взрослых участников для PF-07321332.

( A ) Пероральное токсикокинетическое воздействие на крыс (день 14) PF-07321332, вводимого один раз в день, по сравнению со значениями противовирусного препарата EC ₉₀ на день 3 в клетках dNHBE.( B ) Пероральное токсикокинетическое воздействие на обезьяны (день 15) введенного дважды в день PF-07321332 по сравнению с противовирусным препаратом EC ₉₀ дня 3 в dNHBE. ( C ) Концентрации в плазме человека (общие) в зависимости от профиля времени после перорального введения (состояние натощак) PF-07321332 (150 мг) и PF-07321332 (250 мг) с ритонавиром (RTV) (100 мг при t = -12 часов, 0 часов и 12 часов) по сравнению с 3-м днем ​​антивирусного EC ₉₀ в dNHBE. ( D ) Охват противовирусными препаратами для человека> EC _{90, u} через 12 часов для SARS-CoV-1, SARS-CoV-2 и MERS после перорального введения PF-07321332 (250 мг) и ритонавира (100 мг при t = -12 часов, 0 часов и 12 часов).Несвязанный in vitro SARS-COV-2 EC ₉₀ 181 нМ был преобразован в нг / мл с использованием молекулярной массы 499,5 г / моль для PF-07321332. Общий ЕС ₉₀ рассчитывали путем деления несвязанного ЕС ₉₀ на f _{u, плазму} (0,479 крысы, 0,208 NHP и 0,310 человека). Это привело к общим значениям ЕС _{, 90,} , равным 189, 208 и 292 нг / мл для крысы, NHP и человека, соответственно. Рассчитанные общие ЕС ₉₀ человека для MERS и SARS-COV-1 составляли 566 и 422 нг / мл соответственно.УННВВ человека 79,700 нг / мл (для C _max ) был оценен на основе значения C _max крысы в ​​51500 нг / мл при дозе NOAEL 1000 мг / кг, нормализуя различия несвязанных фракций плазмы.

Безопасность, переносимость и фармакокинетика PF-07321332 в качестве единственного агента и в комбинации с RTV изучаются в рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании однократной возрастающей дозы у здоровых взрослых участников (таблица S13, ClinicalTrials. gov Идентификатор: NCT04756531).При каждой проверенной дозе 4 участника были рандомизированы для получения активного лечения, а 2 участника получали плацебо. В схеме дозирования совместного введения PF-07321332 / RTV каждый субъект (активный и плацебо) получал одну таблетку (100 мг) RTV через -12 часов, 0 часов и 12 часов. PF-07321332 вводили в виде пероральной суспензии натощак в 0 часов (минимальное голодание ~ 10 часов до лечения). Предварительные фармакокинетические профили концентрации в плазме в зависимости от времени, достигнутые при применении двух пероральных доз, только PF-07321332 (150 мг) и PF-07321332 (250 мг) с RTV, представлены на рис.5С. PF-07321332 был безопасен и хорошо переносился, а при совместном введении с RTV демонстрировал значительное повышение концентрации в плазме. Концентрации PF-07321332 (250 мг с RTV) в плазме при пероральном введении были значительно выше значения EC ₉₀ противовирусного SARS-COV-2 (общий EC ₉₀ = 292 нг / мл, несвязанный EC ₉₀ = 90,5 нг / мл. , 181 нМ) через 12 часов после введения дозы, тем самым повышая уверенность в достижении устойчивой противовирусной активности панкоронавируса клинически (рис. 5D). Основываясь на этих наблюдениях и высоких пределах безопасности при дозах NOAEL для животных, эффективность PF-07321332 у пациентов с COVID-19 будет оцениваться с использованием парадигмы дозирования два раза в день с возможностью увеличения дозы PF-07321332 как однократной. агент и / или совместное введение с RTV.

Благодарности

Авторы выражают благодарность участникам исследования FIH. Мы также хотели бы поблагодарить значительное количество коллег из Pfizer, которые внесли свой вклад в программу пероральной протеазы COVID-19 в ряде дисциплин. В частности, мы благодарим Сильви Сакату, Джоэля Аркари, Джинжи Чжан за внешние ресурсы для исследований, Кэтлин Фарли за исследования ЯМР, Лоррейн Ланьон за панельные данные по протеазе, Яджин Лиан, Эрика Лашапеля, Стивена Райта, Стивена О’Нила, Эдди Янга, Джона Хамфри. , Брайан Боско за синтез соединений, Стив Дженкинсон за данные по фармакологии безопасности, Кевин Райан за поддержку структурной биологии, Элизабет Коллинз, Крис Алле за поддержку активных фармацевтических ингредиентов FIH, Фрэн Кларк за биоанализ, Хайхонг Ши за поддержку клинических исследований, Джанлука Нуччи, Арт Бергман за дизайн исследования и клиническую фармакологию, Фрэнсис Хакман за клиническую статистику, Сима Тусси за медицинский мониторинг, Карен Барч за руководство клиническими исследованиями, Сильвестр Павлак за руководство клиническими испытаниями, Клаудин Фредетт за руководство проектами клинических испытаний, Дин Динг за поддержку нормативной документации и Микаэлю Долстену за научные обсуждения и советы.В этом исследовании использовались ресурсы Advanced Photon Source, Научно-исследовательского учреждения Министерства энергетики США (DOE), работающего для Управления науки DOE Аргоннской национальной лабораторией по контракту № DE-AC02-06Ch21357. Экстраординарная работа объекта частично поддерживалась Управлением науки Министерства энергетики США через Национальную виртуальную биотехнологическую лабораторию, консорциум национальных лабораторий Министерства энергетики, специализирующихся на реагировании на COVID-19, при финансировании, предоставленном Законом о коронавирусе CARES. Финансирование: Это исследование спонсировалось Pfizer, Inc. Вклад авторов: Концептуализация: CMNA, ASA, DRO, MP Формальный анализ: LD, BB, SEG, QY, DKR, JJN, AD, RSO, RSPS Расследование: MA, SB , JCL, JL, KO, LW, RF, KSG, WL, RSO, DKR, SAG, LA, SN, HE Методология: JBT, QY, MFS, PRV, MRR, MP, DRO, NCP, AC, EPK, KJC, Управление проектом RSPS: DRO, MRR, JBT, ASK, CMS, LU, JGS, BLH, YZ, SWM, RDC, NCP Ресурсы: AD, JJN, KJC Надзор: MRR, CES, AES, BLH, PRV, RDC Визуализация: SWM , DKR, SN, BB, LA, HE Writing – исходный черновик: DRO, ASK, MFS, CMS, RDC, MRR, JGS, CMS, YZ Writing – просмотр и редактирование: DRO, ASK, MFS, ASA, CMNA Конкурирующие интересы : DRO, CMNA, ASA, LA, MA, SB, BB, RDC, AC, KJC, AD, LD, HE, RF, KSG, SEG, EPK, ASK, JCL, JL, WL, SN, RSO, KO, NCP, DKR, MRR, MFS, JGS, RPS, CMS, AS, JBT, LU, PRV, LW, QY, YZ являются сотрудниками Pfizer, а некоторые из авторов являются акционерами Pfizer Inc.SWM, JJN, MP были сотрудниками Pfizer Inc. во время части этого исследования. Доступность данных и материалов: Все доклинические данные доступны в основном тексте или дополнительных материалах. Рентгеновские координаты и структурные факторы хранятся в банке данных белка RCSB под кодами доступа 7RFR, 7RFU, 7RFS и 7RFW. Индивидуализированные данные на рис. 5 и план статистического анализа доступны на сайте www.Figshare.com со следующим DOI: 10.25454 / pfizer.figshare.16699669. Запросы Pfizer на комплексное использование обрабатываются в рамках программы Pure Compound Grants, см. Https: // www.cybergrants.com/pfizer/Research. Pfizer Inc. подала заявку на патент, охватывающий PF-07321332, а также родственные соединения. Клиническое исследование фазы 1 зарегистрировано на сайте Clinicaltrials.gov (идентификатор NCT04756531).

Таблетки элтроксина 100 мкг – Сводка характеристик продукта (SmPC)

Эта информация предназначена для медицинских работников

Элтроксин 100 мкг таблетки

Левотироксин таблетки 100 мкг

Каждая таблетка содержит 100 мкг левотироксина натрия безводного.

Наполнитель с известным эффектом

Лактоза 48,86 мг на таблетку

Полный список вспомогательных веществ см. В разделе 6.1.

Планшет

Белые двояковыпуклые таблетки без покрытия, на одной стороне которых выгравированы буквы «LT» и «100».

Рекомендуемые клинические показания: борьба с гипотиреозом, врожденным гипотиреозом у младенцев , приобретенным гипотиреозом у детей и ювенильной микседемой.

Позология

У более молодых пациентов и при отсутствии сердечных заболеваний следует нацеливаться на уровень левотироксина (Т4) в сыворотке от 70 до 160 наномоль на литр или уровень тиреотрофина в сыворотке менее 5 миллиединиц на литр. ЭКГ перед терапией важна, потому что изменения ЭКГ, вызванные гипотиреозом, можно спутать с ЭКГ-свидетельствами сердечной ишемии. Если происходит слишком быстрое увеличение метаболизма (вызывающее диарею, нервозность, учащенный пульс, бессонницу, тремор, а иногда и ангинозную боль при латентной ишемии сердца), дозу необходимо уменьшить или приостановить на один или два дня, а затем повторно начали при более низком уровне дозы.

Взрослые

Первоначально 100 микрограммов в день, желательно перед завтраком или первым приемом пищи в день. Отрегулируйте с интервалом в три-четыре недели на 50 мкг до стабильного поддержания нормального метаболизма. Конечная суточная доза может составлять от 100 до 200 мкг.

Пожилые

Для пациентов старше 50 лет.

Для пациентов старше 50 лет изначально не рекомендуется принимать более 50 мкг в день.В этом состоянии суточная доза может быть увеличена на 50 мкг с интервалом каждые 3-4 недели до тех пор, пока не будет достигнут стабильный уровень тироксина. Окончательная суточная доза может составлять от 50 до 200 мкг.

Пациенты старше 50 лет с сердечными заболеваниями

При сердечных заболеваниях более подходят 25 мкг в день или 50 мкг через день. В этих условиях суточная доза может увеличиваться на 25 мкг с интервалом каждые 4 недели до тех пор, пока не будет достигнут стабильный уровень тироксина.Окончательная суточная доза может составлять от 50 до 200 мкг.

Для пациентов старше 50 лет, с сердечными заболеваниями или без них, клинический ответ, вероятно, является более приемлемым критерием дозировки, чем уровни сыворотки.

Педиатрия

Поддерживающая доза обычно составляет от 100 до 150 микрограммов на м 2 ² площади поверхности тела. Доза для детей зависит от их возраста, веса и состояния, которое лечат. Регулярный мониторинг уровня ТТГ в сыворотке, как и у взрослых, необходим, чтобы убедиться, что он / она получает правильную дозу.Младенцам следует давать общую суточную дозу не менее чем за полчаса до первого приема пищи в день.

Врожденный гипотиреоз у младенцев:

Для новорожденных и младенцев с врожденным гипотиреозом, когда важна быстрая замена, начальная рекомендуемая доза составляет от 10 до 15 микрограммов на кг массы тела в день в течение первых 3 месяцев. После этого дозу следует корректировать индивидуально в соответствии с клиническими данными и значениями тиреоидного гормона и ТТГ.

Приобретенный гипотиреоз у детей:

Для детей с приобретенным гипотиреозом начальная рекомендуемая дозировка составляет 12.5-50 мкг в день. Дозу следует постепенно увеличивать каждые 2–4 недели в соответствии с клиническими данными и значениями тиреоидного гормона и ТТГ до достижения полной замещающей дозы.

Ювенильная микседема у детей:

Начальная рекомендуемая доза составляет 25 мкг в день. В таких условиях суточную дозу можно увеличивать на 25 мкг с интервалом каждые 2-4 недели, пока не появятся легкие симптомы гипертиреоза. Затем доза будет немного снижена.

Детям в возрасте до 5 лет не рекомендуется прием таблеток целиком. Также не рекомендуется измельчать и диспергировать таблетки в воде или других жидкостях из-за ограниченной растворимости, которая может привести к неточности дозирования. В этой возрастной группе предпочтительнее назначать разрешенный пероральный раствор левотироксина.

Способ применения

Оральный

• Повышенная чувствительность к активному веществу или любому из вспомогательных веществ, перечисленных в разделе 6.1.

• Тиреотоксикоз

• Заболевание надпочечников или надпочечниковая недостаточность

Левотироксин следует вводить очень постепенно пациентам в возрасте старше 50 лет (см. Раздел 4.2) и пациентам с длительным гипотиреозом, чтобы избежать внезапного повышения метаболических требований.

Пациенты с пангипопитуитаризмом или другими причинами, предрасполагающими к надпочечниковой недостаточности, могут реагировать на лечение левотироксином, и рекомендуется начинать терапию кортикостероидами до того, как давать левотироксин таким пациентам.

Левотироксин натрия следует применять с осторожностью у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, включая стенокардию, ишемическую болезнь сердца, артериальную гипертензию, а также у пожилых людей с большей вероятностью скрытого сердечного заболевания.

Чтобы свести к минимуму риск побочных эффектов необнаруженного чрезмерного лечения, таких как фибрилляция предсердий и переломы, связанные с низким уровнем тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови у пожилых пациентов, важно контролировать уровень ТТГ в сыворотке и соответственно корректировать дозу при длительном применении. .

У лиц с подозрением на сердечно-сосудистые заболевания или группы высокого риска важно выполнить ЭКГ до начала лечения левотироксином, чтобы выявить изменения, соответствующие ишемии, и в этом случае левотироксин следует начинать в низкой дозе с последующим лечением. осторожным увеличением дозы во избежание обострения ишемии или развития инфаркта.

Особая помощь требуется пожилым людям и пациентам с симптомами миокардиальной недостаточности или ЭКГ-признаками инфаркта миокарда.

Заместительная терапия щитовидной железы может вызвать повышение требований к дозировке инсулина или другой антидиабетической терапии (например, метформина). Необходима помощь больным сахарным диабетом и несахарным диабетом.

См. Примечание выше относительно прекращения лечения.

Субклинический гипертиреоз может быть связан с потерей костной массы. Чтобы свести к минимуму риск остеопороза, дозу левотироксина натрия следует титровать до минимально возможного эффективного уровня.

Родителям детей, получающих тиреоидный агент, следует сообщить, что частичное выпадение волос может произойти в течение первых нескольких месяцев терапии, но этот эффект обычно временный, и обычно происходит последующий отрастание.

Требуется осторожность при назначении левотироксина пациентам с эпилепсией в анамнезе. Редко сообщалось о судорогах в связи с началом терапии левотироксином натрия, и они могут быть связаны с влиянием гормона щитовидной железы на порог судорожных припадков.

Следует контролировать гемодинамические параметры при начале терапии левотироксином у недоношенных новорожденных с очень низкой массой тела при рождении, поскольку нарушение кровообращения может возникнуть из-за незрелой функции надпочечников.

Небольшое количество пациентов сообщают о побочных эффектах при переходе между разными препаратами левотироксина. В некоторых случаях симптомы появляются, несмотря на то, что тесты функции щитовидной железы находятся в пределах нормы. Если пациенты сообщают о побочных эффектах при переключении между продуктами, рассмотрите возможность тестирования функции щитовидной железы.Пациентам с устойчивыми симптомами после переключения, независимо от того, являются ли они эутиреоидными с биохимической точки зрения или имеют признаки нарушения функции щитовидной железы, рекомендуется последовательно назначать конкретный препарат левотироксина, который хорошо переносится пациентом. Если симптомы или плохой контроль функции щитовидной железы сохраняются, несмотря на соблюдение определенного продукта, следует рассмотреть возможность назначения левотироксина в форме раствора для перорального применения.

Вспомогательные вещества

Пациентам с редкими наследственными проблемами непереносимости галактозы, полной лактазной недостаточностью или мальабсорбцией глюкозы-галактозы не следует принимать это лекарство.

Это лекарство содержит менее 1 ммоль натрия (23 мг) на таблетку, то есть практически не содержит натрия.

Взаимодействия с другими лекарственными средствами:

Левотироксин усиливает действие антикоагулянтов (варфарин) , и может потребоваться снижение дозировки антикоагулянтов, если следует избегать чрезмерной дозы, гипопротромбинемии и кровотечения.

Уровень сахара в крови повышен, и может потребоваться корректировка дозировки антидиабетических средств.

Трициклические антидепрессанты (например, амитриптилин, имипрамин, досулепин) Ответ может быть ускорен, поскольку левотироксин повышает чувствительность к катехоламинам; одновременный прием может вызвать сердечную аритмию.

Эффекты симпатомиметических средств (например, адреналина или фенилэфрина) также усиливаются

Сердечные гликозиды: Если лечение левотироксином начато у дигитализированных пациентов, доза дигиталиса может потребовать корректировки.Пациентам с гипертиреозом может потребоваться постепенное увеличение дозы дигоксина по мере продолжения лечения, поскольку изначально пациенты относительно чувствительны к дигоксину.

НПВП: Ложно низкие концентрации в плазме наблюдались при одновременном лечении противовоспалительным средством, например фенилбутазоном или ацетилсалициловой кислотой и терапией левотироксином.

Бета-адреноблокаторы: левотироксин (тироксин) ускоряет метаболизм пропранолола, атенолола и соталола.

Общие анестетики: сообщалось об отдельных сообщениях о выраженной гипертонии и тахикардии при одновременном применении кетамина.

Взаимодействия, влияющие на левотироксин:

Амиодарон может ингибировать деиодирование тироксина до трийодтиронина, что приводит к снижению концентрации трийодтиронина, тем самым уменьшая действие гормонов щитовидной железы.

Противосудорожные средства, такие как карбамазепин и фенитоин, усиливают метаболизм гормонов щитовидной железы и могут вытеснять их из белков плазмы.

Начало или прекращение противосудорожной терапии может изменить требования к дозировке левотироксина.

Эффекты левотироксина могут быть уменьшены одновременным приемом сертралина.

Всасывание левотироксина (тироксина), возможно, снижается антацидами, ингибиторами протонной помпы, солями кальция, циметидином, пероральным железом, сукральфатом, колестиполом, полистиролсульфонатной смолой и холестирамином (введение следует разделять на 4-5 часов).

Метаболизм левотироксина (тироксина) ускоряется рифампицином, барбитуаратами и примидоном. (может повышать потребность в левотироксине (тироксине) при гипотиреозе)

Иматиниб: концентрация левотироксина (тироксина) в плазме, возможно, снижается иматинибом.

Бета-блокаторы могут снижать периферическое превращение левотироксина в трийодтиронин.

Липидорегулирующие препараты: сообщалось, что ловастатин вызывает по одному случаю гипотиреоза и гипертиреоза у двух пациентов, принимающих левотироксин.

Половые гормоны: эстроген, продукты, содержащие эстроген (включая заместительную гормональную терапию) и оральные контрацептивы, могут увеличить потребность в дозировке терапии щитовидной железы. И наоборот, андрогены и кортикостероиды могут снижать сывороточные концентрации левотироксин-связывающих глобулинов.

Лекарства от ожирения, такие как орлистат, могут снижать абсорбцию левотироксина, что может привести к гипотиреозу (отслеживайте изменения функции щитовидной железы).

Ряд препаратов может влиять на тесты функции щитовидной железы, и это следует иметь в виду при наблюдении за пациентом, получающим терапию левотироксином.

Сообщалось о постмаркетинговых случаях, указывающих на потенциальное взаимодействие между продуктами, содержащими ритонавир, и левотироксином. У пациентов, получавших левотироксин, следует контролировать тиреотропный гормон (ТТГ), по крайней мере, в первый месяц после начала и / или окончания лечения ритонавиром.

Беременность

Безопасность лечения левотироксином во время беременности неизвестна, но любой возможный риск аномалий плода следует сопоставить с риском для плода нелеченного гипотиреоза.

Кормление грудью

Левотироксин выделяется с грудным молоком в низких концентрациях, и вопрос о том, может ли это помешать неонатальному скринингу, является спорным.

Плодородие

Нет данных

Левотироксин не оказывает или оказывает незначительное влияние на способность управлять автомобилем и работать с механизмами

Побочные эффекты обычно указывают на чрезмерную дозировку и обычно исчезают при уменьшении дозировки или отмене лечения на несколько дней.

Нежелательные реакции, перечисленные ниже, наблюдались во время клинических исследований и / или во время коммерческого использования, они основаны на данных клинических испытаний и классифицированы в соответствии с классом органов системы MedDRA. Категории частот определены в соответствии со следующим соглашением:

Неизвестно (невозможно оценить по имеющимся данным)

Системный орган, класс	Побочные эффекты
Нарушения иммунной системы	Реакция гиперчувствительности
Эндокринные расстройства	Тиреотоксический криз 1
Психиатрические расстройства	Беспокойство, возбуждение, бессонница
Расстройства нервной системы	Тремор
Сердечные расстройства	Стенокардия, аритмия, сердцебиение, тахикардия
Сосудистые заболевания	Промывка,
Заболевания органов дыхания, грудной клетки и средостения	Одышка
Заболевания желудочно-кишечного тракта	Диарея, рвота
Заболевания кожи и подкожной клетчатки	Гипергидроз, алопеция, сыпь, кожный зуд
Заболевание опорно-двигательного аппарата и соединительной ткани	Артралгия, мышечный спазм, мышечная слабость
Заболевания репродуктивной системы и груди	Нерегулярные менструации
Общие расстройства и нарушения в месте введения	Головная боль, гипертермия, недомогание, отек
Расследования	Масса уменьшена

¹ Некоторые пациенты могут испытывать тяжелую реакцию на высокий уровень гормона щитовидной железы.Это называется «кризом щитовидной железы» с любым из следующих симптомов: гиперпирексия, тахикардия, аритмия, гипотензия, сердечная недостаточность, желтуха, спутанность сознания, судороги и кома

Педиатрическое население

Непереносимость тепла, преходящее выпадение волос, доброкачественная внутричерепная гипертензия, краниостеноз у младенцев и преждевременное закрытие эпифиза у детей.

Сообщение о предполагаемых побочных реакциях

Важно сообщать о предполагаемых побочных реакциях после получения разрешения на лекарственный препарат.Это позволяет непрерывно контролировать соотношение польза / риск лекарственного средства. Медицинских работников просят сообщать о любых предполагаемых побочных реакциях через веб-сайт схемы желтых карточек: www.mhra.gov.uk/yellowcard или искать желтые карточки MHRA в Google Play или Apple App Store.

Симптомы

В большинстве случаев функций не будет. Признаки передозировки могут включать: лихорадку, боль в груди (стенокардию), учащенное сердцебиение или нерегулярное сердцебиение, мышечные судороги, головную боль, беспокойство, приливы, потливость, диарею, тремор, бессонницу и гиперпирексию.Отображение этих знаков может занять до 5 дней. . Может развиться фибрилляция предсердий. Судороги произошли у одного ребенка. У людей с уже существующими сердечными заболеваниями может наблюдаться повышенная токсичность.

Менеджмент

Дайте пероральный активированный уголь, если взрослый принял внутрь более 10 мг или ребенок в течение 1 часа. Если взрослый проглотил более 10 мг, а ребенок – более 5 мг, возьмите кровь через 6–12 часов после приема для измерения концентрации свободного тироксина.Анализ не нужно делать срочно, но можно подождать до первого рабочего дня после инцидента. Пациенты с нормальной концентрацией свободного тироксина не нуждаются в наблюдении. Пациентам с высокими концентрациями следует пройти амбулаторное обследование через 3-6 дней после приема для выявления гипертиреоза с отсроченным началом. Особенности клинического гипертиреоза следует контролировать с помощью бета-адреноблокаторов, например пропранолол.

Фармакотерапевтическая группа: Гормоны щитовидной железы, Код АТХ: H03AA01

Механизм действия

Элтроксин – это таблетка, содержащая гидратированную форму левотироксина натрия, которая используется для лечения гипотиреоза.Основное гормональное действие щитовидной железы зависит от двух действующих веществ: левотироксина (тетрайодтиронина) и трийодтиронина (см. Goodman and Gilman, 1985). Эти близкородственные йодсодержащие аминокислоты включены в гликопротеин тиреоглобулин. Основное действие этих гормонов – увеличение скорости клеточного метаболизма. Левотироксин дейодируется в периферических тканях с образованием трийодтиронина, который считается активной тканевой формой гормона щитовидной железы.

Фармакодинамические эффекты

Трийодтиронин, безусловно, имеет более быстрое действие и более короткую продолжительность действия, чем левотироксин.

Основное действие левотироксина – увеличение скорости клеточного метаболизма

Поглощение

Левотироксин натрия всасывается из желудочно-кишечного тракта не полностью и неодинаково.

Распределение

Он почти полностью связан с белками плазмы и имеет период полувыведения из кровотока около недели у здоровых субъектов, но дольше во время беременности у пациентов с микседемой.

Биотрансформация

Большая часть левотироксина, покидая кровоток, поглощается печенью. Часть дозы левотироксина метаболизируется до трийодтиронина.

Ликвидация

Левотироксин выводится с мочой в виде свободного лекарственного средства, дейодированных метаболитов и конъюгатов. Некоторое количество левотироксина выводится с калом. Перенос левотироксина через плаценту ограничен.

Нет релевантных данных.

Цитрат натрия BP

Лактоза БП

Крахмал кукурузный БП

Порошок акации БП

Стеарат магния BP

24 месяца для полипропиленовой тары.

24 месяца для блистерной упаковки.

Не хранить при температуре выше 25 ° C. Хранить в оригинальной упаковке в защищенном от света и влаги месте.

Контейнер из полипропилена с крышкой из полиэтилена низкой плотности с защитой от вскрытия, содержащий 28, 56, 112, 100 или 1000 таблеток элтроксина по 100 мкг.

Блистерная упаковка из ПВХ / ПВДХ пленки (термообработанная фольга / термосварочный лак), содержащая 28, 56 и 112 таблеток элтроксина по 100 мкг.

Доступны не все размеры упаковок.

Нет особых требований по утилизации.

Любой неиспользованный лекарственный препарат или отходы следует утилизировать в соответствии с местными требованиями.

Mercury Pharma Group Ltd

Capital House, 85 King William Street,

Лондон EC4N 7BL, Великобритания

Дуг, уродливый новозеландский картофель, может быть самым большим в мире

ВЕЛЛИНГТОН, Новая Зеландия (AP) – Колин и Донна Крейг-Браун прополивали свой сад в Новой Зеландии, когда мотыга Колина ударилась о что-то огромное прямо под поверхностью почвы.

Когда пара опустилась на колени и начала копать вокруг объекта, Колин задумался, не был ли это какой-то странный грибок, гигантский клубок. После того, как Колин вытащил ее садовой вилкой, он поскреб немного кожуры и попробовал ее на вкус.

Картошка.

«Мы не могли поверить в это, – сказала Донна. – Это было просто огромно».

И не совсем красиво. Донна описывает его внешний вид как уродливый мутантский вид.

Но, возможно, это самый крупный картофель за всю историю наблюдений. Когда пара затащила его в свой гараж и поставила на свои старые весы, он весил удивительные 7,9 кг (17,4 фунта). Это равняется паре мешков обычной картошки или одной маленькой собачке.

За несколько недель, прошедших после их необычной находки 30 августа, картофель пары стал чем-то вроде знаменитости на их небольшой ферме недалеко от Гамильтона. Они назвали картофель Дуг в честь того, как его нашли, и Колин даже построил небольшую тележку, чтобы буксировать Дуга.

«Мы надели на него шляпу. Мы разместили его на Facebook, взяли на прогулку, подарили ему немного солнышка », – сказал Колин. «Это все немного весело. Удивительно, что развлекает людей ».

Более официальное взвешивание в местном фермерском магазине показало, что Дуг весит 7,8 кг. Самый тяжелый картофель занесен в Книгу рекордов Гиннеса – монстр из Британии в 2011 году весил чуть менее 5 кг. Пара говорит, что они обратились в Guinness с просьбой признать Дуга и ждут ответа.

Guinness заявила, что не может поделиться информацией о заявке и что британский картофель остается рекордсменом, по крайней мере, на данный момент.

Колин сказал, что у него нет секретных советов по садоводству. Обычно они бросают на огород кучу коровьего навоза и соломы и смотрят, что происходит. Он сказал, что они выращивали огурцы в этом участке своего сада до того, как сорняки взяли верх, и не сажали картофель. Дуг, должно быть, был самосеян и, вполне возможно, рос пару лет или больше.

«Для меня это загадка, – сказал Колин. «Это один из маленьких приятных сюрпризов природы».

Но оказалось, что за Дугом нелегко ухаживать. Когда пара показала картофель, он начал сохнуть и худеть. Из его ран начала расти плесень.

«Он стал немного пони», – сказал Колин, имея в виду запах картофеля.

Итак, Колин вымыл Дуга изо всех сил и положил картофель в морозилку, где он и остался.

Но Колин, возможно, еще не закончил с Дугом. Колин, пивовар-любитель, сказал, что очень хочет превратить Дуга в хорошую каплю картофельной водки.

Уродливый новозеландский картофель Дуг может стать крупнейшим в мире

ВЕЛЛИНГТОН, Новая Зеландия (AP) – Колин и Донна Крейг-Браун прополивали свой сад в Новой Зеландии, когда мотыга Колина ударилась о что-то огромное прямо под поверхностью почвы.

Когда пара опустилась на колени и начала копать вокруг объекта, Колин подумал, не было ли это какого-то странного грибкового образования, гигантского клубочка.После того, как Колин вытащил ее садовой вилкой, он поскреб немного кожуры и попробовал ее на вкус.

Картошка.

«Мы не могли поверить в это», – сказала Донна. «Это было просто огромно».

И не совсем красиво. Донна описывает его внешний вид как уродливый мутантский вид.

Но, возможно, это самый крупный картофель за всю историю наблюдений. Когда пара затащила его в свой гараж и поставила на свои старые весы, он весил удивительные 7,9 кг (17,4 фунта).Это равняется паре мешков обычной картошки или одной маленькой собачке.

За несколько недель, прошедших после их необычной находки 30 августа, картофель пары стал чем-то вроде знаменитости на их небольшой ферме недалеко от Гамильтона. Они назвали картофель Дуг в честь того, как его нашли, и Колин даже построил небольшую тележку, чтобы буксировать Дуга.

«Мы надели на него шляпу. Мы разместили его на Facebook, взяли на прогулку, подарили ему немного солнышка », – сказал Колин. «Это все немного весело. Удивительно, что развлекает людей.”

Более официальное взвешивание в местном фермерском магазине показало, что Дуг весит 7,8 кг. Самый тяжелый картофель занесен в Книгу рекордов Гиннеса – монстр из Британии в 2011 году весил чуть менее 5 кг. Пара говорит, что они обратились в Guinness с просьбой признать Дуга и ждут ответа.

Guinness заявила, что не может поделиться информацией о заявке и что британский картофель остается рекордсменом, по крайней мере, на данный момент.

Колин сказал, что у него нет никаких секретных советов по садоводству.Обычно они бросают на огород кучу коровьего навоза и соломы и смотрят, что происходит. Он сказал, что они выращивали огурцы на этом участке своего сада до того, как сорняки взяли верх, и не сажали картофель. Дуг, должно быть, был самосеян и, вполне возможно, рос пару лет или больше.

«Для меня это загадка, – сказал Колин. “Это один из маленьких приятных сюрпризов природы”.

Но за Дугом нелегко ухаживать. Когда пара показала картофель, он начал сохнуть и худеть.Из его ран начала расти плесень.

«Он стал немного пони», – сказал Колин, имея в виду запах картофеля.

Итак, Колин вымыл Дуга изо всех сил и положил картофель в морозилку, где он и остался.

Но Колин, возможно, еще не закончил с Дугом. Колин, пивовар-любитель, сказал, что очень хочет превратить Дуга в хорошую каплю картофельной водки.

Авторские права © Ассошиэйтед Пресс. Все права защищены. Этот материал нельзя публиковать, транслировать, переписывать или распространять.

Отвар муфангджи и его активный ингредиент Спирт пачули ингибирует рост опухоли посредством регулирования Akt / mTOR-опосредованной аутофагии при немелкоклеточном раке легкого

Предпосылки . Немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) является основным типом рака легкого, заболеваемость и смертность которого занимают первое место среди злокачественных опухолей.Более чем у 70% пациентов с НМРЛ диагностируется местно-распространенная или продвинутая стадия, за исключением лучшего периода операции. Химиотерапия и таргетная терапия являются важными средствами лечения распространенного НМРЛ, но различные побочные эффекты серьезно влияют на лечебный эффект и качество жизни пациентов с НМРЛ. Наша предыдущая клиническая практика показала, что отвар муфангджи, классический традиционный китайский лекарственный препарат, оказывает значительное лечебное действие при лечении НМРЛ, но конкретный механизм не ясен.Это исследование направлено на изучение потенциального механизма действия отвара муфангджи и его активного ингредиента – спирта пачули против НМРЛ и обеспечение научной основы для профилактики и лечения НМРЛ с помощью традиционной китайской медицины. Методы . Эксперименты in vivo и in vitro были проведены для оценки противоопухолевых эффектов и изучения механизма, лежащего в основе отвара Mufangji и его активного ингредиента – спирта пачули. Сетевая фармакология была применена для анализа эффективных ингредиентов и потенциальных мишеней или сигнальных путей отвара Муфанджи. Результаты . Наше текущее исследование показывает, что отвар Mufangji может эффективно подавлять рост подкожной трансплантации NSCLC. Следующий сетевой фармакологический анализ и эксперимент in vivo позволяют предположить, что спирт пачули является одним из основных активных ингредиентов отвара Mufangji и оказывает противоопухолевое действие. Дальнейшее исследование механизма показывает, что противоопухолевый эффект алкоголя пачули связан с индукцией аутофагии, опосредованной сигнальным путем Akt / mTOR, в клетках NSCLC. Заключение . Отвар Mufangji и его активный ингредиент – спирт пачули могут оказывать противоопухолевое действие при НМРЛ отчасти за счет регулирования Akt / mTOR-опосредованной аутофагии, обеспечивая доказательство того, что традиционная китайская медицина может быть ключевым подходом к лечению НМРЛ посредством нацеливания на сигнальную ось Akt / mTOR.

1. Предпосылки

Рак легкого – это злокачественная опухоль, которая серьезно угрожает здоровью человека, и ее заболеваемость и смертность занимают первое место среди злокачественных опухолей [1, 2].Рак легкого подразделяется на немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) и мелкоклеточный рак легкого (МРЛ) в соответствии с его патологическими характеристиками. Среди них НМРЛ составляет около 80–90%. При раке легкого на ранней стадии применяется хирургическое лечение, но более 70% пациентов на момент постановки диагноза являются местно-распространенными или продвинутыми, что приводит к чрезвычайно плохому прогнозу [3, 4]. Традиционная химиотерапия имеет низкую селективность по отношению к опухолевым клеткам, ее эффективность составляет всего 20–30%. Уничтожая опухолевые клетки, химиотерапия также вызывает определенные повреждения нормальных клеток, вызывая различные побочные реакции и серьезно влияя на качество жизни пациентов [5, 6].Поэтому поиск более эффективных методов лечения стал первоочередной задачей, которую необходимо срочно решить при лечении рака легких.

Многолетняя клиническая практика показывает, что традиционная китайская медицина играет все более важную роль в лечении рака легких и других злокачественных опухолей. Классический состав китайской медицины, отвар муфангджи, состоит из муфанджи (Radix Cocculi Trilobi), гуйчжи (веточка кассии), реншен (женьшень) и шигао (гипс). В последние годы исследования показали, что отвар муфангджи имеет хороший эффект при лечении мокроты, кашля, астмы и злокачественной плевральной жидкости [7].Наша предыдущая клиническая практика также показала, что отвар Муфангжи оказывает значительное лечебное действие при лечении НМРЛ, но основной механизм не ясен. Таким образом, это исследование направлено на использование экспериментов in vivo и in vitro в сочетании с сетевой фармакологией, чтобы изучить потенциальный механизм действия отвара Муфангжи и его активных ингредиентов против НМРЛ и предоставить научную основу для профилактики и лечения НМРЛ с помощью традиционной китайской медицины. .

2.Методы

2.1. Культура клеток

Рак легких человека Клетки A549 были приобретены в ATCC (США) и культивированы в среде RPMI1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, в увлажненном, 5% CO ₂ , инкубаторе 37 ° C.

2.2. Приготовление лекарств

Отвар муфангджи состоит из муфангджи (Radix Cocculi Trilobi), Guizhi (веточка кассии), Renshen (женьшень) и Shigao (гипс). Результат контроля качества отвара Mufangji (MFJD) был представлен в дополнительных материалах (доступных здесь).В соответствии с соотношением компонентов соединения, концентрация неочищенного лекарственного средства регулируется после отварки и осаждения. Концентрация отвара Муфангджи была разделена на три концентрации – 0,3 г / мл, 0,6 г / мл и 1,2 г / мл – и затем хранилась в холодильнике при 4 ° C для дальнейшего использования. Для экспериментов in vivo спирт пачули готовили следующим образом: стандартные кристаллы спирта пачули растворяли в физиологическом растворе, содержащем 5% ДМСО, и концентрацию спирта пачули устанавливали как 5 мг / кг (низкая доза), 10 мг / кг (средняя доза). ) и 15 мг / кг (высокая доза).Для экспериментов in vitro спирт пачули готовили следующим образом: стандартные кристаллы спирта пачули растворяли и разбавляли ДМСО до исходной концентрации 200 ммоль / л, а затем хранили в холодильнике при 4 ° C. Конечная концентрация ДМСО во время приема должна быть менее 0,1%. Установки концентрации спирта пачули для клеточных экспериментов: 50 мкг г / мл (низкая доза), 75 мкг г / мл (средняя доза) и 100 мкг г / мл (высокая доза).

2.3. Вестерн-блоттинг

Клетки

A549 с различной обработкой лизировали, а затем центрифугировали при 4 ° C и 12000 об / мин. Собранный супернатант определяли количественно. 40 мкМ г образца белка добавляли к буферу для загрузки белка и денатурировали. Затем каждый предварительно обработанный образец подвергали электрофорезу белка в полиакриламидном геле и переносили на PVDF-мембрану. Мембрану для переноса белка блокировали 5% -ным блокирующим раствором BSA в течение 2 часов при комнатной температуре с последующей обработкой первичными и вторичными антителами.Основные используемые антитела: p-Akt (CST, США), Akt (CST Reagents, США), p-mTOR (CST, США), mTOR (CST, США), LC3-II / I (CST, США), беклин. -1 (CST, США), p-AMPK α (CST, США), p-p38-MAPK (CST, США), PCNA (CST, США) и GAPDH (CST, США). Вторичное антитело представляло собой меченный HRP козий анти-кроличий / мышиный IgG. Количественный анализ выполняли с использованием программного обеспечения Quantity One, и экспрессия GAPDH в той же дорожке была нормализована. Все определения проводят в трех экземплярах и независимо повторяют не менее трех раз.

2.4. Анализ CCK-8

Клетки A549 в логарифмической фазе роста высевали в 96-луночный планшет с 5 × 10 ³ клеток на лунку. После ночного культивирования клетки обновляли лечебной средой, и концентрации спирта пачули составляли 0, 25, 50, 75, 100 и 200 мкг г / мл. Для каждой группы было приготовлено 6 дублирующих лунок. Через 24 часа в каждую лунку добавляли 10% (об. / Об.) Раствора CCK-8 и тщательно перемешивали. После инкубации при 37 ° C в течение 4 ч оптическую плотность (A) при 490/630 нм (две длины волны) определяли с помощью считывающего устройства для микропланшетов.Уровень выживаемости клеток (%) = [(экспериментальная группа – пустая группа) / (группа отрицательного контроля – пустая группа)] × 100%.

2,5. Конструирование линии клеток A549-mRFP-GFP-LC3

Клетки A549 в логарифмической фазе роста высевали в 96-луночные планшеты с 5 × 10 ³ клеток на лунку. Клетки A549, инфицированные лентивирусом mRFP-GFP-LC3, с MOI 100: 1. Одновременно добавляли 10 пг / мл полибрена для повышения эффективности трансфекции лентивирусом. Через 72 часа эффективность трансфекции определяли с помощью флуоресцентного микроскопа, чтобы убедиться, что было видно более 95% зеленых флуоресцентно меченных клеток.Затем клон одной клетки собирали и переносили в 24-луночный планшет для пролиферации клеток. После 3 или более пассажей доля флуоресцентно меченых клеток была стабильной. Когда флуоресцентно меченые клетки составляли 95%, была получена линия клеток A549-mRFP-GFP-LC3, стабильно экспрессирующая флуоресцентный белок LC3.

2.6. Обнаружение аутофагии

Клеточные линии A549-mRFP-GFP-LC3 в фазе логарифмического роста высевали в 24-луночные планшеты с 5 × 10 ⁴ клеток на лунку.Добавляли среды, содержащие спирт пачули в конечной концентрации 100 мкг г / мл и 0,5% ДМСО. Через 24 часа флуоресцентную агрегацию наблюдали под флуоресцентным микроскопом (400 ×). Степень аутофагии определяли по феномену агрегации флуоресценции LC3 (желтое пятно), в котором перекрываются GFP (зеленая флуоресценция) и RFP (красная флуоресценция). Для расчета доли аутофагии в общем количестве клеток случайным образом были выбраны 5 полей зрения.

2.7. Эксперимент на животных

голых мышей BALB / c (возраст 4–6 недель, 18–20 г) были приобретены у Shanghai Slack Experimental Animal Co., Ltd. и выращены в отдельных клетках в Центре экспериментальных животных Шанхайского университета. традиционной китайской медицины. Клетки A549 инокулировали при плотности клеток 2 × 10 ⁶ клеток / 100 мкл л для создания модели подкожной опухоли голых мышей. После 10 дней инокуляции мышей лечили лекарствами. Через 42 дня мышей умерщвляли, опухоли удаляли и фиксировали параформальдегидом для последующего тестирования.Все эксперименты на животных проводились в соответствии с Национальными рекомендациями по исследованиям на животных и были одобрены этическим комитетом больницы Шугуан Шанхайского университета традиционной китайской медицины.

2,8. Иммуногистохимия

Тело опухоли, фиксированное параформальдегидом, последовательно обрабатывается на этапах дегидратации, встраивания, извлечения антигена, инактивации активности эндогенного фермента, инкубации антител, проявления окраски с помощью красителя и окрашивания ядра.Готовую пленку фотографируют под микроскопом.

2.9. Статистический анализ

Статистические данные выражены как среднее значение ± стандартное отклонение с использованием программного обеспечения SPSS 25.0, и для сравнения различий между каждой группой использовался односторонний дисперсионный анализ. указывает, что разница статистически значима.

3. Результаты

3.1. Отвар Mufangji подавляет рост NSCLC при подкожной трансплантации

Во-первых, мы исследовали ингибирующее действие отвара Mufangji традиционной китайской медицины на рост NSCLC при подкожной трансплантации.Мы установили три дозы отвара Муфангджи – низкую, среднюю и высокую – чтобы проверить противоопухолевый эффект отвара Муфангджи in vivo. Экспериментальные результаты показывают, что после того, как различные дозы отвара муфангджи вводили в желудок в течение 42 дней, три дозы отвара муфангджи могут подавлять рост подкожно пересаженных опухолей дозозависимым образом (рис. 1 (а)). После внутрижелудочного введения в течение 42 дней мы хирургическим путем удалили подкожно трансплантированные опухоли в каждой группе и взвесили массу тела опухоли.Результаты показали, что три дозы отвара Mufangji снижали вес опухолей, пересаженных подкожно, при НМРЛ дозозависимым образом (рисунки 1 (b) и 1 (c)). При этом степень подавления опухоли составила 33,64% в группе с низкой дозой, 55,27% в группе со средней дозой и 62,47% в группе с высокой дозой (рис. 1 (d)). Кроме того, в эксперименте мы также проверили побочный эффект отвара Mufangji на модели мышей NSCLC, включая потерю веса, гепатотоксичность, почечную недостаточность и т. Д., и никаких побочных эффектов не наблюдалось. Приведенные выше результаты исследований показывают, что отвар муфангжи может подавлять рост опухолей, пересаженных подкожно, в зависимости от дозы.

3.2. Сетевой фармакологический анализ отвара Mufangji

Согласно базам данных сетевой фармакологии (включая рак HSP, TCMSP, TCMID, TCM-PTD, TCM Database @ Taiwan) в сочетании с принципами OB> 30%, DL> 0,18 и т. Д. были проверены активные ингредиенты отвара Mufangji.Результаты показали, что в Муфангджи, Гуйчжи и Реншен было 26, 219 и 190 соединений, соответственно, и всего 1 соединение в Сигао. Основные активные ингредиенты включают 7-эпитаксол, магнограндиолид, N-метилфлиндерсин, гесперетин, бета-ситостерин, спирт пачули, тетраневрин А и т. Д. (Рис. 2 (а)). Для этих активных ингредиентов мы использовали базу данных DrugBank для определения их мишеней и отсеивали в общей сложности 2772 мишени (рис. 2 (b)). Для этих мишеней функциональный анализ GO предполагает, что ключевые мишени отвара Mufangji в основном связаны с фосфорилированием белка, лекарственным ответом, регуляцией пролиферации клеток и регуляцией сигналов MAPK и ERK (рис. 2 (c)).Анализ пути KEGG показал, что ключевые мишени отвара Mufangji в основном связаны с процессами биологической регуляции, такими как опосредованные интерлейкином сигнальные пути, регуляция апоптоза, регуляция запрограммированной гибели клеток и пути транскрипции ядерных рецепторов (рис. 2 (d)).

3.3. Алкоголь пачули подавляет рост клеток NSCLC

Согласно результатам сетевого фармакологического анализа, приведенным выше, а также результатам нашего контроля качества отвара муфанджи в дополнительных материалах, спирт пачули является важным активным ингредиентом отвара муфанджи.Объединив соответствующую литературу [8], мы затем сосредоточимся на изучении того, оказывает ли спирт пачули ингибирующее действие на пролиферацию клеток NSCLC и рост подкожных ксенотрансплантатов NSCLC. В эксперименте in vitro концентрация спирта пачули была установлена ​​как 25 мкг г / мл, 50 мкг г / мл, 75 мкг г / мл, 100 мкг г / мл и 200 мкг / мл. г / мл для лечения клеток рака легких A549 в течение 48 часов. Результаты CCK-8 показали, что спирт пачули оказывал значительное ингибирующее действие на пролиферацию клеток A549 дозозависимым образом (рис. 3 (а)).В части эксперимента in vivo спирт пачули был разделен на низкие (5 мг / кг), средние (10 мг / кг) и высокие (15 мг / кг) дозы для внутрибрюшинного введения мышам с трансплантированным NSCLC. Результаты экспериментов на животных показали, что по сравнению с контрольной группой все низкие, средние и высокие дозы спирта пачули могут подавлять рост подкожно пересаженной опухоли дозозависимым образом (рис. 3 (b)). Через 42 дня внутрижелудочного введения опухоли, пересаженные подкожно, в каждой группе удаляли хирургическим путем и взвешивали вес опухоли.Результаты показали, что по сравнению с контрольной группой все низкие, средние и высокие дозы спирта пачули снижали вес опухолей, пересаженных подкожно, при НМРЛ дозозависимым образом (Фигуры 3 (b) и 3 (c)). Степень ингибирования опухоли составляла 23,48% в группе с низкой дозой, 50,05% в группе со средней дозой и 66,32% в группе с высокой дозой (рис. 3 (d)). Кроме того, побочный эффект пачулиевого спирта на модели мышей NSCLC также был проверен, и никаких побочных эффектов не наблюдалось. Приведенные выше результаты исследования показывают, что спирт пачули, активный ингредиент отвара Муфангджи, может подавлять рост опухолей подкожной трансплантации НМРЛ в зависимости от дозы.

3.4. Алкоголь пачули индуцирует аутофагию клеток NSCLC in vitro

Рекомбинантный аденовирус mCherry-GFP-LC3 может эффективно экспрессировать гибридный белок красного флуоресцентного белка mCherry, зеленого флуоресцентного белка GFP и LC3B в клетках-мишенях после заражения клеток, показывая ярко-красный цвет. и зеленая флуоресценция. Чтобы проверить, подвергаются ли клетки A549 аутофагии после обработки спиртом пачули, клетки A549 инфицировали рекомбинантным аденовирусом mCherry-GFP-LC3, а затем клетки A549 обрабатывали спиртом пачули в течение 48 часов, чтобы наблюдать, образовались ли пятна аутофагии под воздействием флуоресцентный микроскоп.После обработки клеток A549 100 мкл г / мл спирта пачули в течение 48 часов было обнаружено, что mCherry-GFP-LC3 накапливается на мембране аутофагосомы под флуоресцентным микроскопом, что проявляется в виде зеленых и красных пятен, и слияние превратилось в желтые пятна (рис. 4 (а)). Кроме того, мы использовали вестерн-блоттинг для определения экспрессии ключевых маркеров аутофагии, LC3-II / I и беклина-1. Результаты показали, что алкоголь пачули может активировать соотношение белка LC3 II / I и экспрессию беклина-1 в клетке рака легкого A549 (Рисунки 4 (b) –4 (d)).Вышеупомянутые эксперименты in vitro подтвердили, что спирт пачули может вызывать аутофагию клеток NSCLC A549.

3.5. Алкоголь пачули индуцирует аутофагию клеток NSCLC in vivo

Ранние эксперименты in vitro показали, что спирт пачули может вызывать аутофагию клеток рака легких A549, но влияние спирта пачули на опухоли, пересаженные подкожно при NSCLC in vivo, неясно. Следовательно, следующим шагом является обнаружение экспрессии белков LC3, беклина-1, связанных с аутофагией, и белка PCNA, связанного с пролиферацией, в подкожных тканях ксенотрансплантата НМРЛ при лечении различными дозами спирта пачули.Экспериментальные результаты показали, что по сравнению с модельной контрольной группой, экспрессия белков LC3 и беклина-1, связанных с аутофагией, была значительно повышена, а экспрессия белка PCNA, связанного с пролиферацией, была значительно снижена, что соответствовало эффектам предыдущей клетки. эксперимент (рисунки 5 (a) –5 (c)), дополнительно подтверждающий индукцию аутофагии клеток NSCLC спиртом пачули.

3.6. Алкоголь пачули регулирует связанный с аутофагией сигнальный путь Akt / mTOR

AMPK, MAPK, Akt / mTOR и другие сигнальные пути, как в настоящее время известно, тесно связаны с аутофагией.Чтобы изучить потенциальный механизм аутофагии рака легких, вызванной алкоголем пачули, мы обнаружили экспрессию белков, связанных с AMPK, MAPK и Akt / mTOR, в клетках NSCLC, обработанных спиртом пачули. Экспериментальные результаты показали, что по сравнению с контрольной группой, экспрессия белков p-Akt и p-mTOR, связанных с сигнальным путем Akt-mTOR, значительно подавлялась алкоголем пачули в зависимости от дозы (рисунки 6 (а)). и 6 (b)), в то время как ключевые белки, связанные с сигнальными путями AMPK и MAPK, p-AMPK , α и p-p38-MAPK, существенно не изменились (рисунки 6 (a) и 6 (b)), что позволяет предположить, что спирт пачули -индуцированная аутофагия NSCLC может быть связана с регуляцией сигнального пути Akt / mTOR.

Затем, используя вышеупомянутый НМРЛ, подкожно трансплантированные опухолевые ткани, мы дополнительно проверили, оказывает ли спирт пачули регулирующий эффект на пути AMPK, MAPK и Akt / mTOR. Результаты иммуногистохимии показали, что по сравнению с контрольной группой, экспрессия белков p-Akt и p-mTOR значительно снижалась под действием алкоголя пачули в зависимости от дозы (фиг. 6 (c)). Однако алкоголь пачули не оказывает очевидного регулирующего действия на экспрессию p-AMPK-, α и p-p38-MAPK (рисунок S1).Этот результат также предполагает, что спирт пачули может вызывать аутофагию клеток NSCLC через путь Akt / mTOR.

4. Обсуждение

В настоящее время заболеваемость и смертность от рака легких в мире и Китае занимают первое место среди злокачественных новообразований [1, 2, 9]. По морфологии опухолевых клеток рак легкого делится на две категории: НМРЛ и МРЛ. На НМРЛ приходится более 80% случаев рака легких в Китае. Хирургическое лечение часто используется при НМРЛ на ранней стадии, но более 70% пациентов с НМРЛ диагностируются как местно-распространенные или запущенные заболевания, что приводит к задержкам в диагностике и лечении НМРЛ.Химиотерапия и таргетная терапия являются важными средствами лечения распространенного НМРЛ, но различные побочные эффекты серьезно влияют на качество жизни пациентов с НМРЛ.

Многолетняя клиническая практика показывает, что традиционная китайская медицина (ТКМ) играет все более важную роль в лечении рака легких и других злокачественных опухолей. Несколько исследований показали, что отвар муфангжи эффективен при лечении мокроты, кашля и астмы [7], а также при лечении злокачественного плеврального выпота [10].Наша предыдущая клиническая практика также показала, что отвар муфангджи эффективен при лечении НМРЛ, но конкретный терапевтический механизм не ясен. В этом исследовании мы впервые подтвердили в экспериментах in vivo, что отвар Mufangji может подавлять рост опухолей, пересаженных подкожно, в зависимости от дозы. Тем не менее, неясно, какие активные ингредиенты в отваре Муфангджи работают и как работает их механизм действия.

TCM и ее составные рецепты обладают действием нескольких компонентов и нескольких целей.Исследование в новой области «сетевая фармакология традиционной китайской медицины» основано на теории системной биологии, направлено на раскрытие тайны рецептов традиционной китайской медицины на системном и молекулярном уровнях, а также на содействие изменению режима исследований традиционной китайской медицины с нынешнего. От модели «одна мишень, одно лекарство» к новой модели «сетевой мишень, многокомпонентные лекарства». Предварительные результаты исследований показывают, что сетевая фармакология традиционной китайской медицины может предоставить новый способ для традиционной китайской медицины перейти от медицины, основанной на опыте, к медицине, основанной на доказательствах, и ускорить процесс открытия лекарств традиционной китайской медицины, одновременно улучшая текущие стратегии исследования лекарств и позволяя проводить предварительный анализ лекарств, влияющих на здоровье человека. сеть болезней [11–13].В этом исследовании мы проверили основные активные ингредиенты отвара муфанджи с помощью сетевой фармакологии и обнаружили, что спирт пачули (ПА) является важным активным ингредиентом отвара муфанджи. Спирт пачули является основным активным ингредиентом тетрандрина [14], трициклического сесквитерпенового соединения с молекулярной формулой C15h36O и молекулярной массой 222,37. Исследования показали, что алкоголь пачули обладает значительными противоопухолевыми эффектами [15], такими как эффективное ингибирование пролиферации и индукция апоптоза клеток рака простаты человека PC3 [16] и ингибирование пролиферации линии клеток рака легких человека A549 [4].В этом исследовании мы обнаружили с помощью экспериментов in vivo и in vitro, что спирт пачули оказывает очевидное ингибирующее действие на рост опухолей подкожной трансплантации NSCLC и может значительно ингибировать пролиферацию клеток NSCLC.

Аутофагия, также известная как запрограммированная гибель клеток типа II, относится к процессу самопереваривания и абсорбции клеток, характеризующемуся аутофагосомами, заключенными в двухслойные мембранные везикулы [17]. Аутофагия обычно делится на три категории: макроаутофагия, малая аутофагия и аутофагия, опосредованная шаперонами [18].Макроаутофагия – это также то, что мы обычно называем аутофагией, которая переносит вещества, подлежащие разложению, в лизосомы посредством образования аутофагосом [19]. Исследования показали, что связанные с аутофагией гены LC3 и беклин-1 участвуют в образовании аутофагосом [20], а продукция LC3 является наиболее важным маркером аутофагии [21, 22]. Когда эукариотические клетки подвергаются аутофагии, преобразование LC3-I в LC3-II в клетке значительно увеличивается. Результаты нашего эксперимента in vitro показали, что спирт пачули может вызывать аутофагию клеток NSCLC, повышая соотношение белка LC3 II / I и экспрессии беклина-1.Более того, наш эксперимент in vivo дополнительно подтвердил эффект спирта пачули на индукцию аутофагии клеток NSCLC за счет усиления экспрессии белков LC3 и беклина-1, связанных с аутофагией, и подавления экспрессии связанного с пролиферацией белка PCNA.

Исследования также показали, что в регуляции аутофагии опухолевых клеток участвуют множественные пути передачи сигналов, такие как AMPK, MAPK, Akt / mTOR и другие сигнальные пути [23-25]. В этом исследовании, будь то в экспериментах in vitro или in vivo, спирт пачули может вызывать аутофагию в клетках NSCLC и оказывает значительное регулирующее влияние на ключевой сигнальный путь, связанный с аутофагией, Akt / mTOR, в то время как он мало влияет на фагоцитарные пути AMPK. и MAPK, предполагая, что спирт пачули может индуцировать аутофагию в клетках NSCLC через сигнальный путь Akt / mTOR.Однако в будущем потребуется больше клеточных линий НМРЛ для дальнейшей проверки наших данных, что даст более убедительные доказательства разработки и применения отвара муфангджи и спирта пачули в терапии НМРЛ.

5. Заключение

Это исследование показало, что отвар Mufangji оказывает очень эффективное ингибирующее действие на рост опухолей подкожной трансплантации NSCLC. Кроме того, с помощью сетевой фармакологии мы выявили один из важных активных ингредиентов отвара Mufangji – спирт пачули.Дальнейшие эксперименты in vivo и in vitro показали, что противораковое действие алкоголя пачули связано с индукцией аутофагии клеток NSCLC, а его механизм связан с регуляцией сигнального пути Akt / mTOR (рис. 7). Следовательно, нацеливание на сигнальную ось Akt / mTOR может обеспечить ключевой подход к лечению НМРЛ. В то же время это исследование обеспечивает предварительную экспериментальную основу для применения отвара муфангджи и спирта пачули в клиническом лечении НМРЛ.

Аббревиатуры

коллекция

AKT:	Протеинкиназа B
AMPK:	Аденозин-5′-монофосфат (AMP) -активированная протеинкиназа	, американская культура	4
CCK-8:	Набор для подсчета клеток-8
ДМСО:	Диметилсульфоксид
ERK:	Внеклеточная регулируемая протеинкиназа
GO: ген
:	Киотская энциклопедия генов и геномов
MAPK:	Митоген-активируемая протеинкиназа
MFJD:	Mufangji отвар
Mufangji отвар 9889
mSC57 mSC57 мишень rapamycin 9889 MSC57		mSC57	Немелкоклеточный рак легкого
PA:	Пачули-спирт
PVDF:	Поливинилиденфторид
SCLC:	Мелкоклеточный рак легкого
TCM:	Традиционная китайская медицина.

Доступность данных

В статью включены данные, использованные для подтверждения результатов этого исследования.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов

Ци Ли и Цин Цзи разработали исследование и подготовили рукопись. Лю Ян, Хуню Чен, Жуйсяо Ли, Хаозе Ли и Син Жуй проводили эксперименты. Цин Цзи, Ниннин Лю, Хаозе Ли и Жуйсяо Ли проанализировали данные.Ци Ли и Цин Джи разработали проект и руководили им. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись. Лю Ян, Хуню Чен и Жуйсяо Ли внесли равный вклад в эту работу.

Благодарности

Это исследование было поддержано грантами Китайского национального фонда естественных наук (813), Научного фонда Шанхайского комитета по научным проектам (19ZR1438000) и проекта по культивированию Национального фонда естественных наук Китая из Шанхая. Больница интегрированной традиционной китайской и западной медицины Баошань (GZRPYJJ-201801).

Дополнительные материалы

Рисунок S1. Иммуногистохимия была проведена для обнаружения эффекта спирта пачули на экспрессию p-AMPK , α и белка p-p38-MAPK в подкожно трансплантированных опухолевых тканях NSCLC. По сравнению с контрольной группой. Определение компонентов контроля качества в сложных рецептах: Отвар Муфангжи (MFJD). (Дополнительные материалы)

«Ои», бывший национальный тяжелоатлет Таиланда, возвращается на сцену в битвах за золото Мао Рип 3 «Чемпионат Таиланда EGAT»

«Ой», бывшая национальная тяжелоатлетка Таиланда. Возвращаясь на сцену для организации муниципальной спортивной школы Накхон Саван, команда А Мао сглаживает 3 золотых медали, готовясь побить рекорд Таиланда по рывку и общему весу, женская модель 45 кг. на стороне «Тирапонг Силачай» из Ассоциации тяжелой атлетики Сисакет в одиночку завоевал 3 золотых медали, например, вместе, модель 55 кг среди мужчин на чемпионате Таиланда по тяжелой атлетике EGAT 2021, в первый день Народного уровня в Гимназии 2, Чианг Стадион 700-летия Май, провинция Чиангмай.

EGAT Competition (EGAT) Чемпионат Таиланда по тяжелой атлетике в 2021 году Уровень людей С 30 октября по 2 ноября 2021 года в гимназии 2, стадион 700-летия Чиангмая, провинция Чиангмай По-прежнему закрытая гонка в соответствии с профилактическими мерами против распространения COVID -19 virus В первый день соревнований (30 октября), начиная с модели мужчины 55 кг, выяснилось, что «Терапонг Силачай» из Ассоциации тяжелой атлетики провинции Сисакет показал отличное выступление в одиночку, 3 золотые медали рывком. поза, подъем 106 кг, толчок 125 кг, общий вес 231 кг.Наттават Чомчуен из провинциальной ассоциации тяжелой атлетики Сисакет получил 3 серебряные медали, рывок 96 кг, толчок и юрг 120 кг, общий вес 216 кг, а Анон Йодкунтход из спортивной школы провинции Накхон Саван получил 2 бронзовые медали в рывке 90 кг. , общий вес 197 кг. В то время как Санханат Пхумчайя из муниципальной спортивной школы Накхон Саван, команда А завоевала бронзовую медаль. Толчок 109 кг.

Женщина, 45 кг, модель «Oi» Premsiri Boonpitak Бывшая национальная штангистка Таиланда, которой в настоящее время 37 лет, она стала тренером муниципальной спортивной школы Накхон Саван, команда А снова возвращается на сцену. Мао все еще отлично справляется со своей работой. гладко 3 золотые медали, готовые побить рекорд Таиланда в рывке после подъема 68 кг, побив предыдущий рекорд Нонгнафат Сингла, который набрал 65 кг, установленный Ассоциацией любителей тяжелой атлетики Таиланда.Предоставление призовых денег для побития рекордов рывков и толчков и судейства 3000 бат за килограмм, толчков и юргов 77 килограммов, общий вес 145 килограммов, побив предыдущий рекорд Панадды Намчотэ, который составил 144 килограмма, что касается серебряной медали. Нарис Рабиам Хунтход из спортивной школы провинции Супханбури, команда А завоевала 3 серебряные медали, рывок 55 кг, толчок 62 кг, общий вес 117 кг. Кулсатри Канья из команды А провинциальной спортивной школы Анг Тонг завоевала 3 бронзовые медали.Рывок 53 кг, толчок и судья 59 кг, общий вес 112 кг.

Модель 49 кг Рожана Саенпуанг из спортивной школы провинции Супханбури, команда A, выиграла 3 золотые медали, рывок 70 кг, толчок 90 кг и общий вес 160 кг, а Нонгнафат Сингла из спортивной школы команды A провинции Супханбури выиграла 3 серебряные медали. рывок 66 кг, толчок 76 кг и общий вес 142 кг, а Каньярат Пхуангпае из школы Буэнг Малу Виттайя получил 3 бронзовые медали, рывок 55 кг, толчок 65 кг и общий вес 120 кг.

для желающих могут посмотреть это соревнование Из трансляции через Facebook / thailand tawa, Ассоциацию любительской тяжелой атлетики Таиланда, Youtube: Thailand TAWA Official и www.tawa.or.th до 2 ноября 2021 г., начало в 11:00 каждый день. .

.