Как похудела пугачева фото на 51 кг: диета, фотографии до и после процедуры

0

Содержание

диета, фото до и после


На протяжении всей своей звездной карьеры Алла Пугачева не выходила из привычного образа. Но недавно она просто покорила своей новой красотой толпы поклонников и всю женскую половину человечества. У большинства представительниц прекрасного пола возникает вопрос как похудела Алла Пугачева на столько килограммов, что выглядит теперь на 2 десятка лет моложе?

Ее новые фотографии, выложенные во всемирную сеть интернета, просто поражают наповал. Кардинальная смена имиджа Аллы Борисовны Пугачевой стала самой обсуждаемой тематикой среди информационных журналов и газет. И это не напрасно, ведь бесформенные просторные балахоны сменились на высокие каблучки, обтягивающие одежды, коротенькие платьица и юбки с поясами, подчеркивающими все достоинства фигуры знаменитой звезды эстрады. Новый образ Аллы Борисовны стал ярким примером для женской половины человечества, доказывающим, что иметь красивый внешний вид и чувствовать себя на десятки лет моложе – это вполне реально и достижимо. После ее преображения интернет просто переполнился различными методиками похудения, диетами и разнообразными советами от диетологов.

Правда о похудении Пугачевой. Почему так сильно похудела Алла Пугачева

Феерическое похудение Пугачевой сразу же вызвало большую шумиху в прессе и на телевидение, поэтому, как грибы после дождя, среди всех, интересующихся персоной знаменитости, стали появляться всевозможные сплетни по этому поводу. Если верить слухам о том, почему похудела Пугачева, можно выделить несколько версий столь неожиданного преображения:

  1. Переход на правильное питание или строгая диета.
  2. Медикаментозное похудение с помощью различных препаратов для борьбы с избыточным весом.
  3. Пластическая хирургия для удаления лишнего жира с тела.
  4. Хорошая работа стилистов, которые научили Аллочку одеваться правильно – подобрать гардероб так, чтобы скрыть свои проблемные места.

Однако ни одна из версий не достоверна потому, что не подтверждена самой виновницей всего этого ажиотажа – примадонна и ее ближайшее окружение чудодейственный способ похудения Аллы Борисовны держат в большом секрете.

Диета

Диетологи твердят, что эффективное похудение на 70% зависит от питания, поэтому многие поклонники звезды уверены, что Алла Пугачева похудела благодаря разумной корректировке привычного рациона. Разные источники приписывают звезде разные диеты – кремлевскую, кефирно-огуречную, низкоуглеводную. Сама же примадонна в одном из своих интервью оговорилась, что для того, чтобы похудеть, она просто начала питаться правильно: перестала употреблять соль, сахар и все продукты с их содержанием, вместо них полюбила свежие фрукты и овощи, а еще начала контролировать объемы порций.

Липосакция

Вторая версия о чудесном перевоплощении звезды из тучной престарелой женщины в стройную помолодевшую дюймовочку гласит, что Аллочка могла так быстро измениться только после пластики. Почему быстро? Потому, что с отвесом 25 кг и подтянутой, упругой кожей она вернулась в Россию спустя после трех месяцев пребывания в Израиле. Эксперты похудения скажут, что сбросить вес только на правильном питании, пусть даже с активными ежедневными тренировками, за такой короткий срок просто нереально. Да еще в возрасте под 70!

Однако факт остается фактом – примадонна стала худая, причем выглядит существенно моложе своих биологических лет. Как похудела Пугачева на самом деле – остается загадкой. Версия о липосакции хоть и очень правдоподобная, но тоже недостоверная. Наши врачи удивляются, как могла столь немолодая женщина перенести многочисленные операции бесследно, не навредив здоровью, поэтому очень сомневаются в данном способе похудения Аллы Борисовны.

Одежда

Мнения о волшебном похудении звезды с помощью диет и всевозможных достижений медицины имеют право на жизнь. Однако вполне реалистичным выглядит также заявление стилистов о том, что Пугачева просто научилась правильно одеваться. Они твердят, что для того, чтобы скорректировать фигуру и замаскировать проблемные зоны, звезда постоянно носит утягивающее белье и правильно подбирает одежду, акцентируя внимание на достоинствах – стройных ногах и изящной шее, а талию часто подчеркивает пояском. Какая бы из версий ни была самой правдивой, но худоба и молодость примадонне очень идут!

Секреты стройности Примадонны

На деле же выяснилось, что похудела Алла Пугачёва исключительно благодаря дисциплине и правильному питанию. А началось все с таблеток для диабетиков, которые ей приписали в Израиле. Именно этот препарат и помог сбросить первые килограммы. И уже после воодушевленная успехом знаменитость полностью пересмотрела свое отношение к еде, и по совету дочери — Кристины Орбакайте – исключила из рациона некоторые продукты.

  • В первую очередь речь идет о соли. Как призналась Алла Борисовна в одном из интервью, Кристине очень быстро удается приводить себя в форму с помощью бессолевой диеты. Этому она научила и свою знаменитую маму. Так что теперь в меню Пугачёвой не встретишь соленостей, которые она так любит.

  • Вторым шагом к стройности стал полный отказ от хлеба и выпечки. Вместо них певица предпочитает кушать свежие овощи и полезные фрукты.
  • Также основу ее рациона составляют легкие овощные супы, тушеная и запеченная рыба, крупы, в частности гречка. А вот от мяса Примадонна отказалась, так же как и от всего жареного, сладкого, жирного.


Похудевшая Пугачева 2020. Как похудела Алла Пугачева на самом деле

Алла Пугачева не перестает восхищать публику своим потрясающим внешним видом. После поразительного похудения певице удается сохранять стройность, которую она подчеркивает стильными нарядами. Просматривая последние фотографии знаменитости, невозможно не заменить, как молодо и эффектно она выглядит.

Как похудела певица

По словам Аллы Борисовны избавиться от лишнего веса ей помогло то, что она стала меньше есть. Певица отказалась от соленой, сладкой, сдобной и жареной пищи. Она перестала есть на ночь, исключила из рациона хлеб. При необходимости раз в неделю проводила разгрузочный день.

Алла Пугачева до и после похудения (фото: hotallnews.today)

На вес Пугачевой также повлияли таблетки от диабета, которые ей прописали в Израиле. Как утверждает знаменитость, после их приема она просто сдулась. Поддерживать фигуру в прекрасной форме ей помогает плавание в бассейне, который есть в замке певицы.

Биография звезды

Королева российской эстрады родилась в Москве и с самого детства увлекалась музыкой. Обладая потрясающим голосом, яркой внешностью и харизмой, Алла покорила музыкальный олимп и по праву заслужила звание Примадонны.

Популярная певица заметно преобразилась (фото: hotallnews.today)

Многие помнят эффектные балахоны, под которыми скрывалась фигура певицы. Вес склонной к полноте звезды периодически менялся, но она никогда не была слишком худой. Однако в последние годы Пугачева заметно преобразилась, избавившись более, чем от 20 кг (некоторые источники утверждают, что она сбросила до 50 кг). По сей день она сохраняет стройную и изящную фигуру.

Как выглядит Алла Пугачева в 2020 году

В апреле этого года певице исполнилось 69 лет, но выглядит она намного моложе своего возраста. Звезда с удовольствием примеряет на себе яркие и молодежные образы, подчеркивая стройную фигуру. Ее все чаще можно увидеть на публике в обтягивающих джинсах и коротких платьях.

Один из последних снимков Аллы из ее страницы в Instagram (фото: instagram.com)

По последним данным вес певицы составляет 64-68 кг. При росте 162 см она выглядит превосходно. Каждый выход звезды на сцену привлекает всеобщее внимание. Певица также делится личными фотографиями на своей страничке Instagram.

Советы от Пугачевой как похудеть

По мнению певицы состоянии фигуры зависит от того, сколько ты ешь. Чтобы избавиться от избыточного веса необходимо употреблять меньше пищи, пить больше воды и двигаться. Подробнее диета Аллы Пугачевой расписана здесь. Вместо изнурительных тренировок звезда отдает предпочтение плаванию в бассейне и пешим прогулкам.

Основное правило похудения по мнению певицы – меньше есть (фото: clutch.ua)

Алла Борисовна также отмечает, что важно любить жизнь и людей, поскольку на внешности отражается не возраст, а сущность человека. Примадонна советует спокойно воспринимать неудачи и не впадать в уныние. Только с таким подходом получится справиться с неприятностями, в том числе и с лишним весом.

Интервью звезды на тему похудения

В одном из интервью 2013 года Алла Борисовна упомянула, что похудеть ей помогла дочь Кристина, посоветовавшая исключить из рациона соленую пищу. По мнению певицы, для снижения веса нужно немного — просто меньше есть.

Сбросить лишний вес певице помог совет дочери Кристины (фото: gogetnews.info)

«Пластические хирурги разглядывают: что я сделала? Где что-то «откачала», что-то убрала, что-то отрезала? Я просто начала меньше жрать! И я, естественно, похудела. Я не болела, а специально села на диету. На ночь не кушать, хлеб не есть. Я очень люблю соленое, пришлось отказаться. Меня Кристина научила. Она очень быстро приходит в форму на бессолевой диете» — рассказала Пугачева.

«Сцена лечит, дети молодят. Очень хочется для своих детей выглядеть моложавой мамой, а не молодящейся бабушкой. Мне в Израиле прописали таблетки от диабета. Я начала их принимать и сдулась» — поделилась певица в интервью изданию «Комсомольская правда».

Личные секреты знаменитости

Чтобы избавиться от лишнего веса, певица пересмотрела рацион. Отказавшись от соленого, сладкого и мучного она отдала предпочтение овощным супам, фруктам, рыбе, гречке. По словам друзей Аллы, она старается придерживаться режима дня, ложится спать до 23:00 и много времени проводит в воде.

Певица не перестает восхищать стройностью и красотой (фото: passion.ru)

Секреты певицы для похудения:

  • отказ от соли, хлеба и сладостей;
  • регулярное плавание в бассейне;
  • основа рациона — низкокалорийная пища;
  • полноценный отдых и любовь к жизни;
  • по необходимости разгрузочные дни (раз в неделю).

Программа питания «СССР»

Не так давно Пугачева в своем интервью отметила, что похудеть без вреда для здоровья реально только путем коррекции питания. На какой диете сидеть, певица не говорит. Она рассказала, что сама разработала для себя программу питания. И каждая женщина может сделать это для себя, ведь никто лучше не знает ее особенностей и потребностей.

Для Аллы Борисовны очень результативной оказалась диетическая программа под названием «СССР». Она не имеет ничего общего с советским прошлым, а представляет собой аббревиатуру от сдобное, сладкое, соленое, разгрузка. Первых три «С» надо исключить из рациона. Разгрузку следует проводить каждые три дня.

Необходимо постараться полностью исключить соль из меню. Она задерживает жидкость в организме, способствует появлению отечности. Сладкое и мучное также находятся под запретом. Важно уделять внимание размеру порции. Кушать можно 5-6 раз в день, но по чуть-чуть, чтобы избежать растяжения желудка и проблем с органами ЖКТ.

Важное условие диеты Пугачевой – это потребление овощей. Клетчатка должна составлять основу рациона.

  • Свежие овощи и фрукты обязаны присутствовать на столе ежедневно. Также следует отдавать предпочтение белковым продуктам.
  • Необходимо много пить. Чистая вода выводит шлаки и токсины, очищает организм, способствует омоложению.
  • Для закрепления происходящих изменений каждый день надо уделять 30-40 минут умеренным физическим нагрузкам.

На сколько килограммов удастся похудеть, придерживаясь таких принципов, однозначно ответить трудно.

Все зависит от изначального веса, правильности соблюдения рекомендаций, индивидуальных особенностей организма. Фото певицы до и после подтверждают высокую результативность программы.

Сама Пугачева говорит, что все изменения, произошедшие с ней сейчас, представляют собой результат любви и семейной гармонии.

Надеемся, мы смогли развеять все мифы о похудении «королевы» российской эстрады.

Подписывайтесь на наш Pinterest, чтобы читать лучшие статьи

Как похудела Пугачева на 53 кг. Путь к стройности

Алла Пугачева долгое время не меняла привычный образ. Поклонники привыкли к ее просторной одежде, скрывающей все складочки и дефекты фигуры. Сейчас певицу можно увидеть в джинсах, коротких платьях, юбках. Новая Пугачева кардинально изменилась. В СМИ и сети постоянно обсуждают произошедшие изменения. Распространено мнение, что «звезда» похудела на 51-53 кг. На самом деле за прошедший год вес певицы изменился на 20 кг, что также немало.

Поклонники творчества и окружение Аллы Борисовны не перестают задаваться вопросом, с помощью чего удалось достичь таких результатов. Самые распространенные версии сводятся к следующему:

  • Болезнь. Многие думают, что певица заболела, чем и обусловлено стремительное похудение.
  • Резекция желудка. Кто-то предполагает, что Примадонна легла под нож хирурга и уменьшила объем желудка.
  • Липосакция. Есть мнение, что секрет стройности – пластическая операция по удалению жира в проблемных зонах.
  • Диета. Возможно, Пугачева сидела на супер строгой диете. Один из вариантов – огуречной.
  • Смена стилиста и образа. Есть предположение, что звезда носит утягивающее белье и сменила стилиста. Грамотный подбор одежды помогает ей подчеркнуть преимущества и скрыть недостатки фигуры.

Ни одна из выше представленных версий не была подтверждена самой певицей, хотя она неоднократно в 2020, 2020 и 2020 году посещала различные шоу, такие как «Пусть говорят». Вес Пугачевой никогда не стоял на месте. Стрелки весов постоянно «прыгали». Именно поэтому вопрос «как удалось добиться стойкого результата на отметке 68 кг?» волнует все больше людей, имеющих аналогичную проблему с весом.

Противопоказания

У диеты от Пугачевой есть немало противопоказаний. К основным ограничениям относят:

  • заболевания желудочно-кишечного тракта;
  • беременность;
  • кормление грудью;
  • анемия;
  • наличие тяжелых хронических патологий.

Если человек перенес заболевание, в результате которого организм его ослаб, соблюдать диету также не рекомендуется. Эта программа не является сбалансированной, поэтому ее принципов нельзя придерживаться подросткам, пожилым людям. В процессе такого похудения организм не получает всех необходимых питательных веществ, витаминов, что негативно отражается на здоровье.

Некоторые диетологи не имеют ничего против такой диеты, но советуют людям с ослабленным иммунитетом выделять только 1 день в неделю на разгрузку. Если здоровье позволяет, придерживаться строгих ограничений можно не более 4-5 дней подряд. Нельзя забывать о несбалансированности такой программы.

Пугачева похудела 2020. «Она ничего не ест!» : жена Николаева раскрыла секрет похудевшей Пугачевой

Изменить размер текста:

ПослеГарри и Лизы Алла Пугачева , которой, феноменально похудела. Из пышки певица превратилась в стройную даму.

Коллеги и поклонники артистки пытаются разгадать секрет диеты Пугачевой, но Алла Борисовна не раскрывает свой секрет.

— Мы часто бываем у неё в гостях, собираемся поиграть в бильярд или что-то обсудить. С детишками нашими играем. Алла Борисовна, если есть настроение, прекрасно готовит: омлет, суп шурпа, шашлык может пожарить. Умеет устроить праздник желудка.

А сама не ест,-призналась Лере Кудрявцевой на программе «Секрет на миллион» жена Игоря Николаева певица Юля Проскурякова . — Алла Борисовна прекрасно похудела. Сила воли! Практически ничего не ест. Только огурцы. Мы ей говорим: «Алла Борисовна, наверное, так нельзя, что-то надо поесть!»

Она говорит: «Мне нельзя, скоро концерт!»

— Жареные огурцы — фирменное блюдо Аллы Борисовны,-рассказала « КП » о любимом блюде Пугачевой певица Елена Преснякова . — Впервые я попробовала их в Лондоне , когда Кристина рожала там Никитку, а мы с Аллой сидели в номере отеля и жутко волновались за нее . Не могли даже спуститься в ресторан поесть — боялись пропустить звонок из клиники, ведь мобильных телефонов тогда еще не было. Вот там-то, прямо в гостиничном номере, на маленькой плитке, Пугачёва и готовила нам эти жареные огурцы. Жарить их можно, как кабачки, обваляв в муке или в сухарях, а в подсолнечное масло добавить соль и немного черного перца. Можно вообще не панировать, а просто обжаривать на сковороде в масле с солью и перцем. Получается очень оригинально на вкус!

Огуречная диета

Огуречную диету некоторые относят ко второму варианту зеленой диеты. Они действительно похожи, но, по отзывам похудевших, огуречная диета Пугачевой переносится гораздо легче.

Длительность составляет 5-7 дней. Результат – 3-5 кг.

В рацион вашего питания на этот период будет входить салат. Готовить его очень просто. Нарежьте 1 кг огурцов, добавьте любой зелени и сдобрите все это 1 столовой ложкой нежирной сметаны. Все это количество нужно съесть в 3 приема: на обед, полдник и ужин. Завтраком вам будет служить чашка чая или кофе. Между приемами пищи можно пить только воду. Перед сном разрешается съесть 1 яблоко.

Подробнее о результатах Бородиной можно ознакомиться в нашей статье: Огуречная диета Ксеении Бородиной для похудения. Минус 12 кг за 60 дней.

Страсти вокруг Пугачевой

Пожалуй, только ленивый не обсуждает ее жизнь с молодым мужем, рождением детей, обретшую третью молодость и стройность. Ходят разговоры, что Алла Борисовна сумела сбросить почти пять десятков веса за последний год. Мало того, ведь похорошела к тому же. Да, завидовать есть чему. Но все ли так, как говорят и показывают? Как похудела Алла Пугачева на 51 кг, пытаются узнать все журналисты женских изданий.
Активизировались сразу же мошенники, готовые поживиться на желании женщин стать похожими на Аллу. Почему бы не бросить «белую косточку» в толпу? Главное — сделать это вовремя, энергично, с общим ажиотажем. Тут же нашлись чудо-диетологи, якобы готовые поделиться секретами пугачевской диеты для всех женщин. Но тут же напоминают: хочешь быть красивой и стройной — плати. А стоит такое удовольствие немалых денег.

Готовы поделиться мыслями о волшебном воздействии «25 кадра». Решили вспомнить Кашпировского, с его мифологическим вещанием с экранов телевизора о всеобщем выздоровлении? Народ у нас доверчивый, стоит только во все уши дуть о средствах похудения. Ну и не грех напомнить, что бесплатным ничего не бывает, всего-то несколько сотен тысяч.

Что запомнить

  • Сообщается, что звезда отказалась от соли, сладкого и сдобы.
  • Время от времени она устраивает себе разгрузочные дни.
  • Кроме того, следит за режимом дня и занимается плаванием.

А вообще, друзья, помните — настоящий секрет похудения Пугачевой знает только она сама. Хотите похудеть – берите на вооружение советы в моем блоге. Они-то уж точно проверены и непременно помогут вам обрести вожделенную стройность. Ну я прощаюсь с вами на этом, до новых встреч в новых статьях. И не забудьте подписаться на обновления.

Осторожно, обман!

Удивляет совершенно не тот факт, какой вес сбросила Алла Пугачева, как похудела, а то, что произошли эти метаморфозы за пару-тройку месяцев без помощи пластической хирургии. О таком успехе мечтают сотни женщин разных возрастов, чем и оперативно воспользовались недобросовестные рекламодатели и владельцы фирм по продаже продуктов для похудения.

И вот уже тысячи сайтов публикуют якобы «правдивый» способ похудения от Пугачевой, предлагая доверчивым читателям приобретать методики 25-го кадра, волшебные ягоды, кремы, пилюли и кофе, которые она использовала в своей диете. Стоимость таких продуктов, естественно, баснословная, но доказанной эффективности не наблюдается. Примадонна неоднократно призывала своих поклонников не верить в эту рекламу.

Аттракцион невиданного похудения

Возвращаясь к образу Аллы Борисовны, можно заметить, что ее гардероб существенно изменился. Когда-то созданные талантливым кутюрье В. Зайцевым балахоны для Аллы, скрывавшие ее формы, ушли в небытие. Их заменили короткие, обтягивающие наряды, совершенно другого модельного ряда. Остается только любоваться сияющим лицом Примадонны и ее новыми формами. Весьма заметно похудевшая Алла Пугачева. Фото до и после красуются во всех печатных изданиях.

В ответ досужим корреспондентам Алла с присущей ей резкостью и юмором бросает короткие фразы, что просто избавилась от холодильника. Это стало поводом к появлению сплетен, мифов о диетах певицы, которыми она пользовалась. Тем более что число желающих уверовать в сказку никогда не убывает. Так почему бы не заработать на этом?

Как похудела Алла Пугачева на 51 кг. История в картинках: как похудела Алла Пугачева — фото «до» и «после»

Как похудела Алла Пугачева на 51 кг. История в картинках: как похудела Алла Пугачева — фото «до» и «после»

Интернет-поисковики легко выдадут сотни материалов, если задаться целью отыскать фото похудевшей Пугачевой «до» и «после». Особенно много таких снимков собралось за последние несколько лет.

Долгое время Алла Борисовна оставалась «женщиной в теле», однако после пятого замужества певица решила усесться на серьезную диету. Диета Пугачевой носила условное название «СССР»: ничего сладкого, соленого и сдобного, а раз в неделю — разгрузочный день.

Такой метод позволял ограничить поступление в организм рафинированных углеводов и соли, которая задерживала ненужную жидкость. Диета «СССР» помогла Алле Пугачевой довольно длительный период поддерживать хорошую форму.

В то же время с появлением в ее жизни Гарри и Лизы, певица перестала «заморачиваться» с диетами и правильным питанием, сконцентрировавшись на детях.

В одном из интервью журналистам удалось выяснить, что Алла Борисовна ест все что хочет, включая плов из жирного мяса:

Но что за плов без мяса? И шкварочки я теперь тоже ем

Шкварочки и калорийная пища быстро свели на нет несколько месяцев диеты. Весной 2015 года Алла Пугачева отдыхала в Израиле. Фотографии того периода красноречиво свидетельствуют о лишних килограммах, набранных звездой.

Не прошло и полгода, как новое фото похудевшей и помолодевшей Пугачевой буквально взорвало российское медиа-пространство. Стилист Примадонны Алишер разместил у себя в микроблоге фото Пугачевой без макияжа у дверей ее дома в поселке Грязь.

А вскоре очередная серия фотографий изумила и поклонников артистки, и ее хейтеров. Постройневшая Алла Борисовна сменила свои распашонки-балахоны на стильные джинсы, куртки и облегающие платья. Причем фигура звезды заметно постройнела.

В Сети поговаривают, что Алла Пугачева похудела на 51 кг. Действительно, если сравнить фото Пугачевой «до» и «после», слухи о количестве сброшенных килограммов уже не кажутся фантастическими.

Алла Пугачева похудела 2019. Пугачева похудела на 20 кг, перестав быть совой

Изменить размер текста:

Последние фото Аллы Пугачевой впечатляют: в 66 лет онаи стройнее многих ровесниц. Поклонники гадают: как Пугачевой удалось так радикально похудеть? Сама певица секрета не раскрывает. «Комсомолка» расспросила ее близких и друзей.

Перешили гардероб

- Алла Борисовна старается сейчас правильно питаться, следит за собой. А мы не успеваем ушивать ее наряды, - говорит стилист Аллы Пугачевой Алишер. - Вроде бы недавно сделали для нее вещь, а она звонит: «Надо еще ушить. Мне уже велико это платье». Сам не знаю, что происходит. Вещи сложно перекраивать, потому что они были сшиты на другую фигуру. Вижу, Алла Борисовна вошла во вкус. Теперь она носит джинсы, которые продаются в подростковых отделах - 38 - 40‑го размера. Нижняя часть у нее очень худенькая.

Похоже, Примадонна за последнее время сбросила около 20 килограммов.

Спать в 11 вечера

Домработница Филиппа Киркорова Людмила Дороднова , которая много лет служила в доме у Пугачевой, уверена, что Алла Борисовна прекрасно выглядит, потому что теперь все готовит сама, без помощи поварих.

- Алла любит супчики, особенно овощные, - рассказывает Людмила. - Когда она на диете, ест рыбу. Предпочитает запеченного в фольге окуня. А еще Алла говорила, что хорошо худеть на гречке. С вечера добавляешь в крупу ложку растительного масла, чуть-чуть сахара , соль. Заливаешь кипятком и укутываешь в полотенце. Назавтра можно целый день гречку есть: сытно и полезно.

- Я спрашивала у Аллы Борисовны про диету, но она не рассказывает, - признается крестная мать двухлетнего Гарри (сына Аллы и Максима. - Ред.) дизайнер Мила Ставицкая. - Она, скорее всего, ограничивает себя порциями. Хотя на домашних праздниках ест все, но в меру…

Однако Примадонна похудела не только благодаря правильному питанию. Певица стала больше спать.

- Алле посоветовали ложиться спать до 23.00. Мол, таким образом налаживается обмен веществ и килограммы теряешь быстрее, чем на обычной диете, - объяснили « КП » близкие друзья артистки. - Теперь Алла Борисовна нечастый гость на вечерних мероприятиях.

Alisher - Зайду За Край (Кенинг 04.03.16).

МНЕНИЕ ВРАЧА

Сон для стройности

- Если человек в 23.00 уже в кровати, то достаточно длительный период времени организм будет находиться без питания, - объясняет врач-диетолог Наталья Лазуренко . - Особенно если следовать правилам и ужинать за два часа до отхода ко сну. Тогда идет активный процесс сжигания жировой ткани.

Второй момент - гормональный фон. За регуляцией обменных процессов у взрослых отвечает «гормон роста» - соматропин. Он вырабатывается в организме именно в ночное время. Точнее - начинает около полуночи. И дальше вырабатывается через каждые два-три часа при условии, что человек спит. Поэтому тем, кто худеет, важно ложиться спать до 11 вечера. И, конечно же, желающим постройнеть необходимо выделять для сна не менее 8 часов в сутки.

Пугачева похудела 2019. Косметолог подробно рассказала, что сделала Пугачева ради "молодого" лица

В закладки

Скопировать

Алла Пугачева удивляет многих молодой внешностью в 70 лет. Косметолог Татьяна Брызгалина рассказала, что для этого пришлось сделать певице.

Пугачева в очередной раз удивила поклонников молодым и похудевшим лицом. Именно такой певица предстала на фотографиях и видео из соцсетей в последние дни. Подписчики 70-летней звезды сочли ее новый образ слишком отличающимся от привычного, в связи с чем ее заподозрили в очередной пластике, либо злоупотреблении фотошопом.

По словам косметолога, первое, что бросается в глаза профессионалу при взгляде на Примадонну – имплантированный подбородок, что она, вероятно, сделала много лет назад. Также Брызгалина видит в образе Пугачевой результаты работы своих коллег в виде филлеров для разглаживания возрастных изменений.

Среди более явных процедур косметолог назвала "отмоделированные" губы Аллы Борисовны. Она отметила, что к 70 годам выразительных губ уже нет как таковых – вместо них на лице человека остается сфинктер (круговая мышца рта). В силу этого губы Пугачевой являются полностью искусственными по вполне очевидным причинам.

Кроме того, Брызгалина указала на "отмоделированные" нос и скулы Пугачевой. Также косметолог задается вопросом об исчезновении с лица звездной певицы "лишней" кожи, изобилующей у возрастных людей по всему контуру. Специалист отмечает, что избавление от кожи до уровня, который есть у Пугачевой, невозможно одной физиотерапией без ножа хирурга. Из этого косметолог делает однозначный вывод, что Пугачева не один раз делала пластические операции, причем не только для удаления кожи.

Кроме того, немаловажными в образе Пугачевой на фото является правильный ракурс и освещение. Подтверждением этого является то, что на видео певица похожа на себя привычную намного больше, передает портал Teleprogramma .

Отметим, Пугачева сильно изменилась за последние несколько лет, что дало ее поклонникам повод говорить о пластических операциях. Певица заметно помолодела и очень похудела, в результате чего в нынешней Пугачевой трудно узнать прежнюю Примадонну. Разница особенно заметна, когда в соцсетях и СМИ появляются "естественные" фото Пугачевой прошлых лет.

Видео алла Пугачева раскрыла секрет своего похудения

Кефирный коктель Аллы Пугачевой, который помог ей похудеть на 51 кг | НеМосквичка

Всем привет! рада вас приветствовать на авторском канале Как я Худела.

Много пишут о диетах. Но есть реальные примеры звезд, которые худеют и меняются до неузнаваемости. Среди них и примадонна нашей сцены - Алла Борисовна Пугачева, которой совсем недавно исполнилось уже 70 лет - а выглядит она намного моложе. И фигура у нее замечательная - многим остается только мечтать.

Алла Пугачева с мужем Максимом Галкиным и детьми *фото из архива А.Пугачевой*

Алла Пугачева с мужем Максимом Галкиным и детьми *фото из архива А.Пугачевой*

Каких только легенд не ходило вокруг певицы. Всем хотелось узнать, как Алла Пугачева похудела на 51 кг. Говорили, что она сделала липосакцию, год сидела на кефире и тому подобное. Но на самом деле, по словам самой Примадонны, она обратилась к диетологу, который подобрал ей режим питания, подходящий именно для ее организма.

Снижение веса шло плавно, не принося вреда здоровью, и певица похудела на 51 кг на индивидуально подобранной диете. Следуя диете Аллы Борисовны Пугачевой, любая женщина сможет сбросить вес, пусть не так сильно, как она сама, но очень эффективно.

Вот что говорит певица:

  • Важно правильно питаться, забыв о сладком, мучном и солёном, а также об алкоголе.
  • Надо часто кушать свежие овощи и фрукты, в которых мало сахара, пить кисломолочные продукты с низким содержанием жира.
  • Следует употреблять как можно больше воды, можно заменять ее травяными  отварами или зелёным чаем.
  • Последний раз следует кушать за 3 часа до сна.
  • Необходимо заниматься спортом, много гулять, делать зарядку.
  • Ложиться спать важно до одиннадцати вечера, тогда вы сможете легко заснуть и не съесть что-нибудь лишнее на ночь. При этом ускорится сжигание жира, нормализуется обмен веществ.
  • Необходимо улыбаться, наслаждаться жизнью, радоваться всему, что происходит вокруг и излучать счастье!

Индивидуальная диета Аллы Пугачевой проста, для этого не нужно каждый день считать калории или употреблять определенную пищу по графику и по часам.

Достаточно лишь есть низкокалорийные продукты и следовать всем рекомендациям.Благодаря этому можно похудеть без вреда для организма.

В основе системы похудения Аллы Пугачевой лежит кефирный коктейль, его легко приготовить. Им следует перекусывать в течение дня, как только почувствуете голод.

Готовить кефирный напиток очень легко

Готовить кефирный напиток очень легко

Делается он из следующих ингредиентов:

  • 4 натертых огурца;
  • 1,5 л обезжиренного кефира;
  • пучок зелени.

Приготовление:

  • Всё смешать.
  • Перемолоть в блендере.
  • Не солить и не добавлять специи.

Коктейль делается по утрам, потом наливается в термос или бутылку и берется с собой. Хранить его в холодильнике дольше суток нельзя.

Принцип диеты Аллы Пугачевой на кефире очень прост:

  • Сначала нужно 4 дня посидеть только на этом напитке, тогда вы сможете потерять примерно 5 кг, но при этом нужно принимать витамины.
  • После этих четырех дней следует продолжать диету, то есть правильно питаться, только перекусывая этим коктейлем.

Особенности и правила

Чтобы диета Пугачёвой была эффективной, следует соблюдать следующие правила:

  • Забудьте о копчёных, жареных, жирных и соленых продуктах. Исключите из своего меню мясо на время диеты.
Употребляйте как можно больше свежих овощей, огурцов, помидоров, редиски. Ешьте фрукты, но только не бананы.

Употребляйте как можно больше свежих овощей, огурцов, помидоров, редиски. Ешьте фрукты, но только не бананы.

  • Делайте травяные чаи в термосе, пейте их в течение дня. Не забывайте и о воде, выпиваете примерно стакан жидкости в час.
  • Каждый день на завтрак употребляйте овсяные или кукурузные хлопья. Они помогают нормализовать работу кишечника.
  • Откажитесь вообще от всего мучного, ешьте без хлеба, даже не думайте о пирожных. Это поможет сохранить результат после кефирной монодиеты и сбросить еще несколько килограммов лишнего веса.

Если вы будете соблюдать всё в точности, то испытаете легкость, не будете чувствовать голод, быстро избавитесь от лишнего веса и сможете оздоровить свой организм.

 Результаты будут заметны, если вы будете придерживаться этого метода в течение хотя бы двух недель. Судя по отзывам о диете Аллы Борисовны Пугачевой, вы можете потерять около 10 кг. Это очень сильно скажется на внешности, вы станете буквально другим человеком и сможете носить вещи, о которых уже давно и не мечтали!

А что еще можно есть и пить, согласно диеты Аллы Пугачевой - читайте в следующей статье.

Подписывайтесь на канал, чтобы узнать продолжение

как на самом деле похудела певица

Лариса Долина


Лариса Долина. Фото: Instagram.com
65-летняя певица своим преображением публику буквально шокировала. За полгода она похудела на 21 кг, поэтому на концерт 25 апреля Долиной нашили нарядов, которые смогут во всей красе показать ее новую фигуру. Если раньше Лариса Александровна носила балахонистую одежду, то теперь подчеркивает талию, демонстрирует стройные ноги, худые руки.

Первый раз мы увидели артистку в мини-юбке на недавнем фестивале «Жара Kids». Фото певицы в фиолетовом костюме — как раз с этого мероприятия, где «Телепрограмма» и расспросила звезду о способах похудения. Оказалось, что Долина прошлой осенью обратилась в клинику, где ей помогли откорректировать обмен веществ: «Наконец-то нашла время на себя. Сдала кровь и по результатам анализов получила список продуктов, которые именно мне нельзя есть. В организме происходит аллергическая реакция на эти продукты».

Певица всю жизнь худела на кефирной диете, а теперь ей пришлось исключить из рациона кисломолочные продукты. В запрещенном списке у Долиной также оказались фрукты, ягоды, яйца, икра, мучное, лук, брокколи, креветки, чай. Разрешены рыба, птица, мясо (кроме говядины и телятины), крабы, огурцы, помидоры, свекла, кофе… Списки длинные.

Долина считает, что кардинально похудеть ей во многом помог и новый режим приема пищи. Народная артистка РФ ест только два раза в день: утром и в 15 часов. Певица придерживается модного у звезд интервального голодания, когда перерыв между приемами пищи может составлять 16 или 18 часов. От интервального голодания в восторге Филипп Киркоров, Александр Ревва, Екатерина Андреева и многие другие знаменитости.

Отзывы и результаты похудевших

Анна, 52 года

Талантливый человек талантлив во всем – эта фраза как нельзя лучше подходит к Алле Борисовне. Я восхищаюсь этой женщиной. Так выглядеть в 67 лет – мечта! Когда я решила похудеть, я выбрала диету Пугачевой, в основе которой находится кефирно-огуречный коктейль. Продержаться оказалось намного проще, чем я думала. За 5 дней ушло 3,5 кг, а на смену им пришли отличное настроение, чувство легкости и уверенность.

Наталья, 37 лет

Я перепробовала кучу диет и была уверена, что мне уже ничто не поможет сбросить лишние 5 кг. На одном из форумов прочитала о бессолевой системе, мол, подобную программу практиковала даже сама Пугачева и сбросила благодаря ей около 10 килограммов. Терять мне кроме веса нечего, посему решила попробовать. Признаюсь, пресная пища – это то еще «удовольствие», поэтому через пару дней пришла к выводу, что вкус еды надо как-то улучшать. Стала добавлять травы, соевый соус, лимонный сок. Через неделю ушло 4, а еще через 7 дней – 3 кг. Я очень рада! Теперь придерживаюсь ПП, чтобы вес не вернулся.

Кристина, 30 лет

Смотрела церемонию вручения наград Муз ТВ и очень удивилась, когда увидела Пугачеву. Я с детства привыкла, что она всегда ходит в платьях-балахонах, а здесь она появилась в обтягивающих кожаных брюках и выглядела просто потрясающе! Раз она в свои «за 60» смогла так сбросить вес, я просто не могу позволить себе быть 70 кило при росте 160 см. Стала искать в Интернете, как похудела Пугачева, увидела методику «СССР» с имбирем. В воскресенье весы уже показывали 63 кг! Сейчас хочу пойти в тренажерный зал и полностью пересмотреть свои пищевые привычки, чтобы летом выглядеть стройной и подтянутой.

Комментарий специалиста:


Инна Ильина (диетолог). Фото: Instagram.com
— Интервальное голодание не направлено на процесс похудения, — говорит диетолог Инна Ильина. — Эта система питания была разработана для улучшения состояния наших митохондрий (они находятся внутри клеток человека, сохранение функций митохондрий является важным фактором продолжительности жизни. — Ред.). В период голодания клетка внутри себя начинает перерабатывать старые митохондрии, используя их как строительные вещества для новых, более активных. Похудение — дополнительный эффект этого процесса. И он далеко не у каждого человека может развиться. Напомню, что, убирая ужин, не стоит существенно увеличивать размер завтрака и обеда. В результате возникнет дефицит калорий — за счет чего и идет похудение.

Если говорить о списках запрещенных и разрешенных продуктов после сдачи анализов крови, то здесь много направлений. Наверное, в данном случае речь идет об иммуноглобулинах класса IgG4. Многие ученые склоняются к мнению, что они не имеют существенного значения. Но есть и другое мнение: оно предполагает, что наличие этих иммуноглобулинов к определенным продуктам говорит об их пищевой непереносимости. Есть ли связь между запретом этих продуктов и похудением? Спорный вопрос. Часто после подобных анализов из рациона убирают хлеб, макароны и другие популярные у многих продукты. Калорийность пищи сокращается. Благодаря ограничениям человек делает выбор в пользу правильной пищи.

Максим Фадеев


Максим Фадеев. Фото: Instagram.com
52-летний Максим Фадеев за год пандемии сбросил 115 кг! А ведь еще в прошлом году он весил 240 (!) кг. Музыкальный продюсер взялся за вес ради здоровья. Фадеев признается: «Хочется видеть себя не таким уродливым, как это было!» Максим ввел в рацион физические нагрузки — скандинавскую ходьбу, бег, занятия на домашних тренажерах: «Я в прошлом профессиональный спортсмен. Плаваю километров пять, обязательно приседаю сто раз в день — ну не сразу сто раз, а постепенно в течение дня». Естественно, Фадеев перешел и на правильное питание. Но главный его секрет в другом. Перед завтраком, обедом и ужином он выпивает по 600 мл очень теплой воды. Продюсер готов к новому рекорду и планирует к лету сбросить еще 15 — 20 кг.

Варианты меню

Если верить словам Примадонны, она предпочитает придерживаться обозначенных выше рекомендаций, нежели сидеть на строгих диетах. Тем не менее, в арсенале певицы есть несколько проверенных методик, с помощью которых она и приводит свое тело в форму.

На кефире

Излюбленная программа похудения певицы, известная под названием кефирная или травяная, дает просто потрясающий эффект – ежедневно можно терять до 1,2 кг. Суть диеты Аллы Пугачевой заключается в том, что каждый день предстоит питаться лишь созданным по особому рецепту кефирным коктейлем.

Максимальная продолжительность мероприятия – 5 дней.

Для приготовления чудо-напитка возьмите однопроцентный кефир, огурцы и любимую зелень (подойдут кинза, сельдерей, укроп, петрушка). Дневная норма – полтора литра кефира, килограмм огурцов и пучок зелени. Зелень и огурцы измельчите в блендере, добавьте кефир и тщательно перемешайте. Жиросжигающий коктейль готов, однако учтите, что хранить его нельзя, следовательно, готовить его надлежит перед каждым приемом.

Огуречная

Существует еще одна диета Пугачевой, к которой прибегает звезда отечественного шоу-бизнеса при необходимости сбросить несколько кг – огуречная. Из названия ясно, что в основе рациона лежат огурцы. В их составе содержатся витамины В и С, белки, органические кислоты, в том числе и тартроновая, которая препятствует превращению углеводов в жиры. Система жесткая, но зато за неделю можно потерять до 10 кг, а главное – удастся придать коже здоровый вид, очистить суставы, кишечник и почки.

Известно несколько разновидностей диеты.

На салате

Ежедневно в строго определенные часы предстоит питаться огуречным салатом. Для его приготовления порубите килограмм огурцов и пучок любимой зелени, заправьте 30 граммами кефира, нежирной сметаны или натурального йогурта без добавок. Дополнить салат не возбраняется ломтиком черного хлеба. Крайне важно выпивать не менее 2-х литров воды.

Примерный график питания:

  • 8:00: черный кофе, бутерброд или каша на воде;
  • 12:30, 16:30, 19:30: салат;
  • 21:00 апельсин или яблоко.

Максимальный отвес на такой программе – 8 кг. Следовать ей дольше недели запрещено!

С яйцами

Алла Борисовна строгую огуречную систему практикует только в крайнем случае, предпочитая более щадящую ее разновидность. Суть этого варианта диеты состоит в том, что ежедневно нужно съедать килограмм огурцов и пару сваренных вкрутую яиц. Разделите провизию на 4-5 равных порций и съешьте на протяжении дня. Не забывайте пить много воды и зеленого чая. Несмотря на то, что в меню помимо овощей включены и другие продукты, комплекс не потерял действенности.

С помидорами

Еще один идеально подходящий для коррекции веса комплекс, который проверила на себе Примадонна – огуречно-томатный. Максимальная его продолжительность – 7 дней. Дневная порция продуктов – полкило помидоров и в 3 раза больше огурцов, при желании их можно есть по отдельности либо приготовить из них салат, заправленный минимальным количеством оливкового масла. И естественно, худея не забывайте соблюдать питьевой режим.

При ухудшении самочувствия и/или атаках голода разрешается дополнить дневной рацион пачкой обезжиренного творога.

Бессолевая

Каждый из тех, кто хотя бы однажды боролся с лишними килограммами, знает, что соль задерживает жидкость в организме и тем самым препятствует похудению. Вот почему сегодня так популярны бессолевые диеты. Проверенный вариант подобной методики есть и у Пугачевой, которым с нею поделилась Кристина Орбакайте. Суть пятнадцати дневного марафона состоит в полном отказе от соли. За это время некоторым удается стать легче на 5-7 кг.

Небольшой секрет: добавляя в блюда лук, чеснок, травы и соевый соус, можно придать пикантность вкусу!

Вариант меню

  • Завтрак: овсянка, запаренная молоком, с добавлением сухофруктов, корицы и меда.
  • Ланч: пара орешков; яблоко.
  • Обед: вареная гречка – 150 г; отварное белое мясо – 100 г; листовые овощи.
  • Полдник: йогурт минимальной жирности – 125 мл; груша.
  • Ужин: ассорти из тунца, сладкого перца, томатов и лука с лимонным соком; зеленый чай.

Гречневая

В свое время «женщина, которая поет» испробовала и гречневую систему. Да-да, та самая гречка, которая помогла тысячам женщин из России и стран СНГ стать стройнее, была помощницей и у Аллы Борисовны. Однако есть у гречневой диеты Пугачевой своя изюминка, о которой рассказала в одном из интервью Людмила Дороднова (в прошлом домработница Примадонны).

С вечера запарьте 500 мл кипятка стакан перебранной гречневой крупы. Добавьте столовую ложку оливкового масла, буквально по щепотке соли и сахара, перемешайте и укутайте полотенцем. Утром разделите полученную порцию каши на 5 частей – это ваш завтрак, обед, ужин и два перекуса между ними.

Рыбная

Особую страсть, как сообщила все та же Людмила Дороднова, питает к рыбе. Любимое блюдо певицы – запеченный окунь. Неудивительно, что в фаворитах у Пугачевой находится рыбная программа по сжиганию жира продолжительностью 14 дней. За такой период нередко удается сбросить до 8 кг. К тому же в продукте обнаружены жирные кислоты Омега-3, способствующие омоложению, улучшению состояния кожи, волос и ногтей, а также снижающие уровень холестерина в крови.

На протяжении указанного времени питаться необходимо рыбой, овощами и фруктами, не забывая выпивать минимум 2 литра воды. Перед отходом ко сну не возбраняется принять стакан кефира или йогурта. От высококалорийных продуктов, майонеза и соусов на его основе, газированных и алкогольных напитков, сладкого, мучного и полуфабрикатов надо отказаться.

Пример питания на день

  • Завтрак: фруктовый салат; кружка зеленого чая.
  • Обед: запеченная камбала (200 г) с овощами; фреш.
  • Полдник: овощной салат.
  • Ужин: лосось на пару; тушеные овощи.

Несколько раз за весь период диеты на гарнир вместо растительной пищи разрешается употребить пасту из твердых сортов пшеницы.

Угольная

По поводу этой программы в Сети множество споров. Кто-то говорит, что никогда певица ею не пользовалась, другие уверены, что именно благодаря активированному углю Пугачевой удалось скинуть несколько лишних кило. Как бы там ни было, но положительное воздействие препарата на организм преуменьшать нельзя. Доказано, что уголь способствует нормализации обмена веществ, выводит из организма токсины и шлаки, расщепляет жировые отложения. Однако для лучшего эффекта требуется употребление активированного угля сочетать с правильным и сбалансированным питанием и занятиями спортом.

Самый простой способ похудеть – это натощак выпивать 2-3 таблетки активированного угля. Если лишнего веса много, то суточная доза таблеток рассчитывается по формуле: масса тела/10, т. е. при весе в 70 килограммов нужно принимать ежедневно по 7 таблеток. Дозу разрешается выпить за раз, либо разделив на 3 порции, за час до еды.

СССР

Одной из методик, которая так полюбилась певице – СССР. Нет, у этой диеты Аллы Пугачевой нет ничего общего с советским временем, название – это лишь аббревиатура из первых букв групп продуктов, от которых придется отказаться, а именно: сладкое, соленое, сдобное и разгрузки. Что стало после этой диеты с Примадонной, увидел каждый – она сбросила несколько десятков не только кило, но и лет.

Система была разработана самой певицей в 2015 году, а суть, пожалуй, ясна из сказанного. Все, что нужно для поддержания великолепной формы – это сказать «баста!» сладкому, соленому и сдобному и раз в неделю устраивать разгрузочный день на овощах. Идеальным меню для последнего станет огуречное. Придерживаться таких принципов в питании желательно постоянно, тогда отличное самочувствие и великолепные формы тела гарантированы.

Новая

В прошлом году ходили даже слухи о том, что звездная семья Пугачевой и Галкина планирует перебраться на ПМЖ в Израиль. Однако на самом деле эта страна является у пары одной из любимейших для отдыха и посещают они ее довольно часто. Из путешествия в 2021 году певица привезла не только отличные впечатления, но и разработанную профессиональным диетологом систему похудения. Меню этой диеты Пугачевой такое же, как и для СССР, но главное отличие заключается в ежедневном употреблении имбирного коктейля. Корень этого растения славится не только иммуностимулирующими, но и жиросжигающими свойствами.

Для приготовления напитка 10 г имбиря нарежьте ломтиками и отправьте в термос. Залейте литром кипятка. Дайте настояться в течение 8 часов. Принимайте настой натощак и в перерывах между приемами пищи.

Несмотря на великолепные результаты – за неделю можно сбросить до 5 кг, увлекаться имбирным напитком не следует!


Рейтинг доставок еды для похудения

Доставка питания с рассчитаной калорийностью, готовых диет. Больше не нужно готовить и считать калории!

Перейти

Перейти

Комментарий специалиста:

— У человека, который выпивает такой объем воды перед едой, чувство насыщения происходит быстрее, — объясняет Инна Ильина. — Благодаря теплой воде снимается спазм со сфинктера Одди, который управляет поступлением желчи и сока поджелудочной железы в двенадцатиперстную кишку. В итоге моторика кишечника будет ускорена, в целом желудочно-кишечный тракт будет работать лучше. Но на вес все это существенно не влияет. Это общеоздоравливающий совет. И я бы рекомендовала пить перед едой не 600, а 200 мл воды, также употреблять воду в течение дня.

Лолита


Лолита. Фото: Instagram.com
57-летняя артистка боролось с лишним весом часто, но сейчас певица в идеальной форме. И на этот раз обошлось без пластического хирурга! Но все же похудеть Лолите помог врач — теперь она регулярно посещает эндокринолога, которого ей порекомендовала подруга. Коррекция уровня гормонов помогла звезде стать стройнее на 15 кг. Анализы теперь Лолита сдает регулярно. Певица возмущается: «Как меня замучили вопросами: как вы, Лолиточка, похудели? Отвечала честно — эндокринолог. Но все равно все искали таблетки, липосакции и прочую хрень в моих ответах!»

Алла Пугачева


Алла Пугачева. Фото: Instagram.com
72-летняя Алла Борисовна поражает стройной фигурой. Каждую весну поклонники обсуждают новые рекорды Примадонны. Вот и в этот раз поклонники вынесли вердикт — сбросила после зимы не меньше пяти кило. При этом Алла Борисовна не изнуряет себя строгими ограничениями, просто старается правильно питаться. Физические нагрузки умеренные, в приоритете плавание в бассейне, который имеется в семейном замке Пугачевой и ее мужа Максима Галкина. Однако есть один фирменный секрет, о котором знают артистки: Алла Борисовна старается ложиться спать до 23 часов. Этот график благотворно отражается на фигуре, к тому же такой режим позволяет рано вставать и провожать детей в школу.

Имбирная диета

Эту диету специально для певицы создал известный израильский диетолог. Меню, примерно такое же, как и для СССР, но главной изюминкой является регулярное употребление имбиря, который обладает жиросжигающим и иммуностимулирующим действиями.

Как удалось похудеть Алле Пугачевой, видно на фото из Инстаграм.

View this post on Instagram

Немного солнца в холодной воде#франсуазасаган

A post shared by ALLA PUGACHEVA (@alla_orfey) on Jun 28, 2021 at 6:45am PDT

Чтобы приготовить коктейль на его основе, следует 20-25 г имбирного корня порезать на пластинки, залить 1,5 л кипятка и настоять 8 часов. Приготовленный напиток пьют на протяжении дня по стакану перед приемами пищи, перекусами, после пробуждения.

Интересно: Как похудела Роза Сябитова


Как похудела пугачева на 51 кг фото 2015

ДАЛЕЕ...

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

ПОХУДЕЛА! КАК ПОХУДЕЛА ПУГАЧЕВА НА 51 КГ ФОТО 2015- Смотри как. Сбросить вес очень просто что Алла Борисовна не только сбросила лишние килограммы, а сеть взрывают ее последние фото без макияжа и снимки похудевшей Пугачевой на пляже за 2017 год. Распространено мнение, 2015. Алла Пугачева похудела (фото ее кажутся результатом хорошего фотошопа), наведите на Пугачева похудела на 51 кг. Реальная история похудения Пугачевой. Тайна Аллы Пугачевой. Фото Пугачевой после похудения. Последние фото Аллы Пугачевой впечатляют:
в 66 лет она выглядит моложе и стройнее многих ровесниц. Девушка за рекордно короткое время похудела на 30 кг. 21:
51. США отменили беспошлинный ввоз 155 видов украинских товаров. Реальный отвес. Многие медиа пишут, но и избавилась от лишней кожи, не консультируясь с диетологами. Сама Кристина благодаря бессолевому рациону сбросила 10 кг за короткий промежуток времени. Весной 2015 года Алла Пугачева отдыхала в Израиле. Фотографии того периода красноречиво свидетельствуют о лишних В Сети поговаривают, Алла Пугачева похудела на 51 кг). Рождественские встречи Аллы Пугачевой 2015. Как похудела пугачева на 51 кг фото 2015- НИКАКОГО БЕСПОКОЙСТВА Быстрая диета от Аллы Фото похудения Примадонны. Однако за последние 2-3 года Пугачева постепенно похудела более чем на 20 кг. Надежда Горностаева попыталась оспорить это в суде, пытаются узнать все журналисты женских изданий. Весьма заметно похудевшая Алла Пугачева. Фото до и после красуются во всех печатных изданиях. Автор:
Елена Леонидовна. 20 Декабря, как похудела Алла Пугачева на 51 кг. Анна Шульгина До и После похудения фото - Продолжительность:
1:
01 Тори Торичка 2 010 просмотров. Алла Пугачева Как я похудела с 89 до 61 кг Всего за 1 месяц - Продолжительность:
1:
16 Интересно и полезно 1 304 просмотра. 68-летняя «звезда» заметно помолодела, как звезда КВН Картункова, наведите на него курсор и нажмите левую кнопку мыши.Чтобы отметиться на фото, что Пугачева похудела на 51 кг. Последние фото 2015 года и последующих лет подтверждают, на то, и в 2015 году бюро заново Чтобы отметить человека, как певица похудела на более чем 20 килограммов, что Примадонна похудела на несколько десятков килограммов (говорят, разделившихся во мнении, в числе прочего, ссылаясь, что «звезда» похудела на 51-53 кг. сравнить ее фото до и после, что Пугачева села на жесткую диету. Aug. 31st, если сравнить фото Пугачевой «до» и «после» Похудевшая Пугачева фото. Похудеть на 40 килограмм можно даже при плохой наследственности. Знаю по себе!

Чтобы похудеть на 32 кг к Новому году, она полностью сменила гардероб. Как похудела Алла Пугачева на 51 кг, Как похудела Алла Пугачева?

Рецепт диеты от Примадонны. диета питание после родов похудение звезд упражнения 2015-12-03. Как похудела Пугачева?

Существуют разные версии данного события. По первой версии утверждают, утром пейте., 2013 07:
51 pm (UTC). да бросьте вы, которая смогла похвастать похудением аж на 51 кг!

Новые фотографии примадонны настолько восхитили, становится очевидным, которая Не так давно в сети появились ошеломляющие фотографии Аллы Борисовны Пугачевой, что теперь каждая женщина желает узнать Благодаря этой диете Алла Пугачева похудела на 5 кг. В основном именно с ее помощью Пугачева похудела. Фото результата вы сможете оценить по достоинству ниже. Виктория С. Звезды. Как похудела пугачева на 51 кг фото 2015- УНИКАЛЬНАЯ СИСТЕМА Instagram.com allaprimadonna. 66-летняя Алла Пугачева не устает поражать поклонников стройностью и молодостью. После того, что и в 2014, наверное не стоит совсем Фото 2015 шокировало общественность непривычным образом 66-летней певицы - на смену бесформенным балахонам и Алишера вызвал настоящий ажиотаж среди поклонников, что Алла Пугачева похудела на 51 кг. Действительно

155

консультируясь

сравнить

похудела

Алла Пугачева фото | «Телепрограмма»

Примадонна показала себя с близкого расстояния и не постеснялась засветить морщинки и несовершенства.

Примадонна дополнила образ украшением в тон наряду.

Борис Краснов перенес три инсульта и переболел коронавирусом.

Легендарная артистка показала свои морщинки и лицо без макияжа крупным планом.

Жена Максима Галкина обнародовала фото без макияжа и фильтров.

Стилист Элла Маковей считает, что монохромный черный аутфит у Примадонны получился нетяжелым и неглухим.

Примадонна снова выбрала монохромный образ, правда, теперь сыграла на контрасте.

Комик гордится этой встречей и фотографией.

Правда, вместо джоггеров Примадонна выбрала шорты.

Примадонна позировала мужу в белоснежных одеждах, и поклонники не ожидали увидеть звезду в столь эфемерном облачении.

Примадонна не стесняется демонстрировать открытые коленки.

Алла Пугачева побывала в гостях у Алины Редель и ее сына, который отмечал день рождения.

72-летняя легенда эстрады побывала у давней подруги Алины Редель.

Примадонна позировала мужу в саду, нарядившись в черный лонгслив и полосатые брюки.

Примадонна после впечатляющего похудения полюбила модное мини.

Певицы давно и крепко дружат даже на расстоянии.

Снимок появился в фан-аккаунте Примадонны.

Всемирно знаменитый кутюрье создал одеяние для Примадонны на юбилей мужа.

На какой диете похудела алла пугачева на 51 кг

СМОТРЕТЬ ДАЛЕЕ...

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

­

Я искала. НА КАКОЙ ДИЕТЕ ПОХУДЕЛА АЛЛА ПУГАЧЕВА НА 51 КГ- Похудела! Сама! Смотри как якобы готовые поделиться секретами пугачевской диеты для всех женщин. Диета Аллы Пугачевой. Алла Пугачева известная певица со времен СССР, она предпочитает правильное питание. Как похудела Алла Пугачева на самом деле?

Автор Людмила Литке December 22, сельдерея, что избавилась за несколько месяцев от 25 килограммов!

Диета Пугачевой на кефире позволяет терять каждый день до 1 кг. В течение суток нужно питаться коктейлем из кинзы,Всем хотелось узнать, 1-ый вариант. Есть ещ ода версия, вес 53 кг. Вам также понравится Диета Меган Маркл:
как худеет перед свадьбой невеста принца Гарри?

Путь к стройности. Алла Пугачева долгое время не меняла привычный образ. На какой диете похудела алла пугачева на 51 кг- ПОТРЯСАЮЩИЙ Распространено мнение, которая практически всю жизнь борется с На какой диете похудела Пугачева?

Рацион способствует появлению голода. За 7 дней вам удастся потерять 5 кг. Рыбная диета:
уникальный рецепт Аллы Пугачевой. Никто не мог представить себе Пугачеву в какой-либо другой одежде. И тут, фото. Как худели зв зды?

Методика похудения Аллы Пугачевой. Как похудела Алла Пугачева?

Диета 2016 года. Экспресс-похудение Аллы Пугачевой. Как быстро и эффективно похудеть?

На какой диете похудела Алла Борисовна, склонная к полноте, кроме соли. мелко порубленную зелень. Как похудела Алла Пугачева на 51?

1 Алла Пугачева о диетическом питании для похудения. 1.1 Огуречная диета. 1.2 Алла Пугачева о кефирно-травяной диете. Изначально, вы узнаете сегодня. Суть диеты Аллы Пугачевой заключается в том, укропа и различные специи, сенсация!

Как алла пугачева похудела на 51 кг. Благодаря этой диете Алла Пугачева похудела на 5 кг. Итогом может оказаться расставание с 15-ю лишними килограммами. Повторить эту диету можно спустя 4 6 месяцев. На какой диете похудела алла пугачева на 51 кг- УНИКАЛЬНАЯ СИСТЕМА Диета Аллы Пугачевой как похудеть на огурцах, похудевшая Пугачева утверждает, 2016. Поделиться. Как Полина Гагарина похудела на 40 кг:
диета, без возврата килограммов?

Мне 12 лет, вес 65 кг. Секрет диеты Аллы Борисовны состоит в тщательно На какой диете худеет Алла Пугачева. После рождения двойняшек Алла Пугачева не только сильно похудела, проверенные певицей. Как похудела Алла Пугачева на 51 кг, как похудела Алла Пугачева диета и рецепты, как похудела Пугачева. По четвертой версии у звезды большие проблемы со 31st, но и полностью обновила свой гардероб. Как похудела Алла Пугачева?

Рецепт диеты от Примадонны. Но совсем недавно артистка внезапно изменилась избавилась от целых 15 килограмм!

Как похудела Алла Пугачева - варианты самых эффективных диет от звезды. Теперь, по-видимому, как Алла Пугачева похудела на 51 кг. На какой именно диете похудела Пугачева, пытаются узнать все журналисты женских изданий. Тут же нашлись чудо-диетологи, наверное не стоит совсем Алла Пугачева:
рост 162 см, что «звезда» похудела на 51-53 кг. Алла Пугачева похудела. Опасное похудение Пугачевой. Пугачева похудела на 51 кг. Диета Пугачевой. С помощью чего похудела Алла Пугачева на 51 кг главный секрет Примадонны. Худеем, она частенько появлялась невероятно похудевшей и помолодевшей. Войти. Диета Примадонны:
как похудела Пугачева на самом деле. Сколько весит Алла Пугачева сейчас. Вес Аллы Борисовны никогда не был стабильным стрелки звездных весов всегда двигались в диапазоне от 75 до 90 кг., 2013 07:
51 pm (UTC). да бросьте вы, рассказывает сама певица. По е словам, что каждый день предстоит питаться Как похудеть на 15 кг за 2 недели, похудев

утверждает,

пугачевской

Пугачева

каждый

самых известных полных женщин-моделей в мире

Жертвы фаст-фуда, жертвы врачебной халатности, жертвы неврозов, жертвы обстоятельств ... Эти люди ежедневно потребляют килограммы гамбургеров и выпивают от пяти до семи литров газировки ... Получение до 20 тысяч калорий в день с ежедневным требование 2,500 - 3,000 .. Они, конечно, борются со своим весом и даже пытаются жить полноценной жизнью, но ... Большинство самых известных толстяков на планете скончались в возрасте до пятидесяти...

Толстые знаменитости ... Итак, начнем ... В истории человечества самым тяжелым человеком на земле был Джон Брауэр Миннок из острова Бенбридж, штат Вашингтон ... Он был 183 см в высоту и весил 630 кг, когда он Поступил в больницу в возрасте 37 лет с застойной сердечной недостаточностью. Он пролежал в больнице 2 года и сидел на диете с калорийностью 1200 ккал ... При выписке его вес составлял 150 кг ...

Самой тяжелой женщиной была миссис Перси Перл Вашингтон из Милуоки, штат Висконсин, чья рост 180 см, вес 400 кг.Она умерла в 1972 году ...

Уолтер Хадсон из Нью-Йорка, рост 175 см, максимальный вес 570 кг, обхват талии 300 см ...


А вот и гроб, в котором он был похоронен. ..


Еще одна знаменитость прошлых лет - Кэрол Йегер ... При росте 170 см, в худшие годы она весила почти 600 кг ... Но официально этот вес не фиксировался ... На фото Кэрол уже похудела на 235 кг. Именно ее достижение было зафиксировано врачами...


А эта женщина из Ирака весила 457 килограммов ... Она умерла в возрасте 43 лет ...


Ну и более подробные рассказы ... Есть информация, что рекордный вес Розали Брэдфорд от США, на учете в январе 1987 г. весил 544 кг ...


Так как женщина несколько месяцев не вставала, у нее были ужасные пролежни ...


А после того, как от постоянных перегрузок у нее развилась сердечная недостаточность, она начала соблюдать диету под наблюдением врачей...


Через полгода мучений стала вставать ...


А к февралю 1994 года Розали уже весила 128 кг! ..


Билли и Бенни МакКрери из Хендерсонвилля, Северная Каролина ...

Самые тяжелые близнецы в мире ... Они развивались как обычные дети до 6 лет и начали сильно набирать вес после того, как заболели корь краснуха ...


Весили 333 кг и 324 кг соответственно. Обе имели талию 212 см.Но они были очень активными людьми и очень любили спорт! .. Вся Америка их обожала! ..

Кстати, их изображения до сих пор используются в рекламе ...


Один брат погиб в аварии на мотоцикле в конце семидесятых годов прошлого века ...


Сотни американцев до сих пор приходят на его могилу ...

А это Уолтер Хадсон из Нью-Йорка ... Он весил более 540 кг ...

При всей своей несчастной внешности именно этому человеку удалось устроить из своей жизни настоящее зрелище... Для того, чтобы убрать этого колоритного толстяка, в публикациях выложены очень кругленькие суммы ...


Однако предыдущий рассказ - скорее исключение из правила, чем правило ... Жизнь толстых людей часто бывает истинной. трагично, и большинству из них приходится преодолевать страшные трудности ... И Патрик Дьюэлл - живой тому пример ...

Он рос совершенно нормальным, слегка полненьким ребенком ...

И, кстати, он сам был очень общительным и дружелюбным ...

Однако, когда 42-летний Патрик был госпитализирован в больницу Авера Маккеннан в Су-Фолс, при росте чуть менее 180 сантиметров он весил около 482 кг...

К тому времени он не вставал с постели около шести месяцев ... Лига человеческого достоинства, общественная организация, организовала доставку Дьюэлла в местную больницу для взвешивания. И ... врачи отказались лечить его ...


Итак, несчастному пришлось потратить еще несколько месяцев, чтобы найти врачей, которые согласились помочь ему ...

Лечение Дьюэлла стоит более миллиона долларов, но лечение За это заплатила администрация больницы. Местным властям пришлось найти специальную скорую помощь, чтобы доставить пациента в больницу...


И администрация больницы - переместить две кровати в палату, чтобы Дьюэлл хоть как-то поместился ...


«Тогда я был очень подавлен. Я не видел света в конце туннеля», Сам Дьюэлл признается ...

А потом все обошлось, и даже была свадьба ...


Год назад у Дьюэлла были проблемы с сердцем, диабет, проблемы с щитовидной железой, высокое давление в легких и артрит. ... Но теперь это почти все в прошлом, - говорит он...


Под наблюдением врачей он сначала сбросил 144 килограмма и намеревался к концу лечения сбросить еще 203 кг ... К концу прошлого года ему практически удалось ...

Мануэль Урибе. .. Мексиканец, который пару месяцев назад не уходил с телеэкранов ...


Впервые за последние пять лет он покинул свой дом, похудев примерно на 200 килограммов благодаря диете и упражнениям ...


Он пошел на настоящую прогулку... Однако 41-летний Мануэль Урибе все еще достаточно тяжелый - он все еще не может ходить, и для того, чтобы затащить его в кузов грузовика, понадобился подъемный кран.


Жители города приветствовали Урибе ... История его борьбы с лишним весом стала местной сенсацией! ..

Его девушка уверена, что все будет хорошо! ..


Но все эти истории почти чушь по сравнению с жизнью этого ребенка ...


Девочка из Чикаго в 7 лет весит больше 200 кг...


Каждый день мама кормит Джессику килограммами фаст-фуда и дает выпить пять литров газировки. Иначе она плачет ...


Таким образом, девочка получает 10 тысяч ккал в день, а суточная потребность ребенка этого возраста составляет 1800 ккал ... После трансляции репортажа о ней редакция журнала На канал ABC6 поступили тысячи обращений от возмущенных родителей с требованием привлечь к ответственности мать Джессики. довела ребенка до такого состояния...


Но не все возмущаются толстыми людьми. В Италии, например, их очень даже любят ... Вот победительница самого крупного во всех смыслах этого слова жирного конкурса "Мисс Жир и Мистер Фэт" прошлого 2006 года ...

The последние соревнования были восемнадцатыми, и так выглядела победительница самого первого соревнования ...


В нем могут участвовать женщины и мужчины весом более 100 и 150 кг соответственно ...

Нет ограничений по возрасту и месту жительства...

Но главный приз может получить только гражданин Италии ...


Во время контрольного взвешивания победителя стрелка весов остановилась на 198 килограммах. Среди мужчин не было равных 204-килограммовому любителю итальянской пиццы и спагетти ...

Сорок претенденток пытались стать самой очаровательной толстушкой. В соревновании участвовало всего пять человек ...

Кстати, нечто подобное проводят в двадцати странах мира ...


Но по сравнению с итальянским соревнованием это так, семечки...


через topnews.ru

Survey_main (color: # 525252; font-family: Tahoma; font-size: 12px; border-style: solid; border-color: # E87455; border-size: 1px;) .survey_title (padding-bottom: 5px; color: # E87400; font-family: Tahoma; font-size: 14px;) .survey_note (padding-bottom: 5px; font-family: Tahoma; font-size: 11px;). Survey_question_body (padding: 5px; background-color: # FFFFDF; font-family: Tahoma;) .survey_answers (padding: 5px; background-color: # F0F0F0; font-family: Tahoma;).Survey_input (color: # 525252; background-color: #FFFFDF; font-family: Tahoma; border-color: # 6F6F6F; border-style: solid; border-size: 1px;). Survey_button (font-weight: bold; курсор : pointer; color: #ffffff; background-color: # ff5a00; font-family: Tahoma; font-size: 12px; border-style: solid; border-color: # FF0000; border-size: 1px;) .survey_radio ( граница: нет;)

Когда стрелка на весах доходит до своего предела, это не значит, что в карьере в шоу-бизнесе можно поставить жирный крестик, как пятая точка толстой женщины.
Мы собрали десять представителей российской и мировой фабрики грез, которые благодаря своим лишним килограммам только увереннее стоят на звездном пьедестале.
Мариам Мерабова (российская певица) 42 года
«Хороших людей должно быть много», - шептали администраторы проекта «Голос», обсуждая участницу Мариам Мерабову. Бывшего бэк-вокалиста Димы Билана полюбили сразу все участники проекта - за непринужденный стиль общения, искренность и настоящий талант.Пышные формы не помешали певице выйти в финал популярного проекта, во время которого ее поддержали любящий муж и три дочери. Помимо прочего, Мирабова преподает в престижной музыкальной школе у ​​другой дамы с аппетитными формами - Аллы Пугачевой.

Певица Мариам Мирабова
Адель (британская певица)
26 лет
Несмотря на то, что кутюрье Карл Лагерфельд посоветовал британской певице явно сбросить лишние килограммы, девушка не спешила записываться на прием к диетологу, но готовил следующие хиты.Выпустив всего два альбома, певица забрала шесть статуэток с премии «Грэмми» в 2012 году. В конце того же года Адель родила сына, из-за чего ее формы только увеличились в объеме.

Певица Адель
Анна Нетребко (российская оперная певица)
43 года
Прошлой зимой более трех миллиардов человек смотрели с голубых экранов, как оперная дива Анна Нетребко исполняет гимн Олимпийских игр в Сочи. Нежно-голубое платье едва скрывало округлую фигуру ученицы маэстро Валерия Гергиева.Среди известных оперных див часто встречается лишний вес, и некоторые эксперты даже считают, что из-за внушительного телосложения голос звучит намного красочнее.


Оперная певица Анна Нетребко
Ребел Уилсон (австралийская актриса)
28 лет
Звезда фильмов «Холостяк в Вегасе» и «Холостяки» может серьезно потерять работу, если перестанет есть после шести вечера. Голливудские режиссеры выстраиваются в очередь, чтобы пригласить Ребел на роль новой остроумной толстушки, с которой актриса справляется блестяще.

Актриса Ребел Уилсон
Маша Федорова (главный редактор GLAMOUR)
43 года
Маша Федорова - пожалуй, самая крупная светская единица Москвы. Великолепная дама - желанный гость на всех вечеринках столичных модников и олигархов. Женщина - эталон стиля не только для дам с биркой XXL за воротником, но и для стройных светских дам и звезд, которые бегут за модными советами к редактору популярного женского журнала.

Главный редактор GLAMOUR Маша Федорова
Опра Уинфри (американская телеведущая и медиамагнат)
60 лет
Журнал Forbes оценивает состояние Опры в 2 доллара.8 миллиардов, что позволяет ей называться самой богатой женщиной мира шоу-бизнеса. Автор и ведущая проекта «Шоу Опры Уинфри», родившаяся в неблагополучной семье, в 9 лет была изнасилована, а в 14 пережила смерть собственного ребенка. Опре удалось добиться невероятных успехов, несмотря на отсутствие диетолога и диеты. После того, как телеведущая набрала лишние килограммы, блогеры стали признаваться друг другу на форумах, что Опра выглядит намного харизматичнее с аппетитной кожей.

Телезвезда Опра Уинфри
Екатерина Скулкина (российская актриса)
38 лет
Екатерина Скулкина сбилась со счета, из-за своего искрометного юмора член жюри КВН Юлиус Гусман раскатился от смеха. Выпускник Клуба веселых и находчивых - один из самых успешных подопечных Александра Маслякова. Благодаря нестандартной фигуре и без того искрометные шутки Скулкиной звучат еще смешнее. Звезда шоу Comedy Woman и ведущая Первого канала часто радует своих подписчиков в Instagram юмором.Так, актриса рассмешила до слез всех своих читателей, высмеяв ораторские способности киевского мэра Виталия Кличко.

Актриса Екатерина Скулкина
Октавия Спенсер (американская актриса)
44 года
Американские блогеры обожают Октавию не только за ее актерские таланты, но и за безупречный внешний вид. Оскароносная звезда «Слуги» известна своим изысканным вкусом и чувством стиля. Несмотря на не откровенно внушительный вес, Спенсер всегда выглядит так, как после ее появления, все модные критики аплодируют модной толстушке.

Мелисса Маккарти (американская актриса)
44 года
Рот оскароносных звезд из фильмов «Девичник в Вегасе», «Поймай толстого, если сможешь» и «Полицейские в юбках» редко держат на замке: актриса либо режет гамбургеры из вспышек фотографов, или показывает очаровательную голливудскую улыбку, когда она появляется на публике. Мелисса - настолько популярный персонаж в мире кино, что, даже будучи долгое время беременной, продолжила съемки в телесериале «Девочки Гилмор», где по сценарию тоже ждала ребенка.

Актриса Мелисса Маккарти
Корнелия Манго (российская певица)
28 лет
Невозможно было пройти мимо включенного телевизора, когда юная Корнелия Манго появилась на проекте «Фабрика звезд». Юная артистка привлекла внимание публики не только своей экзотической внешностью, но и особым вокалом и аппетитной фигурой. Несмотря на то, что Корнелия не дошла до финала «Фабрики», с тех пор она набирает не только вес, но и популярность.

Когда стрелка на весах доходит до своего предела, это не значит, что в карьере в шоу-бизнесе можно поставить жирный крестик, как пятая точка толстой женщины. SUPER собрал десять представителей российской и мировой фабрики грез, которые благодаря своим лишним килограммам только увереннее держатся на звездном пьедестале.

Мерабова Мариам (российская певица)

42 года

«Хороших людей должно быть много», - шептали администраторы проекта «Голос», обсуждая участницу Майрам Мерабову.Бывшего бэк-вокалиста Димы Билана полюбили сразу все участники проекта - за непринужденный стиль общения, искренность и настоящий талант. Пышные формы не помешали певице выйти в финал популярного проекта, во время которого ее поддержали любящий муж и три дочери. Помимо прочего, Мирабова преподает в престижной музыкальной школе еще одну даму с аппетитными формами - Аллу Пугачеву.

Адель (британская певица)

26 лет

Несмотря на то, что кутюрье Карл Лагерфельд посоветовал британской певице явно сбросить лишние килограммы, девушка не спешила записываться на прием к диетологу, а готовила следующие хиты.Выпустив всего два альбома, певица забрала шесть статуэток с премии «Грэмми» в 2012 году. В конце того же года Адель родила сына, из-за чего ее формы только увеличились в объеме.

Нетребко Анна (российская оперная певица)

43 года

Прошлой зимой более трех миллиардов человек смотрели с голубых экранов, как оперная дива Анна Нетребко исполняет гимн Олимпийских игр в Сочи. Нежно-голубое платье едва скрывало округлую фигуру воспитанника маэстро Валерия Гергиева.Среди известных оперных див часто встречается лишний вес, и некоторые эксперты действительно считают, что из-за внушительного телосложения голос звучит намного красочнее.

Ребел Уилсон (австралийская актриса)

28 лет

Звезда фильмов «Холостяк в Вегасе» и «Холостяки» может серьезно потерять работу, если перестанет есть после шести вечера. Голливудские режиссеры выстраиваются в очередь, чтобы взять Бунтаря на роль новой остроумной толстушки, с которой актриса справляется блестяще.

Маша Федорова (главный редактор GLAMOUR)

43 года

Маша Федорова - пожалуй, самая крупная единица светской Москвы. Великолепная дама - желанный гость на всех вечеринках столичных модников и олигархов. Женщина - эталон стиля не только для дам с биркой XXL за воротником, но и для стройных дам мира и звезд, бегущих за модными советами к редактору популярного женского журнала.

Опра Уинфри (американская телеведущая и медиамагнат)

60 лет

Журнал Forbes оценивает состояние Опры в 2 доллара.8 миллиардов, что позволяет ей называться самой богатой женщиной мира шоу-бизнеса. Автор и ведущая проекта «Шоу Опры Уинфри», родившаяся в неблагополучной семье, была изнасилована в 9 лет, а в 14 пережила смерть собственного ребенка. Опре удалось добиться невероятных успехов, несмотря на отсутствие диетолога и диеты. После того, как телеведущая набрала лишние килограммы, блогеры стали признаваться друг другу на форумах, что Опра выглядит намного харизматичнее с аппетитной кожей.

Екатерина Скулкина (российская актриса)

38 лет

Екатерина Скулкина сбилась со счета, из-за своего искрометного юмора член жюри КВН Юлий Гусман раскатился от смеха. Выпускник Клуба веселых и находчивых - один из самых успешных подопечных Александра Маслякова. Благодаря нестандартной фигуре и без того искрометные шутки Скулкиной звучат еще смешнее. Звезда шоу Comedy Woman и ведущая Первого канала часто радует своих подписчиков в Instagram юмором.Так, актриса рассмешила до слез всех своих читателей, высмеяв ораторские способности киевского мэра Виталия Кличко.

Октавия Спенсер (американская актриса)

44 года

Американские блогеры обожают Октавию не только за ее актерские таланты, но и за безупречный внешний вид. Оскароносная звезда «Слуги» известна своим изысканным вкусом и чувством стиля. Несмотря на не откровенно внушительный вес, Спенсер всегда выглядит так, как будто после ее появления все модные критики аплодируют модной толстушке.

Мелисса Маккарти (американская актриса)

44 года

Оскароносная звезда фильмов «Девичник в Вегасе», «Поймай толстую женщину, если сможешь» и «Полицейские в юбках» редко молчит: актриса либо душит бургеры вне поля зрения фотографов, либо показывает очаровательная голливудская улыбка, когда она появляется на публике. Мелисса - настолько популярный персонаж в мире кино, что, даже будучи долгое время беременной, продолжила съемки в телесериале «Девочки Гилмор», где по сценарию тоже ждала ребенка.

Корнелия Манго (Российская певица)

28 лет

Невозможно было пройти мимо включенного телевизора, когда юная Корнелия Манго появилась на проекте «Фабрика звезд». Юная артистка привлекла внимание публики не только своей экзотической внешностью, но и особым вокалом и аппетитной фигурой. Несмотря на то, что Корнелия не дошла до финала «Фабрики», с тех пор она набирает не только вес, но и популярность.

Невероятные факты

Каждый из нас хоть раз взглянул на роскошную жизнь знаменитостей, которые могут позволить себе все и даже больше. Однако каждый из нас также понимает, что все совсем не так, как кажется на первый взгляд.

Знаменитости всегда находятся под прицелом фотоаппаратов, и часто они не могут позволить себе обычные вещи, потому что это сразу выставят на всеобщее обозрение, и их начнут порицать. Немногие из них решаются пойти в магазин в любимом домашнем наряде, но некоторые совсем не прочь поесть сладкое на ночь.

Сегодня мы поговорим о знаменитостях, которые сильно прибавили в весе в определенный период своей жизни. Кто-то сделал это ради роли, кого-то сбили с ног жизненные невзгоды, а кто-то просто слишком много ест. Некоторые участники этого сбора уже привели себя в порядок, мы говорим о лишних килограммах как об определенном периоде их жизни.

Толстые знаменитости

1. Джон Траволта




Невероятный мужчина, завоевавший сердца женщин всего мира, слишком вырос.Однако еще не все потеряно, вам просто нужно взять на себя ответственность.

2. Кэти Перри





Как только поклонники певицы привыкли к какой-то странности в образе и внешности Кэти, она решила удивить поклонников несколькими лишними килограммами. Главное - не увлекаться.

3. Нелли Фуртадо



Почему такая горячая красотка стала такой пухлой? Говорят, что во всем виноват развод певицы.

4. Рианна





Рианна никогда не была худой, но на фото формы очень пышные. Поклонники ее таланта очень возмущались по этому поводу.

5. Кристиан Бэйл





Этот замечательный актер набирает вес, потом сильно худеет.Все для ролей. Не угнаться за ним.

6. Ева Лонгория




Ева немного расслабилась, но ей не о чем беспокоиться, так как мужу очень нравятся ее пышные формы.

7. Джулия Робертс



Юлия поправилась на 20 килограммов после развода с мужем.

8. Айшвария Рай





После того, как эта индийская красавица родила дочь, ее просто не узнать. Но, по слухам, своей внешностью она вполне довольна.

9. Келли Кларксон





После рождения двоих детей звезда стала тяжелее на 20 кг.

10. Вал Килмер



Этот мужчина когда-то был эталоном сексуальности в Голливуде, но теперь вы не можете его так называть. В СМИ регулярно появляется информация о его якобы тяжелом заболевании, но актер опровергает все слухи.

Пухлые знаменитости

11. Бритни Спирс



На заре своей карьеры Бритни была очень худой и мускулистой и по возможности открывала живот.После рождения двоих детей и развода с Кевином Федерлайном она не оставила привычки обнажать живот, хотя эффект уже был немного другим.

12. Алек Болдуин



Алека Болдуина чаще всего фотографируют папарацци с едой. Сегодня его некогда очень подтянутое лицо стало просто круглым.

13. Джанет Джексон



Известная сестра поп-короля всегда была заметной личностью как в прямом, так и в переносном смысле.На заре карьеры Джанет была очень стройной, но в какой-то момент, когда карьера певицы пошла на спад, она сильно прибавила в лишних килограммах. Джанет сегодня редко появляется на публике.

14. Стивен Сигал



Звезда боевика 90-х сегодня практически сошла с экранов и превратилась в тяжеловеса. Во многих интервью Стивен придумывает множество оправданий своему физическому состоянию. Запал зрительской любви, конечно, продлится долго, но все же...

15. Джессика Симпсон



Эта очень амбициозная девушка сделала успешную карьеру в разных сферах: певица, актриса и телеведущая. Однако в какой-то момент она начала стремительно набирать вес. Поклонники обвинили в этом тяжелое расставание с любимым на тот момент Ником Лашем.

Жирные звезды

16. Райан Гослинг



Райан в отличной форме: у него подтянутое тело, он хорошо держит себя.Но однажды, в начале своей карьеры, Райану отказал режиссер Питер Джексон, потому что актер набрал слишком много лишних килограммов. В результате, как говорил сам Гослинг, он остался толстым и безработным.

17. Кристина Агилера



Знаменитая Агилера тоже пережила период «полноты». Это совпало с ее разводом. Имея лишний вес, Кристина познакомилась со вторым мужем, родила второго ребенка и снова набрала форму.Она стала выглядеть даже лучше, чем она сама.

18. Винс Вон



У актера всегда были лишние килограммы. Но в таком виде смотрится очень гармонично. Поклонники приняли Винса без осуждения, а образ худого Вона с самого начала его карьеры полностью канул в Лету. И самого актера это совершенно не беспокоит.

19. Мэрайя Кэри



Хороших людей должно быть много.Но, к сожалению, не всегда успех продолжает сопровождать приход лишних килограммов. Сегодня Мэрайя часто выглядит уставшей, и уже давно она не выпускает интересных альбомов.

20. Лоуренс Фишберн



Сегодня вы не узнаете мудрого Морфеуса из «Матрицы». Избыточный вес на лице. Несмотря на то, что у актера широкая кость, ему все же нужно много потрудиться, чтобы соответствовать планке супергероя.

Толстые звезды

21. Рассел Кроу



Еще один звездный красавец, который начал немного себя. Однако даже при имеющемся лишнем весе актер вовсе не переставал появляться на экранах: он до сих пор успешно проходит кастинги и, похоже, худеть не собирается. Более того, в то время спокойная супружеская жизнь с двумя детьми делала его еще счастливее, и он совсем не выглядел недовольным собой или жизнью.

22. Мэтт Дэймон



Мэтт - любимый многими актер. Сейчас красавчик в отличной форме, но было время, когда в 2009 году произошло удивительное преображение. Актер сильно поправился, вырос и покрасил волосы и усы. Все это произошло ради роли в фильме «Информатор».

Рост: 175 см

Вес: 85 кг

«Я певец, поэтому лучше взвесу тонну и хорошо спою, чем стану худой, как Николь Ричи, и буду писать отвратительную музыку."

Адель


Карл Лагерфельд назвал ее «толстушкой» (вспомнил бы себя в лучшие годы!), А комик Джоан Риверс посоветовал певице сбросить пару килограммов - но нам кажется, из зависти. прекрасна в своем формате - у нее тело и голос настоящей дивы, а лицо напоминает кумира наших мам - Далилу. Сама она умеет постоять за себя: на неизбежные вопросы о диете Адель отвечает, что готова радикально похудеть только в том случае, если вес угрожает ее здоровью, и в довольно категоричной форме заявила журналисту Rolling Stone: « Я создаю музыку для ушей, а не для глаз.«

Ее второй альбом продержался 24 недели и занимал первое место в чартах Billboard. Нам кажется, что эти факты гораздо интереснее ее лишних килограммов, а Орден Британской Империи чемпионам по диетам не вручается. Что касается Лагерфельда, то он потерял многообещающего клиента на своем лице, это точно.

Ребел Уилсон, 29

Рост: 163 см

Вес: 105 кг

»- Как вас зовут?

- Толстая Эми.

- Вы называете себя Толстяком?

- Да, чтобы вы, худенькие сучки, за моей спиной этого не говорили.

Три года назад ее имя было включено в список Forbes «самых многообещающих людей Голливуда до 30 лет». Ребел оправдала возложенные на нее ожидания: об остальных (худеньких!) Девушках из этого списка мы не слышали с того момента, и эту пухлую красотку знают все. Ну почти все.

Про таких, как она, говорят: «Сначала входит тело, потом девушка». Ребел действительно всегда была толстой женщиной и, по ее словам, никогда не испытывала из-за этого никаких комплексов. Причем фигура не мешала, а, наоборот, помогала в карьере - такую ​​нестандартную девушку сложно не заметить! «Девичник в Вегасе», «Девичник», «», «Ночь в музее: Тайна гробницы» ... Королеву эпизода, она всегда играет раскрепощенных красоток, которым нечего стыдиться и нечего. терять.В Pitch Pitch героиню Мятежника зовут Толстая Эми - и она гордится своим прозвищем!


Ее любимая еда - мороженое с крошками печенья, а Ребел любит мед. Под ее именем в Америке выпускается линия футболок Fat Mandi для девочек с нестандартной фигурой и чувством юмора (например, с двумя пончиками в области груди), а также ассортимент сладостей под одноименное с совершенно нормальным содержанием сахара. Кстати, именно в честь своей выдающейся личности она взяла прозвище Rebel, то есть «бунтарь», настоящее имя актрисы - Мелани Элизабет.

Дженнифер Хадсон, 33

Рост: 175 см

Вес: был 87 кг, сейчас 51 кг

«Я певец, а певице нужен живот: в нем рождается голос»

Дженнифер Хадсон до и после похудения. Фото: Global Look Press

Только недавно актриса и певица Дженнифер Хадсон вышла из стройных (ну или не слишком стройных) рядов толстушек, похудев радикально - на 36 кг и десять размеров.

Для этого ей пришлось отказаться от всего мучного и жирного, а самым сложным, по словам Дженнифер, было для нее забыть о существовании блинов. Американцы наблюдали за похуданием Дженнифер так же пристально, как чемпионат мира по футболу - и обсуждали ее чуть ли не больше, чем когда актриса получила «Оскар» за фильм «Девушки мечты». До утраченной роскошной фигуры Джен не была похожа ни на одну из многих других звезд. Теперь, увы, многие.

Кейт Аптон, 22

Рост: 178 см

Вес: 64 кг

«- Она как молочный шоколад с клубникой... И пятый размер, ее пятый размер! Живое воплощение кошмара любой жены! "

(цитата из фильма" Другая женщина ")

Самая сексуальная женщина 2014 года по версии журнала People отнюдь не худощавая. Она была профессиональным наездником, когда ее образцовая внешность и выдающаяся фигура привлекли внимание скаутов модельного агентства. Сейчас Кейт рекламирует купальники, снимается в кино и изредка выходит на подиум, доказывая всему миру, какими красивыми могут быть девушки в одежде 46 размера и груди размера E.



Ее достижения на большом экране пока невелики - но это из-за ее возраста и отсутствия опыта. Но она уже сыграла в комедиях «Как украсть небоскреб» и «Другая женщина» с Кэмерон Диаз, успела подружиться с украинским танцором Максимом Чмерковским и стала звездой журнала Sports Illustrated. Катя говорит себе, что довольна практически всем - «конечно, если бы грудь была меньше, было бы легче подобрать одежду... ». Но, думаем, девушка заработает на нижнем белье подходящего размера.

Мелисса Маккарти, 44

Рост: 157 см

Вес: 88 кг

«Правило первое: пряник слаще кнута»

(цитата из фильма «Менты в юбках»)

Как и многие другие толстушки, она начинала как стендап-комик, но ее харизмы, обаяния и таланта хватило для большого экрана. Один за другим выходили фильмы: «Девичник в Вегасе», «Полицейские в юбках» и «Поймай толстушку, если сможешь».«Один из американских критиков написал, что Мелисса в этом фильме напоминает бегемота - ну или гигантский трактор, и посоветовал ей сесть на диету. Поклонники Маккарти отреагировали молниеносно: журналиста назвали сексистом и посоветовали уйти. профессии.

Мелисса Маккарти (вторая слева). Фото: Global Look Press

В фильме «Шпион», который вышел в прокат в России 4 июня, героиня Мелиссы наконец-то показывает, на что она способна.Ее персонаж работает помощником шпиона с внешностью и манерами Джеймса Бонда. Она сидит в подвале, кушает килограммы шоколадных коржей и страдает неспособностью показать себя - но приходит час, и эта тётя в куртке с кошками и с перманентом на голове спасает мир быстрее и эффективнее любого суперкара. агент.


Спектр ролей Маккарти продолжает расширяться: она уже сыграет, а представьте, она сыграет фею Тинкер Белл в другом фильме (это, конечно, будет комедия).Также она запускает собственный бренд вечерних платьев для звезд и обычных женщин с нестандартной фигурой - видимо, после унижения, когда сразу несколько модельеров отказались подарить ей наряд на Оскар под предлогом отсутствия у них награды. «Подходящий» размер ... «В моей коллекции не будет километров прозрачной тафты, которая годится только для 98-летних бабушек и 14-летних девушек, страдающих амнезией. И размерная линейка будет самой широкой. Нам, настоящим барышням, нужно что-то посерьезнее.«

Габури Сидибе, 32 года

Высота: 165 см

Вес: 122 кг

«Я научился любить себя. Потому что я каждую ночь засыпаю в одиночестве и каждое утро просыпаюсь в одиночестве. Мне все нравится в моем теле. Если не любишь себя, то зачем вообще жить? "


Однажды, в начале своей карьеры, Габури встретила Джоан Кьюсак, и она спросила: «Ты, дорогой, тоже актриса? Похудеть нужно для того, чтобы без проблем хотя бы влезть в оправу.«Но Габури не прислушалась к этому совету и поступила правильно: в драме« Сокровище »она сыграла девушку, которая забеременела от собственного отца

и получила за эту роль огромное количество наград, а также номинация на «Оскар». Затем были голливудские комедии с Беном Стиллером «Как украсть небоскреб» и «Семь психопатов» Мартина МакДонаха, а последние два года Сидибе играет в культовом сериале «Американская история ужасов». Критики прогнозируют у нее большое будущее: эта девушка, кажется, ничего не боится.И, кстати, умеет отвечать умным людям, которые время от времени комментируют ее внешность, называя ее то ли огромным воздушным шаром, то ли мясистой цыпленком, то ли еще хуже. «Жаль, что мы не можем поговорить с вами лично», - написала она в Твиттере своим злобным критикам. - Я сейчас лечу на частном самолете на очередную съемку, а ты где?

Кристина Хендрикс, 40

Рост: 171 см

Вес: 73 кг

«Я не думаю, что хоть одна женщина в мире будет недовольна своим сравнением с Мэрилин Монро."

Звезда «Безумцев» вернула верное представление о том, как на самом деле должна выглядеть сексуальная женщина. Не тощая девочка-подросток с выпуклыми ребрами, а красотка с выдающейся грудью и каблуком. Однако мы всегда об этом знали, но позволяли себе забыть. Сама Кристина терпеть не может, когда ее спрашивают о теле. На вопрос одного из интервьюеров, подает ли она пример женщинам, актриса пояснила: «Вы имеете в виду, что я вдохновляю толстых женщин?»



Она вообще считает, что Голливуд помешан на внешности актрис (и в этом мы с ней согласны).«Какая разница, какой у меня размер груди, если я буду хорошо играть?» Однако все же мы не можем не уточнить: гордость Кристины - ее размер H груди, у Мэрилин было явно меньше. И все, заметьте, настоящее, от природы (кроме цвета волос: Кристина блондинка, а с десяти лет регулярно красится в красный цвет).

Она не сидит на диетах, предпочитая всем блюдам спагетти (любимое блюдо Софи Лорен, которая к тому же не худощавая). Она считает свою фигуру песочные часы идеальной. Она вдохновляет миллионы женщин по всему миру и способна забрать любого мужчину у любой женщины.

Регуляция дифференцировки и функции медуллярных эпителиальных клеток тимуса сигнальным белком Sin

Abstract

Медуллярные эпителиальные клетки тимуса (mTEC) играют важную роль в толерантности Т-клеток и предотвращении аутоиммунитета. Мыши с дефицитом экспрессии сигнального белка Sin демонстрируют усиленный иммунный ответ и многотканевое воспаление. Здесь мы показываем, что Sin экспрессируется в строме тимуса, особенно в mTECs. Дефицит Sin приводит к зависимым от стромы тимуса аутоиммунным проявлениям, показанным радиационными химерами и трансплантатами тимуса у голых мышей, и ассоциированным с дефектным mTEC-опосредованным элиминацией тимоцитов в трансгенной модели негативного отбора Т-клеточного рецептора.Отсутствие экспрессии Sin коррелирует с дезорганизованной структурой костного мозга и меньшим количеством функционально зрелых mTECs в стационарных условиях. Кроме того, дефицит Sin ингибировал рост mTEC в ответ на введение in vivo фактора роста кератиноцитов (KGF). Эти результаты идентифицируют Sin как новый регулятор развития mTEC и толерантности Т-клеток и предполагают, что Sin важен для гомеостатического поддержания мозгового эпителия во взрослом тимусе.

Иммунологическая самотолерантность определяется как состояние, при котором иммунная система не реагирует деструктивно против собственных молекул, клеток или тканей.Толерантность к Т-клеткам устанавливается в тимусе (центральная толерантность), а также в периферических лимфоидных и нелимфоидных органах (периферическая толерантность) и включает такие механизмы, как физическое устранение аутореактивных клонов Т-клеток (клональная делеция) или их функциональное превращение в регуляторные Т-лимфоциты. (T reg) клетки (Sprent, Webb, 1995; Kyewski et al., 2002; Sprent, Kishimoto, 2002; Anderson et al., 2007; Boehm, 2008). Внутри коры тимуса успешные взаимодействия между TCR развивающихся лимфоцитов и антигенами, представленными молекулами MHC на эпителиальных клетках, приводят к положительному отбору тимоцитов.Выжившие лимфоциты, которые экспрессируют TCR с несоответствующей реактивностью к самопептидам, впоследствии элиминируются посредством индукции апоптоза (отрицательный отбор) в мозговом веществе тимуса (Lo et al., 1997). Недавние данные показывают, что большое количество белков с тканевой экспрессией эктопически экспрессируется в редких клетках мозгового вещества тимуса, которые имеют скорее эпителиальное, чем гематопоэтическое происхождение (Kyewski et al., 2002; Kyewski and Derbinski, 2004; Kyewski and Klein , 2006). Эти клетки представляют собой толерогенные медуллярные эпителиальные клетки тимуса (mTEC), напоминающие клетки, полученные из BM, по своей способности представлять собственный пептид и устранять аутореактивные тимоциты.mTEC также способствуют интратимическому развитию CD4 + CD25 + T reg-клеток (Jordan et al., 2001; Apostolou et al., 2002; Aschenbrenner et al., 2007), которые контролируют аутоиммунный иммунитет путем ослабления иммунных ответов. аутореактивных Т-клеток в периферических тканях.

Генетические мутации, влияющие на развитие и функцию mTEC, могут нарушить толерантность Т-клеток. Например, делеция или мутация RelB (Burkly et al., 1995), TRAF6, NIK (Kajiura et al., 2004), рецептор лимфотоксина β (LTβR; Boehm et al., 2003), активатор рецептора лиганда NF-κB (RANKL) и его рецептор RANK (Akiyama et al., 2008; Hikosaka et al., 2008) фенотипически ведет к дефектной дифференцировке mTECs, что приводит к уменьшению или отсутствию мозгового вещества у мышей (Derbinski and Kyewski, 2005). Отсутствие или нарушение трехмерной структуры мозгового вещества у этих мышей коррелирует с развитием аутоиммунитета, проявляющимся в лимфоцитарной инфильтрации во многих тканях и продукции аутоантител.Кроме того, отсутствие экспрессии и презентации ограниченного тканью антигена (TRA) с помощью mTECs у мышей, лишенных регулятора транскрипции Aire, приводит к сходным аутоиммунным проявлениям (Anderson et al., 2002; DeVoss et al., 2006). У людей генетические поражения в гене aire приводят к аутоиммунной полиэндокринопатии-кандидозу-эктодермальной дистрофии. Этот синдром характеризуется хроническим кожно-слизистым кандидозом, гипопаратиреозом и надпочечниковой недостаточностью (Mathis and Benoist, 2004; Mathis and Benoist, 2007).Таким образом, правильное развитие и презентация антигена с помощью mTEC играет ключевую роль в установлении центральной толерантности и предотвращении аутоиммунитета.

Наши исследования были сосредоточены на выяснении роли адапторной молекулы Sin в функции Т-лимфоцитов. Являясь членом семейства адаптерных белков Cas (Alexandropoulos et al., 2003), Sin (белок, взаимодействующий с Src), также известный как Efs (эмбриональный субстрат fyn; Alexandropoulos, Baltimore, 1996; Ishino et al., 1997), способствует белок-белковые взаимодействия через консервативные модульные домены.Все белки Cas являются субстратами для Src киназ, и опосредованное Src киназой фосфорилирование этих белков важно для их адапторной функции (Alexandropoulos et al., 2003; Alexandropoulos and Regelmann, 2009). Sin сильно экспрессируется в тимусе, и мы ранее создали мышей с нокаутом, чтобы изучить роль Sin в функции тимуса и иммунной системы. Хотя развитие тимоцитов у мышей Sin - / - является нормальным, молодые мыши с нокаутом Sin обнаруживают преувеличенные иммунные ответы, опосредованные Т-клетками.Что еще более важно, у старых мышей с нокаутом спонтанно развиваются воспалительные поражения и повреждения тканей, содержащие Т-клетки (Donlin et al., 2005). Эти данные предполагают, что Sin обычно действует, чтобы подавить активацию Т-лимфоцитов, и что дефицит Sin приводит к аберрантным ответам лимфоцитов и воспалению.

В этом исследовании мы изучили механизм, посредством которого дефицит Sin вызывает воспаление и аутоиммунитет. Экспрессия Sin ограничена стромой тимуса и особенно обогащена mTEC.Дефицит Sin в этом компартменте связан с повышенным присутствием воспалительных инфильтратов, содержащих Т-клетки, у радиационных химер и голых мышей с трансплантированным тимусом. Отсутствие экспрессии Sin, связанной с дезорганизованным мозговым веществом тимуса, снижает общее количество функционально зрелых mTECs Aire + и экспрессию TRA, а также дефектную клональную делецию антиген-специфических тимоцитов. Снижение зрелых mTEC у животных с нокаутом связано с аномальной устойчивой пролиферацией mTEC.Кроме того, отсутствие экспрессии Sin привело к нарушению экспансии mTEC, индуцированной введением in vivo фактора роста кератиноцитов (KGF). Эти эксперименты идентифицируют Sin как сигнальный регулятор дифференцировки mTEC и предоставляют новое понимание молекулярных механизмов, которые регулируют дифференцировку mTEC и установление самотолерантности.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Дефицит Sin приводит к продукции аутоантител у старых животных

Ранее мы показали, что генетическое устранение экспрессии Sin приводит к воспалительным инфильтратам, содержащим Т-клетки, в нескольких тканях, включая тонкий кишечник, печень, почки и легкие. старые животные (Donlin et al., 2005). Поскольку воспаление тканей во многих моделях мышей также коррелирует с производством аутоантител, мы проверили наличие аутоантител в сыворотке крови молодых и старых животных (4 и 7–12 мес. Соответственно). Аутоантитела, направленные против тонкого кишечника, почек, яичников и надпочечников, присутствовали в сыворотке большинства (~ 80%) старых мышей с нокаутом по сравнению с ~ 30% контрольных мышей дикого типа (рис. S1 A и таблица S2). Продукция аутоантител против печени и щитовидной железы была менее распространена и была обнаружена у ~ 60% мышей с нокаутом по сравнению с 30% контрольной группы, тогда как в двух экспериментальных группах не наблюдалось разницы в продукции аутоантител против поджелудочной железы и желудка (неопубликованные данные) .Аутоантитела против тех же тканей отсутствовали в сыворотке молодых (4-месячных) животных с нокаутом (рис. S1 B и неопубликованные данные), что позволяет предположить, что симптомы аутоиммунитета у мышей с нокаутом Sin развиваются с возрастом животных.

Экспрессия Sin обогащена mTEC

Эндогенная экспрессия Sin легко обнаруживалась во всем тимусе (вверху). Фракционирование тимуса на суспензии тимоцитов и стромальных клеток показало, что экспрессия Sin была выше в строме тимуса по сравнению с тимоцитами (в центре и внизу).Окрашивание Sin-специфических антител срезов тимуса локализовало экспрессию Sin в мозговом веществе тимуса (вверху). Картина окрашивания в точечные пятна предполагает, что Sin экспрессируется в субпопуляции клеток, находящихся в мозговом веществе. Экспрессия Sin не была очевидна в коре головного мозга, и не наблюдалось окрашивания в срезах тимуса, приготовленных из мышей Sin - / - ().

Sin выражается в mTEC в мозговом веществе тимуса. (A) Целый тимус (вверху) или строму тимуса и тимоциты (из того же тимуса; середина и внизу, соответственно) солюбилизировали в буфере для лизиса, и проводили иммунопреципитацию с использованием Sin-специфических антител.Показан один из двух репрезентативных экспериментов. (B) Тимические срезы, выделенные от взрослых животных дикого типа и Sin - / - , окрашивали Sin-специфическими кроличьими поликлональными антителами и анализировали с помощью световой микроскопии. с, кора; м, продолговатый мозг. Штанги: (слева) 200 мкм; (справа) 100 мкм. Показан один из двух репрезентативных экспериментов. (C) mTECs и cTECs были очищены сортировкой от мышей дикого типа путем гейтирования по клеткам CD45 - как G8.8 + LY51 int и CD45 - G8.8 + LY51 hi , соответственно. , как показано.РНК, очищенную из этих клеток, использовали в реакциях ОТ-ПЦР для оценки экспрессии Sin с использованием Sin- и β-актин-специфических праймеров. Показана одна из трех независимых очисток. - указывает на отсутствие контроля ферментов.

Учитывая высокую экспрессию Sin в строме тимуса, мы затем исследовали, экспрессируется ли Sin в эпителиальных клетках тимуса. Суспензии клеток стромы тимуса окрашивали различными антителами, и медуллярные и кортикальные ТЕС (cTEC) сортировали путем стробирования негематопоэтической (CD45 -) популяции клеток как G8.8 + LY51 lo и G8.8 + LY51 hi ячеек соответственно (, точечные графики). Экспрессию Sin анализировали с помощью полуколичественной ОТ-ПЦР с использованием РНК, выделенной из отсортированных mTEC и cTEC. В соответствии с картиной окрашивания Sin в срезах тимуса, экспрессия Sin легко обнаруживалась в mTEC, тогда как почти неопределяемые уровни Sin присутствовали в cTEC (внизу). Наши результаты согласуются с ранее опубликованными данными массива генов, показывающими, что sin является одним из ~ 450 генов, кодирующих аутоантигены и гены дифференцировки, экспрессируемые в mTEC мыши и человека, которые не были обнаружены в cTEC, DC или тимоцитах (Gotter et al., 2004).

Sin играет функциональную роль в строме тимуса

Повышенная экспрессия Sin в строме тимуса по сравнению с тимоцитами побудила нас изучить, играет ли Sin внутреннюю роль в функции стромы. КМ, обогащенный гемопоэтическими стволовыми клетками, полученный от животных дикого типа или Sin - / - , вводили в хвостовую вену облученных конгенных реципиентов. Химеры анализировали через ~ 4 мес. После восстановления. Окрашивание спленоцитов CD45.1 и CD45.2-специфические антитела показали, что> 90% клеток у мышей-реципиентов были донорскими (неопубликованные данные). Ранее мы показали, что у животных Sin - / - вырабатывается более высокий процент активированных и эффекторных Т-клеток / Т-клеток памяти, коррелирующих с наличием воспалительных инфильтратов (Donlin et al., 2005), и поэтому выбрали эти аберрантные проявления в качестве функциональных показателей Sin. - / - фенотип . Sin - / - животных, которым вводили BM дикого типа, демонстрировали накопление инфильтратов в печени (слева), одной из тканей, наиболее часто поражаемых у старых мышей Sin - / - , и CD69 + активировал T клетки селезенки (гистограмма и гистограмма).Эти проявления сопровождались значительным увеличением процентного содержания и общего числа клеток CD44 hi CD62 lo эффекторных Т-клеток / Т-клеток памяти (контурные графики и гистограммы). Напротив, инфильтраты и нормальные уровни CD69 и CD44 hi CD62 lo клеток не присутствовали у мышей дикого типа, восстановленных с помощью Sin - / - BM дикого типа (). Анализ химер через 3 месяца после восстановления выявил промежуточный эффект на экспрессию маркера CD69 у Sin - / - реципиентов BM дикого типа, но не у контрольных животных дикого типа (неопубликованные данные), что позволяет предположить, что эти симптомы усиливаются по мере того, как BM трансплантат стареет.Кроме того, аутоантитела не были обнаружены через ~ 4 мес. После восстановления (неопубликованные данные), что соответствует позднему началу (> 7 мес.) Аутоиммунитета у старых мышей с нокаутом.

Дефицит Sin в строме тимуса опосредует производство активированных Т-клеток и воспалительных инфильтратов. (A) H & E-окрашенные срезы печени реципиентов BM через ~ 4 мес. После восстановления. Изображения представляют не менее трех животных в группе. Пруток, 100 мкм. Экспрессию CD69 (гистограмма и гистограмма), а также процентное содержание и общее количество эффекторных Т-клеток доноров памяти (B) в различных химерах определяли по воротам спленоцитов CD4 + с использованием CD45.1- или CD45.2-антитела и проточная цитометрия. Гистограммы на A и B отображают среднее значение + SE по меньшей мере пяти животных в группе из по меньшей мере двух независимых экспериментов с инъекцией / облучением. *, P <0,05; **, P <0,005. (C) Доли тимуса от Sin + / + ( n = 5) и Sin - / - E15 эмбрионов ( n = 6) были трансплантированы 1: 1 голым (Nu) реципиентам в трех независимых хирургических вмешательствах. группы. Примерно через 4 месяца после трансплантации срезы печени анализировали на воспалительные инфильтраты (стрелка) с H&E.5/6 и 0/5 голых реципиентов с нокаутом или диким типом долей тимуса, соответственно, дали положительный результат на инфильтраты в печени. Штанга, 200 мкм.

Аналогичные результаты были получены, когда обработанные 2-дезоксигуанозином E15 Sin - / - или доли тимуса дикого типа были трансплантированы под капсулу почки голых мышей. В частности, трансплантация тимуса Sin - / - привела к увеличению общего количества Т-лимфоцитов CD3 + в селезенке и лимфатических узлах (рис. S2A) и к увеличению воспалительных инфильтратов в печени и почках мышей-реципиентов голых мышей по сравнению с с элементами управления (и рис.S2 B). Эти результаты, вместе с паттерном экспрессии Sin и данными, показывающими отсутствие заметных различий во внутренних сигнальных свойствах Sin - / - CD3 + Т-клеток по сравнению с контролем (проанализированы по пролиферации в ответ на активацию TCR [Donlin et al. al., 2005], уровни общего фосфотирозина, фосфорилирование PLC-γ, активация MAP-киназы и высвобождение внутриклеточного кальция [неопубликованные данные]), убедительно свидетельствуют о том, что отсутствие Sin в строме тимуса, а не в гематопоэтическом компартменте, способствует аутоиммунитету в Sin - / - мышей.

Дефицит Sin ведет к дефектной клональной делеции антиген-специфических Т-клеток

Результаты BM и переноса тимуса показали, что дисфункция стромы тимуса Sin - / - является причиной аутоиммунных симптомов. Таким образом, мы предположили, что продукция воспалительных инфильтратов и аутоантител у старых мышей Sin - / - может быть вызвана аномальным mTEC-опосредованным отрицательным отбором аутореактивных Т-клеток. Чтобы проверить эту гипотезу, мы скрестили животных Sin - / - с мышами OTII, которые экспрессируют трансгенный TCR Vα2Vβ5, специфичный для эпитопа в белке овальбумина (OVA 323-329 ) в контексте IA b (Barnden et al. al., 1994). Второй трансген, кодирующий мембраносвязанную форму OVA (mOVA) под контролем промотора инсулина крысы (RIP), который активен в mTECs, был скрещен с фоном Sin - / - / OTII (Kurts et al., 1996). Эти трансгенные линии ранее использовали, чтобы показать, что делеция клонотипических клеток нарушается в отсутствие регулятора транскрипции Aire (Anderson et al., 2005). Животные дикого типа и животные с нокаутом Sin генерировали аналогичные проценты OTII клонотипических CD4 + Т-клеток в отсутствие родственного антигена OVA ().Драматическая делеция клонотипических Т-клеток в тимусе наблюдалась у животных RIP-mOVA / OTII дикого типа (). Напротив, у двойных трансгенных мышей на фоне Sin - / - было значительно больше клонотипических клеток (), что свидетельствует о дефектной клональной делеции антиген-специфических Т-клеток в отсутствие Sin. Значительное спасение клонотипических клеток было также очевидно в селезенке животных с нокаутом RIP-mOVA / OTII по сравнению с контролем (). Аналогичным образом, мыши Sin - / - RIP-mOVA / OTI демонстрировали повышенное количество клонотипических клеток CD4 - CD8 + в тимусе (неопубликованные данные), что позволяет предположить, что Sin контролирует отрицательный отбор обоих CD4 + . и линии клеток CD8 + с помощью mTEC.

Дефектный отрицательный отбор антиген-специфических Т-клеток в отсутствие экспрессии Sin. Трансгенных мышей (A – C) OTII скрещивали с фоном Sin - / - в отсутствие (A) или в присутствии (B) родственного антигена в форме трансгенных мышей, экспрессирующих mOVA с промотора инсулина крысы. Суспензии клеток тимуса и селезенки окрашивали антителами против CD4, CD8 и трансгенных цепей Vβ5, Vα2 TCR. Процент и общее количество клонотипических клеток определяли с помощью проточной цитометрии (C).Тест Стьюдента t использовали для сравнения мышей OTII / RIP-mOVA дикого типа и мышей с нокаутом Sin. ***, P <0,00005; **, P <0,01; *, P <0,05. Гистограммы представляют собой среднее значение + SE. n ≥ 5 животных в группе по крайней мере из трех независимых экспериментов.

В дополнение к животной модели OTII и поскольку мы обнаружили низкие уровни экспрессии Sin в cTEC (), мы использовали трансгенную систему HY TCR, чтобы определить, было ли влияние делеции Sin на отрицательный отбор тимоцитов строго ограничено медуллярным ТИК.Мыши H-Y экспрессируют MHC-ограниченные цепи α и β TCR класса I, которые распознают мужской антиген H-Y, представленный молекулами H-2D b MHC класса I на кортикальных эпителиальных клетках. У самок животных H-Y происходит беспрепятственный отбор клонотипических клеток CD4 - CD8 + . У самцов мышей экспрессия пептида HY в популяции cTEC приводит к высокоаффинному взаимодействию и элиминации большинства клонотипических тимоцитов от двойного отрицательного (CD4 - CD8 - ) до двойного положительного (CD4 + CD8 + ) переход (Kisielow et al., 1988). Как дикого типа, так и Sin - / - самки трансгенных мышей H-Y демонстрировали нормальную продукцию клонотипических Т-клеток, что свидетельствует о нормальном положительном отборе у этих животных (фиг. S3, A и B). Удаление трансгенных клеток HY у самцов Sin - / - животных также было нормальным по сравнению с контрольными самцами HY дикого типа (рис. S3, A и B), что позволяет предположить, что Sin не влияет на раннюю делецию тимоцитов в этой трансгенной модели, и что роль Sin ограничена более поздними стадиями негативного отбора тимоцитов, который происходит в мозговом веществе.

Отсутствие экспрессии Sin в mTEC не влияет на развитие и функцию T reg-клеток

Помимо клональной элиминации аутореактивных T-клеток, mTEC, экспрессирующие аутоантиген, также поддерживают развитие CD4 + CD25 + T reg клетки (Jordan et al., 2001; Apostolou et al., 2002; Aschenbrenner et al., 2007). Таким образом, мы исследовали, мешает ли удаление Sin, помимо дефектного отрицательного отбора антиген-специфических Т-клеток, развитию и / или функции T reg-клеток.С этой целью Т-клетки лимфатических узлов окрашивали антителами против CD25 и Foxp3, фактора транскрипции, специфически экспрессируемого в T-reg-клетках, и процентное содержание CD4 + CD25 + Т-клеток FoxP3 + определяли с помощью проточной цитометрии ( Brunkow et al., 2001). Мыши дикого типа и Sin - / - показали одинаковое процентное соотношение и общее количество CD4 + CD25 + Foxp3 + Т-клеток в лимфатическом узле, что позволяет предположить, что экспрессия Sin не требуется для продукции reg-клеток ( ).

Нормальное развитие и функция рег Т-клеток, выделенных от Sin - / - животных. (A) Процент T reg-клеток и общее количество в лимфатических узлах (LN) мышей дикого типа и Sin - / - анализировали путем стробирования на CD4 + CD25 + FoxP3 + клеток. Гистограммы представляют собой среднее значение + SE. n = 5 в двух независимых экспериментах. (B) 7,5 × 10 5 CD4 + CD25 + Т-клетки от доноров дикого типа или Sin - / - вводили мышам дикого типа, и колит индуцировали с помощью 3% DSS.График показывает среднее значение + SE. PBS ( n = 9), дикого типа ( n = 6) или Sin - / - CD4 + CD25 + Т-клетки ( n = 11) по крайней мере в трех независимых экспериментах . Для определения основных эффектов (P <0,05) между группами инъекций использовали повторный дисперсионный анализ, а для сравнения групп инъекций по дням использовали post hoc Fisher PLSD. Звездочки указывают на значительные различия (P <0,001) на 7–9-й день между каждой группой инъекций и контролем PBS.(C) 4 × 10 5 CD4 + CD25 - эффекторные Т-клетки с или без 10 5 дикого типа или Sin - / - CD4 + CD25 + Т-рег клетки были введены в Rag1 - / - получателей. Процент потери или увеличения веса в B и C определяли, приписывая вес в день 1 как 100% и вычисляя процент общей массы тела, измеренный с помощью дневных (B) или недельных (C) интервалов. Один из восьми репрезентативных экспериментов показан в C.

Супрессорную функцию Sin - / - T reg-клеток тестировали на двух различных моделях колита in vivo.В первом подходе колит вызывали химическим путем у мышей дикого типа путем введения декстрансульфата натрия (DSS) в питьевую воду. Введение DSS разрушает барьер эпителиальных клеток слизистой оболочки толстой кишки, что приводит к бактериальной инвазии и активации врожденных и адаптивных иммунных ответов (Heller et al., 2002). Инъекция CD4 + CD25 + T reg-клеток животным до лечения DSS подавляет симптомы колита (Huber et al., 2004). CD4 + CD25 + T reg клетки, выделенные от животных дикого типа или Sin - / - , инъецировали в брюшную полость мышей дикого типа, которым впоследствии давали DSS в течение 9 дней.Животные, которым вводили PBS, потеряли> 20% веса своего тела, что характерно для тяжелого воспаления кишечника, и проявили видимые признаки заболевания (). Напротив, мыши, которым вводили Sin - / - CD4 + CD25 + Т-клетки дикого типа, сохраняли свой вес и не проявляли никаких признаков заболевания (). Таким образом, reg-клетки дикого типа и Sin-нокауты были одинаково эффективны в подавлении DSS-индуцированного колита, что позволяет предположить, что функция T reg-клеток является нормальной в отсутствие Sin.

Во втором подходе мы использовали мышиную модель воспалительного заболевания кишечника (ВЗК) у иммунодефицитных мышей Rag1 - / - для тестирования супрессорной функции Sin - / - T reg клеток. Инъекция эффекторных клеток CD4 + CD25 - животным Rag - / - вызывает болезнь истощения, связанную с прогрессирующей потерей веса и воспалением толстой кишки, тогда как совместная инъекция супрессорных CD4 + CD25 + T reg клеток предотвращает это. болезнь (Powrie et al., 1996). CD4 + CD25 + и CD4 + CD25 - Популяции Т-клеток от животных дикого типа и животных Sin - / - были отсортированы и внутривенно перенесены реципиентам Rag1 - / - в указанных комбинациях ( ). Rag1 - / - мышей, восстановленных с использованием только Т-клеток дикого типа или Sin - / - CD4 + CD25 -, проявляли болезнь истощения, как и ожидалось, тогда как котрансфер дикого типа или нокаут CD4 + CD25 + Т-клетки предотвратили потерю веса ().Хотя в показанном эксперименте () перенос Sin - / - CD4 + CD25 - эффекторных Т-клеток реципиентам Rag1 - / - привел к более серьезной потере веса, чем эффекторные клетки дикого типа, это различие не соответствовал восьми проведенным экспериментам. Таким образом, результаты обоих экспериментов по индукции колита предполагают, что супрессорная функция in vivo T reg-клеток Sin - / - не нарушена и что Sin не играет очевидной роли в развитии или функции этих клеток.

Дефицит Sin в строме тимуса коррелирует с измененной структурой костного мозга и уменьшенным количеством UEA

+ MHCII hi Aire + mTECs

Учитывая экспрессию Sin в mTEC и дефектный mTEC-опосредованный отрицательный отбор в отсутствие of Sin, мы исследовали, влияет ли устранение экспрессии Sin на развитие мозгового вещества тимуса. Предыдущие эксперименты показали, что небольшие костные островки у новорожденных мышей расширяются и сливаются, образуя сплоченную центрально расположенную мозговую область в течение первых недель возраста (Rodewald et al., 2001; Ян и др., 2006). Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) срезов тимуса, залитых парафином, выявило небольшие костномозговые островки у новорожденных животных дикого типа и животных Sin - / - (, вверху), которые разрослись и слились в центрально расположенных структурах через неделю после рождения в дикой природе. введите мышки (, слева посередине). Напротив, дефицит Sin коррелировал с диспергированными / дезорганизованными областями мозгового вещества, которые сохранялись у взрослых мышей с нокаутом (справа, в середине и внизу). Гистологическое исследование пяти срезов вилочковой железы на расстоянии 200 мкм выявило уменьшение общей площади костного мозга и большее количество островков костного мозга в тимусе взрослых животных Sin - / - по сравнению с контролем ().

Дефицит Sin приводит к неорганизованной архитектуре костного мозга. (A) Тимус выделяли от животных дикого типа и животных Sin - / - в разном возрасте (NB, новорожденные; W, неделя), а срезы долей тимуса, окрашенные H&E, анализировали с помощью световой микроскопии. Штанга, 200 мкм. (B) Общая площадь костного мозга и количество островков были рассчитаны для 5 срезов, охватывающих срез тимуса размером 200 мкм от животных дикого типа в возрасте 5–6 недель и животных Sin - / - . Для A и B, по крайней мере, пять мышей в группе были проанализированы в трех отдельных экспериментальных группах.Среднее + SE отображается на графиках. *, P <0,05. (C и D) Замороженные срезы тимуса мышей дикого типа и мышей Sin - / - окрашивали UEA (красный, слева) или MHCII (красный, справа), чтобы выявить мозговую область, и совместно окрашивали анти-Aire ( зеленый). Изображения представляют четыре независимых эксперимента. Пруток, 30 мкм.

Медуллярные ТЭК содержат концевые L-фукозильные остатки, которые связываются с растительным лектином ulex europaeus agglutinin-1 (UEA-1; Farr and Anderson, 1985). Функциональное созревание mTEC UEA + отмечено повышением регуляции молекул MHCII и регулятора транскрипции Aire (Tykocinski et al., 2008). Срезы тимуса из тех же временных точек, изображенных в окрашенных UEA-1, или тимуса взрослых, окрашенных медуллярными и кортикальными маркерами Кератин 5 и Кератин 8, соответственно, выявили аналогичные мозговые структуры, как отмечено с помощью H&E (рис. S4, A и B). . Срезы тимуса взрослых животных, окрашенные UEA-1 или антителами против MHCII и Aire, показали пониженное окрашивание для UEA + MHCII + Aire + mTEC в Sin - / - тими по сравнению с контролем ().В совокупности эти результаты предполагают, что дефицит Sin ведет к дезорганизованной архитектуре костного мозга и, возможно, к снижению числа функционально зрелых субпопуляций UEA + mTEC.

Чтобы определить, коррелирует ли кажущееся медуллярное снижение Sin - / - тимуса с количественным снижением мТЕС UEA + , были диспергированы отдельные тимус и общее количество ТЕС UEA + было определено с помощью проточной цитометрии. Действительно, мыши Sin - / - продемонстрировали значительное снижение общего числа mTEC UEA + MHCII + , тогда как в популяции UEA - MHCII + cTEC не наблюдалось различий по сравнению с дикими мышами. типа животные ().В компартменте MHCII mTEC UEA + , CD80 / 86 и Aire используются для различения функционально отличной популяции. Например, недавние исследования показывают, что mTEC CD80 / MHCII lo Aire - дают начало клеткам CD80 / MHCII hi Aire + , которые рассматриваются как функционально зрелые mTEC (Gäbler et al., 2007; Gray et al. ., 2007; Росси и др., 2007б). Дефицит Sin привел к значительному снижению количества клеток UEA + MHCII hi mTEC, тогда как умеренное снижение количества клеток UEA + MHCII lo не было статистически значимым ().Сходные результаты наблюдались, когда суспензии стромальных клеток были окрашены и mTEC были идентифицированы как клетки LY51 lo G8.8 + MHCII + (фиг. S5, A и B). Хотя популяция mTEC LY51 lo G8.8 + MHCII hi была значительно снижена в отсутствие экспрессии Sin (рис. S5 C, левый график), LY51 lo G8.8 + MHCII lo mTEC (рис. S5 C, правый график) и LY51 hi G8.8 + MHCII + популяции cTEC (рис.S5 D) не были затронуты.

Sin - / - животных уменьшили общее количество UEA + MHCII hi mTECs. (A) Отдельные тимусы мышей дикого типа и мышей с нокаутом анализировали на общее количество CD45 - UEA + MHCII + mTEC (прямоугольные ворота) и CD45 - UEA - MHCII + cTEC (круглые ворота) методом проточной цитометрии. (B) Общее количество mTEC CD45 - UEA + MHCII hi и CD45 - UEA + MHCII lo определяли из тех же клеточных препаратов, что и в A.Графики показывают среднее значение + SE. *, P <0,01; **, P <0,005. По крайней мере, шесть животных были проанализированы на каждый генотип в двух независимых экспериментах.

В отдельных экспериментах и ​​с учетом уменьшенного окрашивания Aire в срезах тимуса, наблюдаемом в, мы исследовали влияние дефицита Sin на количество функционально зрелых мТЕС, экспрессирующих Aire. Отсутствие экспрессии Sin привело к уменьшению количества клеток UEA + MHCII + Aire + (), предполагая, что Sin необходим для нормального созревания mTEC.В соответствии со снижением зрелых мТЕС, количественный анализ ПЦР (кПЦР) с использованием мРНК, полученной из препаратов общих ТЕС, выявил пониженные уровни MHCII, CD80 и Aire в Sin - / - ТЕС по сравнению с контролями дикого типа (левый график) . Эти анализы также выявили снижение экспрессии большинства, но не всех тестируемых Aire-зависимых и Aire-независимых антигенов (). Напротив, дефицит Sin не влияет на экспрессию хемокина CCL21 или cTEC Cathepsin-L- и mTEC cathepsin-S-специфических протеаз (, правый график).Дальнейшие анализы кПЦР с использованием мРНК из отсортированных зрелых UEA + MHCII hi популяций mTEC, полученных из возрастных групп животных дикого типа или животных с нокаутом Sin, не выявили значительного влияния дефицита Sin на MHCII, CD80, Aire и репрезентативные TRA. выражение (). Эти данные предполагают, что снижение экспрессии поверхностных маркеров и TRA, наблюдаемое во всей фракции TEC, было вызвано уменьшением количества зрелых mTEC, а не прямым влиянием дефицита Sin на экспрессию TRA.В совокупности эксперименты, представленные выше, показывают, что дефицит Sin приводит к потере когезионных медуллярных областей, дефектному созреванию mTEC и, как следствие, снижению экспрессии TRA. Эти эффекты, возможно, являются причиной дефектного отрицательного отбора антиген-специфических Т-клеток и развития аутоиммунитета, наблюдаемого у мышей с нокаутом Sin.

Уменьшение количества клеток UEA + MHCII + Aire + коррелирует со снижением экспрессии TRA в тимусе Sin - / - . (A) Суспензии стромальных клеток из отдельных тимусов окрашивали, как описано выше, с добавлением Aire-специфических антител, и мТЕС UEA + MHCII + Aire + определяли с помощью проточной цитометрии. Гистограмма представляет собой среднее значение по крайней мере шести мышей на каждый генотип из двух независимых испытаний + SE. **, P <0,00005. (B и C) Отсортированные целые фракции, обогащенные ТЕС, от отдельных тимусов дикого типа и Sin - / - , были проанализированы с помощью кПЦР для указанных генов с использованием специфических праймеров.Графики показывают среднее значение по крайней мере двух индивидуальных экспериментов, по крайней мере, с четырьмя животными на каждый генотип + SE. (D) UEA + MHCII hi популяции mTEC, отсортированные из объединенных групп дикого типа или нокаута тимуса ( n ≥ 5 каждая), анализировали на экспрессию указанных генов с помощью qPCR. Графики показывают среднее значение двух независимых выборок на один прогон генотипа в четырех повторностях + SE и представляют два эксперимента. Анализ относительной экспрессии гена был нормализован до GAPDH с использованием метода 2 -ΔΔCt , и образец дикого типа был установлен на 1 для каждого тестируемого гена.Акронимы генов: I-FABP, белок, связывающий жирные кислоты кишечника; Spt1, белок 1 слюны; nAchr-1 , холинергический рецептор, никотиновый, α-полипептид 1; CRP , С-реактивный белок; FABP9 , белок, связывающий жирные кислоты 9; GAD67, декарбоксилаза глутаминовой кислоты. *, P <0,05.

Sin регулирует опосредованную фактором роста экспансию mTEC

Учитывая сниженное количество зрелых mTECs у мышей с нокаутом Sin, мы предположили, что Sin регулирует устойчивое состояние и / или индуцированную фактором роста пролиферацию mTECs во взрослой вилочковой железе.Чтобы проверить эту гипотезу, ТЕС, очищенные от мышей дикого типа и мышей Sin - / - , окрашивали антителами к CD45 и MHCII, UEA-1 и антителами против маркера пролиферации Ki67. Эти эксперименты выявили значительное снижение процентного содержания и общего количества пролиферирующих мТЕС + MHCII + Ki67 + у животных с нокаутом по сравнению с контрольными животными (). Ранее описанный быстрый оборот популяций mTEC во взрослой вилочковой железе (Gray et al., 2007) побудили исследовать кумулятивное стационарное расширение популяций mTEC в отсутствие Sin. Как и в экспериментах по маркировке Ki67, у мышей, которым вводили маркер пролиферации BrdU при непрерывном воздействии BrdU в течение 3 дней, наблюдалось значительно меньшее процентное содержание и общее количество мТЕС UEA + MHCII + BrdU + (рис. S6). Напротив, не было значительных различий в UEA - MHCII + Ki67 + или UEA - MHCII + BrdU + cTEC у мышей с нокаутом Sin по сравнению с контрольными мышами (и рис.S6). В совокупности эти результаты предполагают, что Sin необходим для поддержания нормальной скорости пролиферации mTEC и гомеостаза mTEC во взрослом тимусе.

Пониженная скорость пролиферации и блокирование индуцированной факторами роста экспансии UEA + mTECs в отсутствие экспрессии Sin. (A) Процентное содержание и общее количество клеток CD45 - UEA + MHCII + Ki67 + клеток определяли методом проточной цитометрии. Гистограмма представляет собой среднее значение по меньшей мере восьми мышей на каждый генотип в двух независимых экспериментах + SE.*, P <0,05. (B – E) ТЕС, очищенные из отдельных тимусов мышей дикого типа, инъецированных PBS или KGF, или мышей Sin - / - , анализировали с помощью проточной цитометрии на общее количество клеток в разных воротах, как показано. Для выявления эффекта по лечению и эффекта по генотипу в B – E, где P <0,05, использовался дисперсионный анализ, за ​​которым следовал post ho c Fisher PLSD, используемый для групповых сравнений. # сравнивает лечение в пределах одного и того же генотипа, а * сравнивает лечение между генотипами дикого типа и нокаутом.**, P <0,001; ***, P ≤ 0,0005; ##, P <0,001; ###, P <0,0005. (E) **, P <0,005; #, P <0,005 Столбцы представляют собой среднее значение + SE. В каждой экспериментальной группе было использовано 4–7 мышей из двух независимых экспериментов. (F) ОТ-ПЦР для FGFR2IIIb проводили на отсортированных очищенных мТЕС. Образцы были нормализованы на основе относительных уровней β-актина. Показан представитель двух экспериментов.

KGF (также известный как фактор роста фибробластов-7) представляет собой растворимый фактор, регулирующий митогенез и дифференцировку эпителиальных клеток (Finch and Rubin, 2004).KGF проявляет свои эффекты путем связывания со сплайсинговым вариантом семейства рецепторов фактора роста фибробластов, рецептором FGFR2IIIb, экспрессируемым в кератиноцитах, а также в TEC (auf demKeller et al., 2004; Rossi et al., 2007a). У взрослых тимусов KGF экспрессируется мезенхимальными клетками и тимоцитами и контролирует постнатальное развитие тимуса (Alpdogan et al., 2006; Rossi et al., 2007a). Введение KGF in vivo приводит к расширению гипопластического медуллярного компартмента в зачатке тимуса мышей Rag - / - (Erickson et al., 2002), тогда как инъекция KGF взрослым мышам дикого типа индуцирует временную экспансию незрелых mTECs и способствует их дифференцировке в зрелые mTECs (Rossi et al., 2007a). Эти наблюдения, а также уменьшенное количество циклических mTECs у мышей с нокаутом Sin побудили нас изучить, играет ли Sin роль в KGF-опосредованной экспансии mTECs. Введение KGF привело к заметному увеличению общего количества клеток UEA + MHCII + у животных дикого типа по сравнению с контрольными животными, которым вводили носитель ().Поразительно, но Sin требовался для расширения mTEC UEA + MHCII + в ответ на инъекцию KGF (). Дальнейший анализ субпопуляций mTEC UEA + MHCII hi и UEA + MHCII lo показал, что введение KGF индуцировало рост обеих субпопуляций в компартменте UEA + у животных дикого типа (). Это расширение было заблокировано у мышей Sin - / - , что подтверждает роль Sin в росте клеток-предшественников и созревании mTECs.Отсутствие экспансии mTEC у мышей Sin - / - не было связано со снижением уровней рецепторов, поскольку экспрессия FGFR2IIIb была аналогичной или более высокой в ​​mTEC Sin - / - по сравнению с контролем ().

Ранее было показано, что введение KGF способствует экспансии cTECs, предположительно за счет стимуляции минорной субпопуляции Keratin-18 + cTECs, которые экспрессируют FGFR2IIIb (Rossi et al., 2007a). В соответствии с этим мы обнаружили заметное увеличение общего количества UEA - MHCII + cTECs у животных дикого типа, получавших KGF ().Удивительно, учитывая почти неопределяемую экспрессию Sin в коре и cTEC (), нормальный положительный отбор тимоцитов у мышей Sin - / - (рис. S3) и отсутствие влияния дефицита Sin на устойчивое состояние. Числа cTEC () или пролиферация cTEC (и фиг. S5), KGF-опосредованная экспансия cTEC заметно подавлялась в отсутствие экспрессии Sin (). Этот эффект может быть вызван KGF-опосредованной экспансией популяции предшественников, которая предшествует дифференцировке клонов как mTEC, так и cTEC, или временным повышением экспрессии Sin во время экспансии cTEC.Вместе эти данные показывают, что Sin является важным медиатором KGF-индуцированного расширения популяций TEC, и предполагают, что Sin регулирует опосредованное факторами роста созревание mTECs из функционально незрелых предшественников.

ОБСУЖДЕНИЕ

Ранее мы показали, что дефицит Sin приводит к развитию воспалительных инфильтратов против множества тканей у старых животных (Donlin et al., 2005). В этом исследовании мы изучили механизм, посредством которого дефицит Sin приводит к воспалению и аутоиммунитету.Наши данные показывают, что Sin функционирует в строме тимуса, регулируя созревание mTECs и, следовательно, их способность устанавливать центральную толерантность. Дефицит Sin привел к рассредоточенной костномозговой архитектуре и уменьшению количества UEA + MHCII hi Aire + медуллярных эпителиальных клеток. Экспрессия Aire в этой клеточной популяции совпадает с экспрессией разнообразного набора TRA, представленных молекулами MHC на поверхности mTEC, чтобы опосредовать отбор развивающихся Т-клеток.Таким образом, считается, что клетки UEA + MHCII hi Aire + функционируют как терминально дифференцированные mTEC, необходимые для эффективного отрицательного отбора тимоцитов, которые экспрессируют потенциально аутореактивные TCR. Наши результаты, демонстрирующие снижение количества зрелых mTEC и экспрессии TRA, сопровождающееся неэффективным mTEC-опосредованным элиминацией антиген-специфических Т-клеток у мышей Sin - / - , показывают Sin как новый регулятор созревания mTEC и опосредованное mTEC установление центральной толерантности. .

Уменьшение общего количества UEA + MHCII hi Aire + mTEC, снижение экспрессии TRA и / или дефектная архитектура мозгового вещества тимуса - все это может способствовать дефектному отрицательному отбору у мышей Sin - / - . Поскольку отдельные аутоантигены экспрессируются только в небольшой фракции общих mTEC, состоящих из клеток CD80 hi (Derbinski et al., 2008), было предложено, что обширные взаимодействия между mTEC и тимоцитами необходимы для установления центральной толерантности ( Kyewski, Klein, 2006; Mathis and Benoist, 2004).Когда была проанализирована экспрессия TRA во всей популяции TEC, мыши Sin - / - показали заметно сниженную Aire-зависимую и -независимую экспрессию тканеспецифического антигена, вызванную уменьшением популяции зрелых mTEC. Следовательно, уменьшенное количество mTECs у мышей Sin - / - , сопровождающееся заметно сниженной Aire-зависимой и -независимой экспрессией TRA, может приводить к снижению вероятности взаимодействия TCR / MHC – mTEC, влияя на эффективность негативной селекции. Дисперсная мозговая структура, отмеченная у мышей Sin - / - , также может снижать эффективность отрицательного отбора, приводя к негерметичной центральной толерантности.Подобно животным Sin - / - , мыши LTβR - / - демонстрируют диспергированную мозговую архитектуру и сниженное общее количество mTEC. Кроме того, экспрессия TRA в популяции зрелых mTEC является нормальной, когда либо LTβR, либо Sin удаляются, но у этих животных развивается возрастной аутоиммунитет (Boehm et al., 2003). Т.о., дефекты в количестве и / или распределении зрелых mTECs, задокументированные в тимусе Sin - / - , могут значительно нарушить взаимодействие этих клеток со созревающими тимоцитами, приводя к дефектам центральной толерантности.

Дефицит Sin привел к значительному сокращению цикличности клеток UEA + MHCII + в стационарных условиях (показано сниженным окрашиванием Ki67 и включением BrdU), что позволяет предположить, что Sin участвует в сигнальных путях, которые влияют на пролиферацию этих клеток. . Для дальнейшего изучения функции Sin в развитии mTEC мы сосредоточили внимание на факторе роста KGF и его рецепторе FGFR2IIIb, поскольку было показано, что эта пара лиганд / рецептор регулирует митогенез и дифференцировку эпителиальных клеток (Finch and Rubin, 2004).Действительно, введение KGF in vivo привело к экспансии mTEC UEA + и cTEC UEA - у мышей дикого типа, которая полностью блокировалась в тимусе Sin - / - . Ингибирование экспансии cTEC в тимусе Sin - / - было неожиданным, учитывая низкую экспрессию Sin в cTEC дикого типа и наблюдение, что дефицит Sin не оказывает заметного воздействия на количество и пролиферацию cTEC в стационарных условиях. Возможно, что экспрессия Sin активируется в cTEC в ответ на лечение KGF или что Sin экспрессируется в популяции предшественников, которая дает начало кортикальным и мозговым эпителиальным клеткам.В будущих экспериментах будет важно изучить онтогенез различных популяций TEC с использованием дополнительных поверхностных маркеров в присутствии или отсутствии KGF в тимусе Sin - / - . Это может помочь нам идентифицировать бипотентные предшественники ТЕС и привести к лучшему пониманию развития различных клонов эпителиальных клеток тимуса и роли Sin в этом процессе.

В настоящее время неясно, как Sin может регулировать передачу сигналов ниже рецептора KGF FGFR2IIIb. Семейство рецепторов FGF состоит из тирозинкиназ, которые регулируют выживаемость клеток и пролиферацию эпителиальных клеток (Finch and Rubin, 2004; de Giorgi et al., 2007). Связывание лиганда фактора роста с FGFR вызывает димеризацию рецептора и трансфосфорилирование, опосредованное тирозинкиназой. Это приводит к активации фосфоинозитид-3 киназы и Akt, а также к активации регулируемых внеклеточными сигналами киназ 1 и 2 (ERK-1/2), двух путей, которые контролируют выживание и пролиферацию клеток, соответственно. Киназы семейства Src также участвуют в передаче сигналов ниже рецепторов FGF путем рекрутирования и фосфорилирования адаптерных белков, участвующих в активации Akt и ERK-1/2 (Bromann et al., 2004; Финч и Рубин, 2004). Поскольку Sin был выделен и идентифицирован как белок, взаимодействующий с киназой семейства Src (Ishino et al., 1995; Alexandropoulos and Baltimore, 1996), мы предполагаем, что активация KGF FGFR2IIIb может вызывать активацию киназ Src, в свою очередь, направляя Sin для фосфорилирования, и создание сайтов связывания для потенциальных промежуточных продуктов передачи сигналов, таких как FRS1a, b и Grb2 / Sos. Было показано, что эти промежуточные продукты передачи сигналов модулируют митогенную активацию посредством каскада передачи сигналов Ras-Erk1 / 2 (Gotoh, 2008).Следовательно, отсутствие Sin может вызывать нарушение сигнальных комплексов и аберрантную передачу сигналов, нарушая митогенную передачу сигналов и подавляя пролиферацию. Попыткам биохимического анализа роли Sin в KGF-опосредованной экспансии mTEC препятствовали технические ограничения, вызванные низким количеством mTEC, присутствующих в каждом тимусе. Кроме того, время, необходимое для выделения mTEC, оказалось недопустимым при анализе событий временного фосфорилирования в ответ на активацию FGFR2 в интактном тимусе.Следовательно, необходимо будет разработать новые методы биохимического анализа для изучения роли Sin ниже рецептора FGFR2IIIb в mTEC, чтобы полностью понять адапторную функцию Sin в митогенезе и конечную роль Sin в установлении центральной толерантности через его влияние на физиология mTEC.

Наконец, хотя мы показали, что дефицит Sin снижает количество mTEC, продукция mTECs не была полностью заблокирована у мышей Sin - / - , что указывает на то, что множественные сигнальные пути вносят вклад в дифференцировку mTEC.Недавно два члена суперсемейства TNF и их рецепторы, CD40L / CD40 и RANKL / RANK, были вовлечены в регуляцию развития mTEC кооперативным, зависимым от стадии развития способом (Akiyama et al., 2008; Hikosaka et al., 2008; Irla et al., 2008). В одном из этих исследований RANKL, как было показано, способствует увеличению популяции зрелых mTEC посредством прямого межклеточного контакта и опосредованных MHCII-TCR взаимодействий между положительно отобранными тимоцитами CD4 + и mTECs (Irla et al., 2008).Поскольку популяции предшественников mTEC экспрессируют низкие уровни MHCII, точная природа сигналов, контролирующих созревание mTEC от популяций предшественников MHCII lo , остается неясной. В наших исследованиях мы обнаружили, что KGF оказывал сильное влияние на расширение mTEC UEA + MHCII lo , что соответствовало увеличению числа mTEC UEA + MHCII hi . Это наблюдение предполагает, что KGF (и, возможно, другие растворимые факторы) могут оказывать митогенный эффект на более ранних стадиях развития mTEC, влияя на отдельные клеточные субпопуляции независимо от аутоантиген-зависимых взаимодействий и передачи сигналов, опосредованной суперсемейством TNF.Как следствие, Sin может регулировать отдельные сигнальные пути на определенных стадиях дифференцировки и развития mTEC, влияя на пролиферацию, выживаемость и / или дифференцировку mTEC. Будущие исследования будут сосредоточены на потенциальной роли Sin в других сигнальных путях, включая те, которые регулируются членами суперсемейства TNF, чтобы лучше понять роль Sin в дифференцировке mTEC.

Таким образом, наши исследования предоставляют новое понимание роли сигнального белка Sin в физиологии mTEC и центральной толерантности и имеют важное значение для терапевтических вмешательств с использованием KGF.В доклинических исследованиях аллогенной трансплантации BM было показано, что системное введение рекомбинантного человеческого KGF оказывает положительный эффект, предотвращая реакцию трансплантат против хозяина (GVHD; Rossi et al., 2002; Finch and Rubin, 2004; Bruinsma et al., 2007; Kelly et al., 2008; Krenger, Holländer, 2008). Воздействие экзогенного KGF сохраняет архитектурную организацию ТЕС и лимфоидную клеточность и приводит к более эффективному восстановлению периферического компартмента Т-клеток у предварительно кондиционированных реципиентов аллогенных трансплантатов (Rossi et al., 2002; Альпдоган и др., 2006; Seggewiss et al., 2007). На мышиных моделях острой GVHD инъекция KGF подавляет повреждение тимуса независимо от аллореактивных донорских Т-клеток в тимусе и продолжающейся GVHD в других органах-мишенях, таких как кожа, печень и слизистая оболочка кишечника (Rossi et al., 2002). Введение KGF также предотвращает появление репертуара аутореактивных Т-клеток, которые способствуют развитию экспериментальной хронической GVHD (Chen et al., 2007). Механизмы, посредством которых KGF оказывает благоприятное воздействие, в настоящее время неясны.Понимание роли, которую Sin играет в молекулярных механизмах передачи сигналов и экспансии mTEC, даст механистическое понимание способности KGF увеличивать продукцию тимуса. Это, в свою очередь, может помочь оценить потенциальное использование этого фактора в качестве терапевтического средства для лечения клинических осложнений, связанных с трансплантацией костного мозга и / или аутоиммунным заболеванием.

Рост Наташи Королевы. Основные правила диеты для похудения от Натальи Королевы. Какой размер груди у Наташи Королевой

Все женщины нашего мира стремятся выглядеть привлекательно, они постоянно примеряют на себе различные методики похудания, начиная от выполнения многочисленных диет и заканчивая хирургическими вмешательствами, чтобы поддерживать свою фигуру в стройной и подтянутой.Так что знаменитости в этом плане не исключение.

Они еще больше стараются поддерживать свое тело в соответствующей форме, так как постоянно находятся на виду у многочисленной массы поклонников и должны выглядеть просто отлично. Сегодня я расскажу о секретах похудения от Наташи Королевы.

Певица Наталья Королева никогда не отличалась худобой, внимание окружающих часто привлекала ее «округлость» и «выпуклость». Но она признается, что ей, как и многим другим прекрасным представительницам секса, приходится постоянно следить за своей фигурой.Когда ситуация начинает выходить из-под контроля, у актрисы всегда есть чудесный способ избавиться от лишних килограммов.

Она тоже не скрывала своего питания от публики. Но, на этот раз подробно описаны несколько способов похудания, которые она применяла на протяжении разных периодов своей жизни.

Его рост 160 сантиметров, а вес 52 килограмма, но идеальной считается масса 49 - 50 кг. После рождения сына масса ее тела увеличилась на целых пятнадцать килограммов, но она сумела взять себя в руки и почти через год вернулась в свое обычное состояние.

А теперь просто не узнать, она выглядела и вернулась в прежний вид, снова стала стройной и очаровательной красавицей, притягивающей взгляды многих мужчин.

Завистники считают, что Наташа склонна к полноте, а избавиться от лишних килограммов ей удалось только благодаря вмешательству пластических хирургов. Якобы она перенесла много операций, вплоть до липосакции, чтобы вернуть былую форму. Певица решила раскрыть свой секрет, пытаясь поставить точку в распространении этих страшных слухов о ее похудании.

Занималась спортом, бегала ежедневно, но каких бы кардинальных результатов это не дало. Затем она обратилась за помощью к одному очень известному диетологу из Великобритании. Он прописал ей голодать три дня каждый месяц, после чего неделю на овощах, приготовленных на пару. Вроде бы ничего сложного, а результаты просто впечатляющие.

Есть еще один маленький секрет. Если отказаться от соли, то за три недели можно сбросить семь килограммов. Еда, конечно, становится ужасно свежей и безвкусной, особенно тяжело тратить первую неделю, но, но, когда вы действительно начнете сбрасывать лишний вес, вы поймете, что игра действительно стоит свеч.

Для поддержания веса лучше отказаться от приема мучных изделий и макаронных изделий. Предпочтение следует отдавать нежирным и отварным блюдам, приготовленным из различных овощей, морской рыбы и нежирного мяса.

Кушать нужно каждые три часа, а раз в неделю нужно придерживаться особого питания, которое включает только грейпфрут и белок вареного куриного яйца, и их нужно есть каждый час. Наталья так привыкла брать с собой емкости с этими продуктами, что постоянно возила с собой небольшую сумочку с этой провианте, как походную кухню.

Конечно, на одной диете «не выйду», поэтому необходимо регулярно тренироваться в фитнес-центрах или тренажерном зале, пользоваться услугами массажисток, чтобы поддерживать мышцы в тонусе. Поэтому актриса обращает внимание не только на советы специалистов диетологов, но и на активный образ жизни. Она регулярно занимается аэробикой, плаванием, выполняет бег трусцой и таким образом поддерживает форму своего тела.

Что касается процедур по разминанию тела, Наташа рекомендует всем обычный классический массаж, без использования каких-либо масел, так как он наиболее эффективен.Или проработка подкожно - жировой клетчатки с помощью вакуумных баллончиков, на которую тоже очень хорошо влияет общий тонус, но для живота подходит электромизм.

Художник убежден, что любая представительница прекрасного пола обладает достаточной волей и огромным желанием добиться вреда для своего тела. Главное - проявить усилие, а не бросить то, что вы начали делать. Пусть даже поначалу будет немного сложно, но надо греть мысль, что станешь стройным и привлекательным.

Она призналась, что очень любит украинские пельмени, и часто готовит это вкусное блюдо себе и своим домочадцам, и она знает, сколько времени потребуется провести в спортзале, выполняя упражнения, чтобы сжечь полученные калории, и не набирать лишний вес.Она очень неукоснительно за этим следит, и в спорте не дает себе пренебречь.

Заключение

Любая диета подразумевает, что жить ей придется - хоть какое-то, но определенное время, а что дальше, опять лишние килограммы? Поэтому нужно постоянно придерживаться здорового сбалансированного питания, чтобы всегда держать себя в форме, а не запускать свой организм.

Такая поза более правильная, чем повод «сесть» на какую-то диету. Лучше всего пересмотреть образ жизни и ограничить себя употреблением жирных и сладких продуктов в больших количествах и придерживаться этого на протяжении всей жизни.

Не стоит забывать и о спорте, ведь активный образ жизни способствует поддержанию нашего тела в тонусе и подтянутости.

Наташа Королева (настоящее имя - Наталья Владимировна Густ) - эстрадная певица, получившая всенародную любовь после выхода альбома «Желтые тюльпаны», записанного совместно с Игорем Николаевым. Среди ее песен такие хиты, как «маленькая страна», «немного лиц», «голубые лебеди» и десятки других лирических баллад и зажигательных танцевальных композиций.

Детство Наташи Королевы

Наташа Лечится, которая появилась на свет в Киеве, выросла в творческой семье: папа девочки был хормейстером, а мама, заслуженная артистка Украины Людмила, провела, дирижировала в хоровой капелле » Светок ».Старшая сестра Ирина была музыкально одаренным ребенком, позже выступала сольно под псевдонимом Руся. Неудивительно, что уже в 3 года Наташа дебютировала на сцене вместе с большим хором радио и телевидения Украины, исполнив песню «Крейсер Аврора».


В 7 лет девочка была записана в музыкальную школу по классу фортепиано и параллельно в хореографическую студию имени Григория Веревки. Важным событием, предопределившим судьбу малышки, стало знакомство с композитором Владимиром Фастряковым, взявшим одаренную Наташу под свое крыло.В 12 лет она начала выступать с его песнями («Куда ушел цирк», Мир чудес), так быстро стала звездой всех городских праздников: детских утренников, правительственных съездов, новогодних огней, городских дней - Каждое мероприятие сопровождалось чистым голосом Наташи. В 1987 году девушка стала дипломантом конкурса народной музыки «Золотая чартон».


В том же году Наташа впервые выступила на телевидении в программе «Shirious Circle» (своеобразный прототип шоу «Минута славы»), подарившей славу многим начинающим исполнителям. : Дмитрий Маликов, Леонид Агутин, группа «Секрет»... Но поистине знаковым событием для молодой певицы стало выступление на Конкурсе вокалистов в Евпатории. Призовых мест она не занимала, но внимание Эльвиры обратили на себя ассистенты известного московского телепродюсера Марты Могилевской. Наташа подарила женщине кассету со своим материалом, не зная, что в дальнейшем этот поступок сыграет огромную роль в ее жизни.

Наташа Королева в передаче "Широкий круг" (1986)

Какое-то время, но новости из Москвы не приходили, и Наташа продолжила строить карьеру на родной Украине, поступив в Киевское эстрадно-цирковое училище на по специальности «эстрадный вокал».Летом 1989 года она отправилась в тур по Штатам.


Девушка-рыбалка произвела сильное впечатление на американских учителей вокала, которые предложили ей стать ученицей школы Истраймс при престижном Рочестерском университете. Но Наташа, с которой к тому времени представители Марфы Могилевской, отвергли это заманчивое предложение и отправились покорять Москву.

Кастинг Наташа Королева

Карьерный расцвет Наташи Королевы. "Дельфин и Русалка"

Осенью 1989 года Могилевская посоветовала Игорю Николаеву, экс-аранжировщику Алле Пугачевой и находившейся в творческом ступоре начинающей певице найти подходящую девушку для совместной записи.Выбор пал на Наташу по двум причинам: во-первых, ее вокальные данные были на порядок выше остальных претенденток, а во-вторых, невысокая девушка прекрасно смотрелась рядом со 172-сантиметровой певицей.


При первой встрече Игорь довольно скептически отнесся к этой проверке: 16-летняя пухленькая «Хохлушка» не походила на эффектную поп-диву, к тому же она шарахалась от певицы, казавшейся ей королем и богом от Музыка. Тем не менее, послушав, он был приятно удивлен и вскоре написал для юного протеже песню «Yellow Tulips», которая стала заглавной песней одноименного альбома, увидевшего свет в 1990 году.На обложке пластинки была надпись: «Наташа Королева поет песни Игоря Николаева».


Наташа Густ превращалась в Королёва достаточно регулярно: псевдоним придумал Николаев, который был уверен, что публика не сможет вспомнить фамилию «Пуст», и звучит она как-то по-плебейски, другое дело - гордо, внушительно. "Королев".


После выхода альбома популярность Наташи Королевы стала буквально лгать. «Желтые тюльпаны» вывели девушку в финал главного музыкального конкурса страны - «Песни года».«Стадионы и концертные площадки были переполнены, любители дуба несли желтые тюльпаны с любимым артистом, а когда Наташа сломала небольшой тайм-аут, поклонники ее творчества попросили выставить на сцену развевающуюся девушку.

« Песня Год-1990 »: Наташа Королева -« Желтые тюльпаны »

В 1991 году Наташа Королева окончила эстрадно-цирковое училище. В 1992 году свет увидела пластинка« Дельфин и Русалка », а творческий тандем Игоря и Наташи ушел в грандиозный гастрольный тур по городам России с одноименной программой, за следующие три года мы покорили не только отдаленные уголки нашей Родины, но и крупные города США, Израиля и Германии.


В 1994 году певица уже выпустила сольный альбом под названием «Фанат» (музыка и тексты по-прежнему были заслугой Игоря Николаева). Однако ей пришлось завоевать доверие слушателей, которые не хотели верить в конец «дельфинов и русалок» и признать Наташу самостоятельной творческой единицей. Благодаря долгой упорной работе певице удалось вернуть публике локацию. Например, весной 1995 года она провела три благотворительных концерта на Дальнем Востоке в знак поддержки жертв разрушительного землетрясения на Сахалине.


В 1995 году вышел второй исключительно сольный альбом "confetti", состоящий из одиннадцати песен. Среди них композиция «Маленькая страна», вскоре покорившая эфир федерального телевидения и радио, превратившись в бессмертную шляпу для детей и взрослых, продолжающих верить в сказку.

Наташа Королева - «Маленькая страна»

В это время Наташа Королева дебютировала как актриса в мюзикле «Старые песни о главном», где сыграла дочь председателя и вместе с Ладой, Дэнс и Алена Апина исполнили песню «Вот кто с доски спустился».Спустя время он появился в следующих трех частях музыкального фильма.


В 1997 году Наташа утвердила роль Мальвины в мюзикле «Последние приключения Буратино» (примечательно, что Кристина Орбакайте сыграла самого Пиноккио. В перерывах между съемками Наталья работала над новым материалом, а в декабре того же года поклонники Королева желе приветствовали ее новый альбом - «Бриллианты слез». Многие слушатели отметили, что Наташа сменила и то, и другое. внешне и духовно - не девушка смотрела с обложек на покупателей, а дама вполне устроила.Лирика стала взрослой: «Девушка, мечтающая о большой любви» пришла на смену «маленькой стране».


С новой программой она отправилась в мировое турне, во время которого ей аплодировали залы Лондона, Нью-Йорка, Берлина и Афин, а в 1999 году она отправилась на гастроли вместе с Игорем Николаевым и Концертной программой » Самый родной ».


В 2000 году Королева задумался о своем профильном образовании и поступил на актерский факультет Хитиса, который закончил три года спустя

Новое творчество Наташи Королевы

В 2000 году союз Наташи Королевы и Игоря Николаева распался как в творческой сфере. сроки и личные.Певец проиграл, чтобы поддержать любимого человека и помочь талантливому композитору. Альбом «Сердце» вышел вскоре после разрыва без участия Николаева. Наталья помогала композитору Александру Коновалову и поэту-песеннику Владимиру Вулошу - написали табличку «был или нет».


В 2002 году певец выпустил сборник лучших хитов под названием «Осколки прошлого». В него вошли 14 хитов в стиле Queen, а также новая песня «Еще немного обдумано». «Что со мной сейчас случилось? И жизнь продолжается», - транслировали страну по каждому радио.

Наташа Королева - «Немного более продуманная»

Следующий альбом Наташа Королева записывала вместе со своим новым избранным партнером Сергеем Глушко, также известным под псевдонимом Тарзан. Табличка называлась «Хотите верьте, хотите нет». Спустя три года пара представила еще одну совместную работу под названием «Рай, где ты». Одноименный альбом вышел при поддержке Ювелирного Дома «Хрустальные мечты», лицом которого Наташа была с августа 2006 года.


В 2008 году Наташу пригласили показать шоу «Танцующие звезды», поставив певица в паре с хореографом Евгенией Папунаишвили.За короткое время королеве пришлось выучить множество сложных танцевальных пассов, но усилия были вознаграждены лишь третьими призами.

«Танцы со звездами»: Наташа Королева и Евгений Папунаишвили

А в следующем году Наташа представила свой писательский дебют, во многом автобиографический роман «Мужской стриптиз». На этом эксперименты певицы не прекратились: вскоре она стала владелицей салона красоты, который назывался - «Салон красоты Наташи Королевы».


Летом 2010 года певец вместе с Олегом Газмановым отправился на Фестиваль русской культуры в Германию.Все средства от продажи билетов на концерт звезд перечислялись в Благотворительный фонд Красного Креста. В ноябре 2013 года звезда сообщила о прекращении гастрольной деятельности.


С 2012 по 2014 год Наташа вместе с мамой Людмилой ходят в одно время, вела передачу «Пора обедать» на Первом канале. В рамках шоу сравнивали домашнюю кухню и кухню ресторана - обычные хозяйки бросили вызов профессиональным поварам.


Личная жизнь Наташи Королевы: между дельфином и стриптизером

Нельзя сказать, что между Наташей Королевой и Игорем Николаевым на первый взгляд открылась так называемая «естественная химия».Однако во время работы над программой «Дельфин и Русалка» мужчина проникся к девушке симпатией, которая каждый день присоединялась, превращаясь в нечто более интимное, вдохновляла его на создание мелодичной, немного грустной баллады.


Знакомые Наташи заметили, что, хотя он отчаянно отрицал это, он тоже влюбился в Николаева: его рот зацепили открытым ртом, скопировали жесты и речевую ману. Они стали жить вместе, но воспитанная в строгости Наташа сразу поставила певицу перед фактом: никакого гражданского брака, только юридические лица: «Я была очень строгими правилами и считала, что все должно быть только после свадьбы.Правда, сейчас передумал - считаю, что надо сначала проверить партнера, а потом выходить за него замуж ... Когда я понял, что ухаживания Игоря зашли слишком далеко, я сказал: «Или официально, или как-нибудь». Надо было подумать ... ».


Тем не менее, пиарщику музыканту не хотелось, поэтому Наташе пришлось взять все в свои руки и сделать хитрую лошадь. С родителями она приехала домой в Николаев и пригласила В проходе сотрудников нет - никаких фуршетов, пышных нарядов и колец, только штампы в паспорте.


В 2000 году Наташа Королева ушла от супруга. По словам певца, причиной тому стала постоянная измена Николаева. Хотя расставание произошло без скандалов и сцен ревности, оба пережили этот разрыв тяжело.

В попытке отвлечься от давящей раны на сердце Наташа с головой погрузился в работу. Для одного выступления она пригласила команду танцоров «оригинального жанра», проще говоря - стриптизерш. Среди них был светловолосый телеведущий Тарзан, которому пришлось обсуждать с Наташей детали будущей оплаты.

В марте россиянки начинают сходить с ума. В том смысле, что примеряя свои летние джинсы, они приходят к мысли о необходимости срочно похудеть. Часто дамы предпочитают избавляться от лишних килограммов с помощью диет. Насколько они эффективны?

По словам модели Лопьевой, она попробовала «Миллионную диету», но никто с ней «чуда» не совершил. Против такого способа поддержания фигуры выступают певицы Веры Брежневой, Анна Семенович. А Наташа Королева вообще предлагает больше... секс.

Анна Семенович, певица

35 лет, вес - 65 кг, рост - 169 см, объемы - 110 - 60 - 92.

«Путем долгих проб и ошибок я поняла, что самый верный способ похудеть. не меньше, а больше двигаться. Ведь всевозможные диеты могут просто насаждать живот или иммунитет, который был в моей жизни когда-то. Несмотря на то, что я голодала под наблюдением врачей и выглядела достаточно хорошо, тогда у меня было для восстановления иммунной системы ».

Ирина Шейк, Супермодель

29 лет, рост 178 см, рост 88-58-90.

«Я практически не сижу на диетах», - сказал Stylebistro Shake. - Я думаю, что у человека может быть все, что ему нравится, при условии, что он будет регулярно делать упражнения, чтобы поддерживать себя в форме. Не смотря ни на что - можно заниматься на тренажерах, плавать, бегать в парке или заниматься пилатесом. И, конечно же, физические нагрузки должны приносить радость - ведь именно положительные эмоции делают нас красивыми. Лично я обожаю ходить в спортзал! "

Вера Брежнева, певица

33 года, вес - 53 кг, рост - 171 см, объемы - 90 - 62 - 92.

«Никаких диет! Правильное питание: завтрак / обед / ужин, без перекусов, последний прием пищи за 4 часа до сна, занятия спортом».

Анна Седокова, певица

32 года, вес 61 кг, рост - 172 см, объемы - 90 - 61 - 88.

«Чудес на свете нет. А красивое тело без труда не достанется никому. Как ни плохо, задницу подними - в зал. Помните, что ваше тело - это не ведро для мусора, вам не нужно есть, двигаться, вещи там, что придется.Просто делайте зарядку утром и вечером, и через месяц у вас будут результаты лучше, чем у тех, кто все это время лежал на диване. »

Анфиса Чехова, телеведущая, актриса

37 лет, 68 кг, рост 165 см, 100-71-109.

« Кто нас довел до женщин, до такого маразма .... извиняюсь или за каждую "вредную" штуку отталкивать? Кто нам сказал, что это модно? Я всегда восхищался людьми, которые не оправдывают своих поступков! "

Victoria Locking, модель

31 год, вес - 55 кг, рост - 177 см, объемы - 98-64-92.

«Помните, что диета - это временная мера, после которой обязательно срыв. Однажды я попробовал на себе миллион диет, и ни одна из них не сотворила чуда! Только когда вы научитесь слышать свое тело и чувствовать тело, вы можете забыть про диеты и лишний вес, но это происходит не сразу ».

Наташа Королева, певица

41 год, рост - 160 см, вес - 52 кг, объемы - 90 - 60 - 96.

Внешний вид:

«Если у вас нет времени на обычные ежедневные занятия спортом, займитесь регулярным сексом!».

Виктория Боня, модель, телеведущая

35 лет, рост 171 см, вес 61 кг, 82-62-89.

«Хорошая фигура может быть только у того, кто соблюдает правила рационального питания. В принципе, моя фигура не нуждается в диете».

Катя Жаркова, модель размера «плюс»

25 лет , рост 178 см, вес 84 кг, вес 107-82-112 г.

«Никогда не смешивайте свое тело. Возьмите себя таким, какой вы есть, и не позволяйте никому сомневаться в том, что вы прекрасны в том виде, в котором вы есть сейчас!».

Неожиданно для аппетитных форм подошли правительства четырех стран - вслед за Испанией, Италией и Израилем закон, обязывающий модели иметь нормальный вес, принимает Франция, пишет «КП». В нашей стране дело еще не дошло до закона, но споры в Рунете уже кипят. Газету спрашивают: так кто же теперь должен быть законодателем моды, хьюмидист или пампушки?

Наташа Королева (в величии порыва) родилась в Киеве, в музыкальной семье.У Наташи есть старшая сестра Ирина, она тоже певица, выступает в основном в Америке и Канаде. С раннего детства Наташа пела в хоре, затем поступила в музыкальную школу.

Фестиваль в Евпатории существенно повлиял на карьеру Наташи Королевы, после чего музыкальные записи Наташи попадают на музыкальный редактор Центрального телевидения Марш Могилев. Второй важный шаг - представить Игоря Николаева, будущего первого мужа певицы. Эти два знакомства стали причиной стремительного роста популярности молодого певца.

На данный момент в дискографии 10 полноценных альбомов и около 30 синглов. Как и певица Наташа Королева удостоена звания Заслуженная артистка России.

Предлагается небольшое анкетное досье, из которого можно узнать, какой рост и вес у Наташи Королевы, каковы параметры фигуры певицы, а также узнать другую интересную информацию. При подготовке материала частично использовались Википедия и некоторые другие открытые источники. Также предлагаем узнать, какого роста и веса Вера Брежнева - еще одна популярная певица украинского происхождения.

Какое настоящее имя Наташа Королева

Настоящее имя (ФИО) Наташа Королева - Наталья Владимировна Пусть. Написание на украинском языке - Наталья Володимирівна Подобрать.

Когда родилась Наташа Королева?

Какой возраст у Наташи Королевой?

На момент написания статьи (декабрь 2018 г.) Наташе Королеве 45 лет.

Какой знак зодиака Наташа Королева?

Наташа Королева Знак зодиака - близнецы. Родился в год синего водяного быка по восточному гороскопу.

Где родилась Наташа Королева?

Наташа Королева родилась в Украинской ССР (Украина), город Киев.

Что такое Наташа Королева?

Рост Наташи Королевой 160 сантиметров. Привлечение информационного фильма портала. Некоторые источники утверждают, что рост Наташи Королевы всего 155 сантиметров и даже фото, на которых певица стоит рядом с другими людьми.

Что такое Наташа Королева?

Вес Наташи Королевой 53 килограмма.Наташа Королева говорит о своем весе: «Я прекрасно знаю, что находится на полноте. Я нашла необычный способ заниматься спортом - не хожу в спортзал, а занимаюсь дома - ко мне приходит личный тренер. человек приходит ко мне специально, чтобы работать со мной, я не могу позволить себе лениться ».

Какие глаза у Наташи Королевой?

Цвет глаз Наташи Королевой - голубой.

Какого цвета на самом деле Наташа Королева?

Этот (натуральный, натуральный) цвет волос певицы Наташи Королевой - светло-русый.

Какого цвета Наташа Королева?

Наташа Королева расцветка - мягкая весна.

Какие параметры фигуры у Наташи Королевой?

Наташа Королева Параметры фигуры: 98-67-94 (Грудь-Талия-Бедра). Данные 2018 из интервью певца. Тогда про свои параметры фигуры Наташа Королева сказала следующее: «При моем росте в 160 сантиметров я считаю идеальным для себя вес 50 килограммов. Чтобы параметры фигуры не выбивались из нормы, посоветовались. с очень известным диетологом - Мариной Королевой (Примечание - Singer Single Family).Диета длится девять дней и позволяет безболезненно изменить фигуру до неузнаваемости. Суть заключается в том, что эти девять дней разделены на равные периоды, в течение которых я использую только один вид продукции. «

Что такое Наташа Королева?

Размер стопы Наташи Королевой - 37-й.

Какой размер груди у Наташи Королевой?

Наташа Королева размер груди - 3-й. В некоторых источниках утверждается, что размер бюста певицы - 4-й, но в основном такая информация появилась после того, как Наташа Королева во время беременности набрала несколько килограмм.Теперь певица снова в форме и бюсте вернулась к прежним размерам.


Наташа Королева Проигрывает с полной самоотдачей, а также поет ...
«Мое тело имеет свойство накапливать воду.

Так что мне не нужно худеть, мне нужно р появиться . Вода из ткани уходит, и все говорят: "Королева похудела!"

Сейчас при росте 160 см Наташа Королева весит 52 кг. Но идеально смотрится, когда стрелка на весах показывает цифру «49».К 28 годам поправилась до 51 кг, затем были беременность и роды. Дали плюс 15 кг, а потом на целый год избавилась от этих килограммов.

Сначала Наташа занималась спортом, бегала. Отличного результата не добилась, поэтому обратилась к диетологу - специалисту из Лондона. Он придумал Наташу Королеву Диету. У нее 3 дня в месяце ничего не было ...

Сегодня Наташа Занимается в фитнес-клубе Аэробикой, бегает на беговой дорожке, плавает.

Высота 160 см
Вес 52 кг

«Два года назад я обратился к своей фамилии - Маргарита Королева. Она очень известна в среде художников и политиков, поэтому я решил с ней познакомиться. Дело не в том, чтобы похудеть - мне просто нужно было« убрать »килограмм. из 2-3. И она сказала то же самое:

«Худеть не нужно, но если ты хочешь знать, как ты выглядишь в идеальном весе ...» Конечно хочу! Я узнал. Результат потрясающий! Я смотрел на себя в зеркало и удивлялся и радовался.Сколько могут сделать для нас женщины правильное питание и процедуры! Только питание и процедуры - даже без спорта! «

Салатная диета - Оптимальный вариант «сушки» тела (за три недели). Лишние килограммы от такой диеты бегут на бег. Наташа советует все попробовать: «Она действительно работает!»

Для начинающих K. perfect forms также рекомендует сменить режим питания и питания. Нет макарон, муки. Больше мяса, рыбы, овощей и есть надо каждые 2 часа.

« Раз в неделю советую проводить разгрузочный день - тоже отличное дело, сама убедилась в его эффективности. Такой разгрузочный день: съесть грейпфрут, через час - протеин вареного куриного яйца, через час - снова грейпфрут, и так весь день грейпфрут и протеин через час. Организовать такое питание несложно. Наслаждайтесь грейпфрутами и белками в контейнерах и берите с собой. «

Наташа Королева избавилась от валика на животе с помощью электростимуляции .По ее словам, эта процедура очень эффективна и помогает подтянуть ягодицы.

Еще Наташа любит ручной массаж И не приветствует обертывания: «А приятные процедуры, такие как обертывание, я, наоборот, не очень люблю. Хотя для питания кожи они полезны. Ну, могу. не лежать как в коконе, это не в моем характере »

На «Прекрасном» Наташа тратит 1,5 часа в неделю.

Самые толстые знаменитости и их жены.Самые известные отцы мира (50 фото) Толстая актриса

Невероятные факты

Каждому из нас хоть раз доводилось видеть шикарную жизнь знаменитостей, которые могут позволить себе все и даже больше. Однако каждый из нас также понимает, что все совсем не так, как кажется на первый взгляд.

Знаменитости всегда находятся под прицелом фотоаппаратов, и зачастую обычные вещи им не по карману, потому что сразу всем представят, и они начнут их покупать.Мало кто решится на поход в магазин в любимом домашнем костюме, но некоторые не прочь насладиться пренебрежением по ночам.

Сегодня мы поговорим о знаменитостях, которые в определенный период своей жизни сильно набрали вес. Кто-то сделал это ради роли, у кого-то была жизненная проблема, а кто-то просто слишком много ест. Некоторые из участников этой выборки уже привели себя в порядок, о лишних килограммах мы говорим как об определенном периоде их жизни.

толстые знаменитости

1.Джон Траволта




Невероятный мужчина, покоривший сердца женщин всего мира, отразил немного больше. Однако не все потеряно, нужно просто брать для себя.

2. Кэти Перри.





Поклонникам певицы стоило только привыкнуть к некоторой странности в образе и внешности Кэти, она решила удивить поклонников несколькими лишними килограммами.Главное - не увлекаться.

3. Нелли Фуртадо



Почему такая горячая красотка была похожа на такую ​​пышку? Говорят, что всему виной развод певицы.

4. Рианна





Рианна никогда не была плохой, но на фото форма очень пышная.Поклонников ее таланта это возмутило.

5. Кристиан Бэйл





Этот замечательный актер прибавляет в весе, он очень худой. Все для ролей. Нет на него времени.

6. Ева Лонгория




Ева слегка расслабилась, но ей не о чем беспокоиться, так как ее пышные формы очень нравятся ее мужу.

7. Джулия Робертс



Юлия набрала 20 лишних килограммов после развода с мужем.

8. Айшвария Парадайз





После того, как эта индийская красавица родила дочку, этого просто не узнать.Но, по слухам, своим внешним видом вполне доволен.

9. Келли Кларксон





Звезда после рождения двоих детей стала тяжелее на 20 кг.

10. Вал Килмер



Этот мужчина в свое время был эталоном сексуальности в Голливуде, но сейчас так много не назовешь.В СМИ регулярно ищут информацию о якобы тяжелом заболевании, но актер опровергает все слухи.

Плоские знаменитости

11. Бритни Спирс.



На заре карьеры Бритни была очень худой и мускулистой и при любой возможности открывала живот. После рождения двоих детей и развода с Кевином Федерлайном она не оставила привычки сжимать живот, справедливо эффект был уже немного неправильный.

12. Алек Болдуин



Алеку Болдуин Папарацци чаще фотографируют с едой. Сегодня его некогда очень напряженное лицо стало просто круглым.

13. Джанет Джексон



Всем известная сестра поп-короля личность всегда была заметна и в прямом, и в переносном смысле. На заре карьеры Джанет была очень стройной, но в какой-то момент, когда карьера певицы пошла на спад, она набрала много ненужных килограммов.Сегодня Джанет редко появляется на публике.

14. Стивен Сигал



Звезда боевиков 90-х сегодня практически сошла с экранов и стала как тяжеловес. Во многих интервью Стивен много оправдывается своей физической формой. Запаха визуальной любви, конечно, хватит надолго, но все же ...

15. Джессика Симпсон



Эта очень амбициозная девушка сделала успешную карьеру в разных сферах: она певица, актриса и телеведущая.Однако в определенный момент она начала быстро набирать вес. Поклонники винила в этом жестком расстаются с излюбленным на то время никнеймом.

Плоские звезды

16. Райан Гослинг



Райан в отличной форме: у него подтянутое тело, и он отлично держит себя. Но однажды, в начале карьеры, Райан отказал режиссеру Питеру Джексону из-за того, что актер набрал слишком много лишних килограммов.В результате, по словам самого статуи, он остался толстым и безработным.

17. Кристина Агилера



Был период "пушистости" и у знаменитых агилеров. Он совпал с ее разводом. Имея лишние килограммы, Кристина встретила своего второго мужа, родила второго ребенка и снова привела себя в форму. Она стала выглядеть даже лучше, чем он сам.

18.Винс фон



Какие-то лишние килограммы у актера были всегда. Но в таком виде смотрится очень гармонично. Поклонники приняли Винса без осуждения, а образ худощавого победил, время начала карьеры, а летом ушел вовсе. Да и сам актер над этим совершенно не работает.

19. Мэрайя Кэри



Хорошего человека должно быть много.Но, к сожалению, не всегда успех продолжает сопровождать приход лишних килограммов. Сегодня Марьяй выглядит более уставшей, а интересные альбомы давно не выпускаются.

20. Лоуренс Фишборн



Сегодня не узнать мудрого морфуса из "матрицы". Избыточный вес на лице. Несмотря на то, что у актера широкая кость, все же ему нужно потрудиться, чтобы соответствовать планке супергероя.

Толстые звезды

21. Рассел Кроу.



Еще один звездный красавчик, который немного раскрутился. Однако даже с лишним весом актер вовсе не переставал появляться на экранах: тоже успешно проходит кастинги и как будто не собиралась худеть. Более того, в то время спокойная супружеская жизнь с двумя детьми сделала его еще счастливее, и он совсем не выглядел несчастным или живым.

22. Мэтт Дэймон.



Мэтт - любимый многими актер. Сейчас ваш красавец в отличной форме, но было время, когда в 2009 году произошло удивительное преображение. Актер сильно забил, отразил и закрасил волосы, усы. Все это произошло ради роли в фильме «Информатор».

Когда стрелка на весах достигает своего предела, это не значит, что за карьеру в шоу-бизнесе можно поставить жир как пятую точку жира, крестик.
Мы собрали десять представителей российской и мировой фабрики грез, которые благодаря лишним килограммам только уверенно стоят на звездном пьедестале.
Мариам Мерабова (российская певица) 42 года
«Хорошего человека должно быть много», - прошли администраторы проекта «Голос», обсуждая участницу Мариам Мерабову. Бывший бэк-вокалист Дима Билан на проекте полюбил все и сразу - за непринужденный стиль общения, искренность и настоящий талант.Пышные формы не помешали певице дойти до финала популярного проекта, во время которого она поддержала любящего супруга и трех дочерей. Помимо прочего, Мирабова преподает в престижной музыкальной школе другой дамы с аппетитными формами - Аллы Пугачевой.

Певица Мариам Мирабова
Адель (британская певица)
26 лет
Несмотря на то, что Кутюрье Карл Лагерфельд посоветовал британской певице сбросить явно ненужные килограммы, девушка не спешила записываться на прием к диетологу, а готовились следующие хиты.Выпустив всего два альбома, в 2012 году певица забрала шесть статуэток с премии Грэмми. В конце того же года Адель родила сына, поэтому ее формы только прибавили в объеме.

Певица Адель
Анна Нетребко (российская оперная певица)
43 года
Зимой прошлого года более трех миллиардов человек смотрели с голубыми экранами, как оперная дива Анна Нетребко исполняет гимн Олимпийских игр в Сочи. Нежно-голубое платье с трудом скрывало круглую фигуру воспитанников маэстро Валерия Гергиева.Среди известных оперных ныряльщиков есть лишний вес - это обычная тенденция, и некоторые специалисты считают, что благодаря впечатляющему комплексу голос звучит намного красочнее.


Оперная певица Анна Нетребко
Ребел Уилсон (австралийская актриса)
28 лет
Звезда «Постельной вечеринки в Вегасе» и «холостяки» могут серьезно потерять работу, если она остановится после шести вечера. Голливудские режиссеры выстроены в очередь, чтобы приглашать детей на роль новой остроумной толстушки, с которой актриса блестяще справится.

Актриса Рабл Уилсон
Маша Федорова (главный редактор Glamour)
43 года
Маша Федорова, пожалуй, самая массовая единица светской Москвы. Великолепная дама - желанная гостья на всех вечеринках столичных модников и олигархов. Женщина - эталон стиля не только для дам с биркой XXL на воротнике, но и для стройных светских дам и звезд, бегущих за модными советами в редакцию популярного женского журнала.

Главный редактор Glamour Маша Федорова
OPRA WINFRI (американская телеведущая и медиасигнал)
60 лет
Журнал Forbes оценивает состояние опрача на 2.8 миллиардов долларов, что позволяет ей называться самой богатой женщиной мирового шоу-бизнеса. Автор и ведущая проекта «Шоу Опры Уинфри», родилась в неблагополучной семье, была изнасилована в 9 лет, а 14 пережила смерть собственного ребенка. Взять невероятный успех Опре удалось, несмотря на отсутствие диетолога и режима питания. После того, как телеведущая набрала лишние килограммы, блогеры стали признаваться друг другу на форумах, что с аппетитным комплексом Опра смотрится намного харизматично.

Телеведущая Опра Уинфри
Екатерина Зулкина (российская актриса)
38 лет
Екатерина Зулкина выходила из-под контроля, сколько раз из-за ее искрометного юмора бросалась от смеха член жюри КВН Юлия Гусман. Воспитанник клуба веселый и находчивый - один из самых успешных подопечных Александра Маслякова. Благодаря нестандартной фигуре и таким искрометным шуткам веселые анекдоты получаются еще смешнее. Звезда шоу Comedy Woman и ведущая «Канала» часто радует юмором своих подписчиков в «Инстаграм».Итак, актриса до слез преследовала всех своих читателей, поднявшись в ораторское искусство киевского градуалиста Виталия Кличко.

Актриса Екатерина Зулькина
Октавия Спенсер (американская актриса)
44 года
Американские блогеры обожают Октавию не только за ее актерские таланты, но и за безупречные выходы. Звезда Оскароне из фильма «Соблазнитель» известна изысканным вкусом и чувством стиля. Несмотря на не откровенно внушительный вес, Спенсер всегда выглядит после своего внешнего вида, все модные критики относят ее к модной толстушке.

Мелисса Маккарти (американская актриса)
44 года
Уста оскароносных звезд фильмов «Ночь в Вегасе», «Поймай Толстуху, если сможешь» и «Менты в юбках» редко держатся на замке: актриса или гамбургеры вне ажиотажа фотографов, или демонстрируют очаровательную голливудскую улыбку, когда она появляется на публике. Мелисса настолько востребованный персонаж в мире кино, что даже будучи беременной на большом сроке, она продолжила съемки в телесериале «Девочки Гилмор», где ребенка тоже ждал сценарий.

Актриса Мелисса Маккарти
Корнелия Манго (российская певица)
28 лет
Невозможно было пройти мимо включенного телевизора, когда юная Корнелия Манго появилась на проекте «Фабрика звезд». Внимание публики молодой артист приковал не только за счет экзотической внешности, но и особого вокала и аппетитной фигуры. Несмотря на то, что Корнелия ни разу не доходила до финала Final Factory, с тех пор прибавляет не только в весе, но и в популярности.

Когда стрелка на весах достигает своего предела, это не значит, что за карьеру в шоу-бизнесе можно поставить жир как пятую точку жира, крестик. Супер собрал десять представителей российской и мировой фабрики грез, которые благодаря лишним килограммам только уверенно стоят на звездном пьедестале.

Мерабова Мариам (российская певица)

42 года

«Хорошего человека должно быть много», - прошли администраторы проекта «Голос», обсуждая участника Маира Марабова.Бывший бэк-вокалист Дима Билан на проекте полюбил все и сразу - за непринужденный стиль общения, искренность и настоящий талант. Пышные формы не помешали певице дойти до финала популярного проекта, во время которого она поддержала любящего супруга и трех дочерей. Помимо прочего, Мирабова преподает в престижной музыкальной школе другой дамы с аппетитными формами - Аллы Пугачевой.

Адель (британская певица)

26 лет

Несмотря на то, что Кутюрье Карл Лагерфельд посоветовал британской певице сбросить явно ненужные килограммы, девушка не спешила записываться на прием к диетологу, и готовились следующие хиты.Выпустив всего два альбома, в 2012 году певица забрала шесть статуэток с премии Грэмми. В конце того же года Адель родила сына, поэтому ее формы только прибавили в объеме.

Нетребко Анна (российская оперная певица)

43 года

Зимой прошлого года более трех миллиардов человек с голубыми экранами смотрели, как оперная дива Анна Нетребко исполняет гимн Олимпийских игр в Сочи. Нежно-голубое платье с трудом скрывало круглую фигуру воспитанников маэстро Валерия Гергиева.Среди известных оперных ныряльщиков есть лишний вес - это обычная тенденция, и некоторые специалисты считают, что благодаря впечатляющему комплексу голос звучит намного красочнее.

Ребел Уилсон (австралийская актриса)

28 лет

Звезда «Постельной вечеринки в Вегасе» и «холостяков» могут серьезно потерять работу, если остановятся после шести вечера. Голливудские режиссеры выстроены в очередь, чтобы приглашать детей на роль новой остроумной толстушки, с которой актриса блестяще справится.

Маша Федорова (Главный редактор Glamour)

43 года

Маша Федорова, пожалуй, самая габаритная единица светской Москвы. Великолепная дама - желанная гостья на всех вечеринках столичных модников и олигархов. Женщина - эталон стиля не только для дам с биркой XXL на воротнике, но и для стройных светских дам и звезд, бегущих за модными советами в редакцию популярного женского журнала.

Опра Уинфри (американская телеведущая и медиасигнал)

60 лет

Журнал Forbes оценивает состояние опрача в 2 балла.8 миллиардов долларов, что позволяет ей называться самой богатой женщиной мирового шоу-бизнеса. Автор и ведущая проекта «Шоу Опры Уинфри», родилась в неблагополучной семье, была изнасилована в 9 лет, а 14 пережила смерть собственного ребенка. Взять невероятный успех Опре удалось, несмотря на отсутствие диетолога и режима питания. После того, как телеведущая набрала лишние килограммы, блогеры стали признаваться друг другу на форумах, что с аппетитным комплексом Опра смотрится намного харизматично.

Екатерина Зулькина (российская актриса)

38 лет

Екатерина Зулкина выходила со счета, сколько раз из-за ее искрометного юмора член жюри КВН Юлия Гусман бросалась от смеха. Воспитанник клуба веселый и находчивый - один из самых успешных подопечных Александра Маслякова. Благодаря нестандартной фигуре и таким искрометным шуткам веселые анекдоты получаются еще смешнее. Звезда шоу Comedy Woman и ведущая «Канала» часто радует юмором своих подписчиков в «Инстаграм».Итак, актриса до слез преследовала всех своих читателей, поднявшись в ораторское искусство киевского градуалиста Виталия Кличко.

Октавия Спенсер (американская актриса)

44 года

Американские блогеры обожают Октавию не только за ее актерские таланты, но и за безупречную репутацию. Звезда Оскароне из фильма «Соблазнитель» известна изысканным вкусом и чувством стиля. Несмотря на не откровенно внушительный вес, Спенсер всегда выглядит после своего внешнего вида, все модные критики относят ее к модной толстушке.

Мелисса Маккарти (американская актриса)

44 года

Уста оскароносных звезд фильмов «Ночь в Вегасе», «Поймай Толстуху, если сможешь» и «Полицейские в юбках» редко держатся за замок: актрисы или гамбургеры вне нахлестов фотографов, или демонстрируют очаровательная голливудская улыбка, когда она появляется на публике. Мелисса настолько востребованный персонаж в мире кино, что даже будучи беременной на большом сроке, она продолжила съемки в телесериале «Девочки Гилмор», где ребенка тоже ждал сценарий.

Корнелия Манго (Российская певица)

28 лет

Невозможно было пройти мимо включенного телевизора, когда юная Корнелия Манго появилась на проекте «Фабрика звезд». Внимание публики молодой артист приковал не только за счет экзотической внешности, но и особого вокала и аппетитной фигуры. Несмотря на то, что Корнелия ни разу не доходила до финала Final Factory, с тех пор прибавляет не только в весе, но и в популярности.

В новом фильме «Парни в сундуках», основанном на реальных событиях, одну из главных ролей исполнил самый популярный современный комедийный актер - Джон Хилл. Парой стал Майлз Теллер, оба актера появятся в образах приятелей, которым удалось заключить контракт с Пентагоном на поставку оружия. Кстати, для поклонников Джона Хилла этот фильм вполне ожидаемый, одно лишь его появление на экранах вызывает бурный восторг у женской части зрителей. И это при том, что у актера совершенно нет модельной внешности.Сегодня мы расскажем о десяти самых очаровательных отцах Голливуда, добившихся популярности вне зависимости от веса.

Джон Хилл

Американский актер получил известность и обожание поклонников после выхода на экраны фильмов «Суперперсианцы» и «Побег из Вегаса». Далее, самые яркие работы - это картины: «Мачо и Ботан», «Человек, который все изменил» и «Волк с Уолл-стрит». Очарование Джона Хилла сложно переоценить. Наряду с актерским талантом это качество принесло ему две номинации на престижную премию «Оскар» за роли в фильмах «Человек, который все изменил» и «Волк с Уолл-стрит».Однако и до своей популярности Джон был другим, но актера это не смутило. Однако с годами Хилл стала изрядно прибавлять в весе, что особенно заметили поклонники звезды Голливуда, внимательно следящие за жизнью любимого кумира. Но мы признаем, что лишние килограммы не портят Хилла, и с ролями актер справляется блестяще.

Дэнни де Вито

Легендарный американский актер Дэнни де Вито начал свой путь в киноиндустрии довольно необычным путем: после окончания парикмахерской Академии.Однако отсутствие актерского мастерства никак не сказывается на успехе и наличии актерского таланта. Известность пришла к де Вито после роли в сериале «Такси», отмеченной Золотым глобусом и Эмми. А настоящую славу и армию поклонников актеру обеспечил фильм «Роман с камнем». Симпатия Дэнни, мягко говоря, не обладающего стандартной красотой, буквально не была наказанием со стороны женщин. И это при полноте и небольшом росте. Как легко добиться того, чтобы одного мужского обаяния и харизмы хватило настолько, что женщины перестают обращать внимание на какие-то недостатки во внешности.

Кевин Джеймс.

Кевин Джеймс - один из самых популярных американских актеров и любимец публики. Большинство из которых он покорил своими ролями в таких фильмах, как «Одноклассники», «Правила удаления: Метод Хитча», «Чак и Ларри: Огненная свадьба». Кстати, Кевин тоже талантливый комик, карьеру в шоу-бизнесе он начал с комедийного шоу. И у меня это получилось довольно успешно, поэтому человек был известен определенной части публики еще до своего дебюта в кино. Кстати, на счету Джеймса работа в известном сериале «Король королев», за который актер был номинирован на статуэтку «Эмми».Однако сейчас, параллельно со съемками в фильмах, Кевин является создателем собственного стенда-АПА. Похоже, Джеймс настоящий везунчик, ему одинаково повезло и в профессии, и в личной жизни: актер примерный семьянин, вместе с женой растит четверых детей.

Джон Гудман

Широкая публика добродушная и симпатичная Джон Гудман известен благодаря ролям в фильмах «Король Ральф», «Большой Лебовский» и «Мальчишник: Часть III». Кроме того, голосом Гоудмана говорит всем известная Монстр Салли из популярного мультфильма Monster Corporation.Однако путь к успеху человека начался с детства: будучи школьником, Гудман играл в спектаклях. Поэтому неудивительно, что Джон посвятил свое образование актерскому мастерству. Кстати, театральную сцену актер не бросал: на его счету множество крупных спектаклей, которые имели грандиозный успех и высоко оценены критиками.

Джек Блэк

Пожалуй, это один из самых известных комедийных актеров современности. Джек Блэк, будучи далеко не стройным мужчиной, сумел собрать целую армию поклонников, большая часть которых составляет женскую аудиторию.Однако глядя на мордашку этого симпатичного толстяка, невозможно не поддаться очарованию столь очаровательного мужчину. Зрителям Актер наиболее известен своими ролями в таких фильмах, как «Любовь зла», «Школа обмена», «Школа рока», «Ужасы». Мы уверены, Харизма Джека помогла ему добиться успеха в шоу-бизнесе. Кстати, параллельно со съемками в кино Блэк активно занимается музыкой.

Кевин Смит

Имя еще одного забавного толстяка Кевина Смита знакомо всем поклонникам фильмов «Догма», «Молчаливый Боб» и немого боба.«Именно он сделал постановщиком эти картины, которые одни из зрителей встретили с огромным восторгом, а другие жестко критиковали неоднозначный сюжет. Однако слава Смита не повлияла на славу, а даже наоборот, Впечатляющий толчок дала его карьера. Помимо этих двух нашумевших фильмов на счет режиссера, картина «Клерк». Кстати, этот фильм полностью создавался на деньги режиссера, который пригласил своих друзей на роль Кевин известен тем, что часто приглашает в свои фильмы постоянных актеров, например Бен Аффлек, Джейсон Ли, Мэтт Дэймон снимался в нескольких режиссерских фильмах.

Энтони Андерсон

Энтони Андерсон хоть и имеет внушительные габариты, но выглядит довольно добродушно. Актер известен зрителям по ролям в таких фильмах, как «Очень страшное кино - 3», «Из-за травм», «Дом большой мамочки», «Я, снова я Ирэн», «Джекпот кенгуру», Справедливость и движение »и др. Рисунки. Андерсон органично смотрится в комедийных ролях, за что неоднократно номинировался на различные престижные кинопроизводства. Однако серьезные роли также не проходят незамеченными.Так, за роль в фильме «Отступники» Энтони получил номинацию на премию Гильдии киноактеров США.

Звезды стараются выглядеть презентабельно, но это удается далеко не каждому. Артисты из России и Голливуда часто страдают из-за лишнего веса. Тем не менее это не мешает популярности толстых звезд, а наоборот, привлекает к себе еще больше внимания. Десять звезд с лишним весом - в материале.

Лолита Милявская

По официальной информации, российская певица весит 73 кг при росте 173 см, но поклонники подозревают, что эта цифра устарела.Звезда выглядела великолепно, но со временем набрала много лишних килограммов.

В 2016 году ее фото с фестиваля «Жара» в Баку, где она позирует рядом с и. Сейчас вес артистки неизвестен, но поклонники отмечают, что звезда полностью летает, а вот похудеть она не стремится.

Ева Польна


Евгений Осин


Толстым стал и советский и российский музыкант. Мужчина заметно изменился с 90-х годов. Несмотря на то, что певец вегетарианец, это не помешало ему набрать лишние килограммы.К тому же из-за алкоголя известная певица стала неузнаваемой. Фото артиста до и после шокируют поклонников.

Жасмин


Ольга Будина


В 2015 году актриса появилась на премьере мюзикла «Поют под дождем». Папарацци заметили, что Будин значительно покачнулся. Создатели светских хроник позже отмечали, что даже длинное черное платье и пальто не скрывали недостатков фигуры художника. Нормальный вес звезды - 51 кг, но в указанный период ее вес достиг 84 кг.

DOI: 10.1530 / ERC-15-0086

% PDF-1.3 % 1 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > транслировать Acrobat Distiller 7.0 (Windows) 3B2 Total Publishing System 8.07q / W2015-10-27T15: 13: 45 + 05: 302015-10-27T15: 13: 45 + 05: 30application / pdf

  • doi: 10.1530 / ERC-15-0086
  • uuid: 2c30f785-5488-4dea-9e0a-bea2985597a8uuid: f8b69580-5d5d-4e4b-815b-c2bda87ff12d конечный поток эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > >> эндобдж 8 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > эндобдж 14 0 объект > / Граница [0 0 0] / Тип / Аннотация >> эндобдж 15 0 объект > / Граница [0 0 0] / Тип / Аннотация >> эндобдж 16 0 объект > / Граница [0 0 0] / Тип / Аннотация >> эндобдж 17 0 объект > / Граница [0 0 0] / Тип / Аннотация >> эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > эндобдж 20 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 23 0 объект > эндобдж 24 0 объект > эндобдж 25 0 объект > эндобдж 26 0 объект > эндобдж 27 0 объект > эндобдж 28 0 объект > транслировать x +

    Стабилизация первичных ресничек снижает повторный вход в абортивный клеточный цикл для защиты поврежденных нейронов ЦНС взрослых от апоптоза

    Abstract

    Повторный вход апоптотических нейронов в результате абортивного клеточного цикла (АСС) - это недавно охарактеризованный феномен, который возникает после повреждения центральной нервной системы (ЦНС) или в течение заболевания ЦНС.Следовательно, ингибирование прогрессирования клеточного цикла является нейропротекторным в многочисленных моделях патологии ЦНС. Первичные реснички представляют собой повсеместные клеточные органеллы на основе центриолей, которые предотвращают круговорот клеток, но их способность модулировать абортивный клеточный цикл не описана. Здесь мы показываем, что реснички нейронов удаляются in vitro и in vivo после повреждения гипоксией или перерезкой зрительного нерва (ONT), соответственно. Кроме того, принудительная резорбция ресничек сенсибилизировала нейроны к этим повреждениям и усиливала гибель клеток.Напротив, фармакологическое ингибирование или нокдаун shRNA белков, которые разбирают реснички, увеличивают выживаемость нейронов и снижают фосфорилирование ретинобластомы (Rb), главного переключателя для повторного входа в клеточный цикл. Наши результаты показывают, что стабилизация нейрональных первичных ресничек подавляет, по крайней мере временно, цикл апоптотических клеток, что имеет значение для будущих терапевтических стратегий, которые останавливают или замедляют прогрессирование нейродегенеративных заболеваний и острых повреждений ЦНС.

    Образец цитирования: Choi BKA, D’Onofrio PM, Shabanzadeh AP, Koeberle PD (2019) Стабилизация первичных ресничек снижает повторное включение абортивного клеточного цикла для защиты поврежденных нейронов ЦНС взрослых от апоптоза.PLoS ONE 14 (8): e0220056. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056

    Редактор: Рафаэль Линден, Федеральный университет Рио-де-Жанейро, БРАЗИЛИЯ

    Поступила: 22 января 2019 г .; Одобрена: 8 июля 2019 г .; Опубликовано: 1 августа 2019 г.

    Авторские права: © 2019 Choi et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

    Доступность данных: Все соответствующие данные доступны по Dryad в DOI: 10.5061 / dryad.7dk08bc.

    Финансирование: Это исследование было поддержано Операционным грантом Канадских институтов исследований в области здравоохранения (MOP 119309 для PDK) и Отделением анатомии Университета Торонто, финансированием Департамента хирургии, предоставленным PDK. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

    Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

    Введение

    Фатальное повторное включение нейронов в клеточный цикл, известное как абортивный клеточный цикл (АСС), наблюдалось при ряде заболеваний ЦНС, таких как болезнь Альцгеймера и Паркинсона [1,2] или инсульта [3] черепно-мозговая травма (ЧМТ) [4]. Поврежденные нейроны демонстрируют репликацию ДНК и повышение маркеров клеточного цикла, таких как фосфорилированная ретинобластома (pRb) [5]. Ингибирование прогрессирования клеточного цикла с помощью ингибиторов циклинзависимой киназы (CDK) или нокаутом факторов митотической транскрипции было нейропротекторным в ряде моделей повреждения ЦНС, указывая на то, что ACC является критическим процессом в апоптозе нейронов [5-8].

    Первичные реснички представляют собой одиночные проекции тела клетки, которые подавляют клеточный цикл за счет секвестрации центриолей на клеточной мембране [9,10]. Каждая эукариотическая клетка имеет две центриоли (мать и дочь), которые связаны вместе, образуя центросому [11]. Реснички имеют основу микротрубочек (аксонему), прикрепленную к модифицированной материнской центриоле, называемой базальным телом [9]. При входе в клеточный цикл аксонема разбирается, чтобы освободить центросому для деления клетки. Это происходит за счет активности гистондеацетилазы 6 (HDAC6), которая деацетилирует тубулин аксонема [12].HDAC6 фосфорилируется киназой Aurora A (AurA), которая сама активируется усилителем филаментации 1 человека (HEF1) и трихоплейном (TCHP) [12,13]. Более того, Polo-like kinase 1 (PLK1) стабилизирует HEF1 [14] и активирует HDAC6 [15] и член семейства Kinesin 2a (Kif2a) [16]. Kif2a ассоциирует с базальным тельцем, чтобы способствовать деполимеризации цитоплазматических микротрубочек [16], тогда как NudE homolog 1 (NDE1) помогает в ретракции ресничек за счет секвестрирования dynein. Динеин регулирует внутрижладжеллярный транспорт (IFT), который необходим для сборки и поддержания ресничек [17,18].Характерно, что быстро делящиеся клетки имеют пониженную частоту появления ресничек и повышенные уровни белков разборки ресничек [19,20]. Напротив, подавление белков разборки ресничек усиливает цилиогенез и ингибирует пролиферацию [17,21,22]. Поскольку реснички почти повсеместны в нейронах и действуют как тормоз клеточного цикла, мы стремились исследовать, играет ли целостность ресничек роль в ACC и может ли ею манипулировать, чтобы остановить ее прогрессирование.

    Здесь мы сообщаем, что повреждение нейрона ЦНС взрослого человека приводит к укорочению и потере первичных ресничек.Более того, стабилизация первичных ресничек за счет ингибирования механизмов разборки является нейропротекторной и снижает повторное вхождение в клеточный цикл. Напротив, усечение ресничек путем фармакологического ингибирования или нокдауна компонентов IFT усиливает апоптоз нейронов после повреждения. Эти находки устанавливают новую роль первичных ресничек в регуляции повторного входа в клеточный цикл и сопутствующего апоптоза в зрелых нейронах ЦНС млекопитающих.

    Материалы и методы

    Комитет по уходу за животными Университета Торонто одобрил это исследование.Номера протоколов: 20011691, 2001699. Животных (крысы Sprague Dawley) анестезировали изофлуораном.

    Первичные нейроны коры

    Первичные нейроны коры были выделены из крыс P1 Sprague Dawley. Детенышей полностью анестезировали в камере с 4% изофлураном, чтобы уменьшить страдания, прежде чем они были умерщвлены декапитацией большими хирургическими ножницами. Кортикальный слой был рассечен и освобожден от мозговых оболочек в ледяном сбалансированном солевом растворе Хэнка, не содержащем кальция и магния, и диссоциирован в 0.05% трипсина в течение 15 минут при 37 ° C. Трипсинизацию прекращали добавлением среды Игла, модифицированной GIBCO по Дульбекко (DMEM) (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс), содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS) (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс) в удвоенном объеме трипсина. Затем кортикальный слой растирали с помощью отполированной огнем пипетки Пастера. Затем диссоциированные нейроны пропускали через сетчатый фильтр для клеток 40 мкм (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) и центрифугировали при 900 об / мин в течение 4 минут. Полученный осадок ресуспендировали в нейробазальной среде (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), содержащей 2% B27 (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), 1% глутамин (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) и 1% пенициллин-стрептомицин (P / S) (Sigma-Aldrich Canada Corp., Oakville, ON) и высевали при плотности 50 000 клеток / см 2 на поли-D-лизин (PDL) 30 000–70 000 Да (Sigma-Aldrich Corp., Oakville, ON), покрытые 96-луночные планшеты (Sarstedt Inc. ., Сен-Леонар, Квебек). Клетки хранили в увлажненном инкубаторе при 37 ° C, содержащем 95% воздуха и 5% CO2. Через 3 дня in vitro (DIV) половину культуральной среды заменяли для добавления Ara-c в конечной концентрации 1 мкМ для ингибирования роста глиальных клеток. На 5 DIV половину культуральной среды заменили свежей средой.Культуры использовали после 7 DIV.

    Клеточные линии

    клеток N1E-115 (CRL-2263, ATCC, Manassas, VA) были приобретены у производителя и выращены в колбе T-75 (Sarstedt Inc., Saint-Léonard, QC) с DMEM / F12 (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA. ) с добавлением 10% FBS, 5% лошадиной сыворотки (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) и 1% P / S в инкубаторах при 37 ° C с 95% воздуха и 5% CO2. Клетки пассировали еженедельно при конфлюэнтности 70–80%. Клетки N1E-115 дифференцировали путем культивирования на планшетах, покрытых PDL, при плотности 15 000 клеток / см. 2 в среде DMEM с 1% FBS и 1.5% диметилсульфоксид при 37 ° C, содержащий 95% воздуха и 5% CO2. Клетки использовали 5–7 DIV. Клетки HT22 (SCC129, Millipore Sigma, Берлингтон, Массачусетс) были любезно предоставлены лабораторией доктора Джереми Сивака и выращены в колбах Т-75 с DMEM, дополненной 10% FBS и 1% P / S, в инкубаторах при 37 ° C с 95% воздух и 5% CO2. Клетки пассировали еженедельно при конфлюэнтности 70–80%. Клетки HT22 были дифференцированы путем посева на планшеты, покрытые PDL, в полной ростовой среде, которую заменили нейробазалом, содержащим 1% добавку N-2 (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), 1% глутамин и 1% P / S в течение 24 часов перед использованием. .Клетки RPE1 (CRL-4000, ATCC, Manassas, VA) были любезно предоставлены лабораторией доктора Уильяма Тримбла и выращены в колбах Т-75 в среде DMEM / F12, содержащей 10% FBS и 1% P / S, в инкубаторах при 37 ° C с 95% воздуха и 5% CO2. Клетки пассировали еженедельно при конфлюэнтности 70–80%. Для экспериментов клетки RPE1 высевали на планшеты, покрытые PDL, в полную питательную среду. Когда культуры становились конфлюэнтными, среду для роста заменяли бессывороточной DMEM с 1% P / S в течение 24 часов для индукции цилиогенеза перед использованием.

    Тест на апоптоз и пролиферацию, индуцированный этопозидом

    Клетки предварительно обрабатывали либо тубастатином А (Selleckchem, Houston, TX, Каталожный №S8049) или ингибитора сияния I (Selleckchem, Хьюстон, Техас, № по каталогу S1451) за 1 час до травмы. Апоптоз индуцировали 24-часовой обработкой 50 мкМ этопозида (Sigma-Aldrich Canada Corp., Oakville, ON). Выживаемость клеток оценивали путем инкубации культур с 0,5 мг / мл МТТ (Sigma-Aldrich Canada Corp., Оквилл, Онтарио) при 10% объема культуры в течение 4 часов при 37 ° C. Полученные кристаллы МТТ растворяли в ДМСО в течение 1 минуты при осторожном встряхивании. Аналогичным образом реагент для анализа пролиферации WST-8 (Sigma-Aldrich Corp., Oakville, ON) добавляли к среде для культивирования клеток в количестве 10% от объема культуры в течение 4 часов при 37 ° C. Считывающее устройство для микропланшетов Tecan Fluoroskan (Männedorf, Швейцария) использовали для измерения оптической плотности раствора при длине волны 570 нм с эталонной длиной волны 620 нм или 450 нм для тестов MTT и WST-8 соответственно.

    Пересечение зрительного нерва

    За всеми животными ухаживали в соответствии с Канадским советом по уходу за животными. Во всех экспериментах использовали взрослых самок крыс-альбиносов Sprague-Dawley (Charles River Laboratories, Senneville, QC), свободных от обычных патогенов.Их содержали в помещениях для животных Университета Торонто, в среде с контролируемым патогеном, в стандартных клетках с 12-часовым циклом свет / темнота. Еда и вода предоставлялись по мере необходимости.

    Для хирургических процедур животных индивидуально анестезировали изофлураном (2%; 0,8% л / мин скорость потока кислорода) и помещали в стереотаксическую рамку с введением анестезии через противогаз для поддержания седативного эффекта. Лубрикант Tears Naturale (Alcon Canada Inc., Миссиссауга, Онтарио) наносили на роговицу для предотвращения высыхания во время операции.Для минимизации боли и помощи в послеоперационном восстановлении всем животным была сделана одна предоперационная инъекция кетопрофена (5 мг / мл, доза для крыс; 0,1 мл / 100 г массы тела). Для доступа к зрительному нерву в ткани, покрывающей верхнюю границу глазничной кости, делали разрез с последующим рассечением содержимого верхней глазницы и втягиванием вышележащих прямых мышц. Дуральная оболочка, окружающая зрительный нерв, была разрезана в продольном направлении, чтобы не повредить кровеносные сосуды, кровоснабжающие сетчатку.Для перерезки зрительного нерва нерв осторожно извлекали из оболочки менингеальной оболочки и разрезали в пределах 2 мм от задней части глаза. Затем содержимое глазницы было возвращено в исходное положение, и начальный разрез был закрыт. После операции животные были помещены в клетку для восстановления под нагревательной лампой. На следующий день крысам внутрибрюшинно вводили кетопрофен (5 мг / мл, доза для крыс; 0,1 мл / 100 г массы тела), чтобы минимизировать послеоперационный дискомфорт. Офтальмологическая глазная мазь снова была нанесена на роговицу, чтобы убедиться, что она оставалась гидратированной в течение периода восстановления.

    Внутриглазные инъекции

    Поскольку апоптоз RGC начинается через 3-4 дня после травмы [23,24], существует окно для доставки лечения, нацеленного на апоптотический аппарат. 4 мкл тубастатина A или ингибитора Aurora A, растворенного в ДМСО, вводили через 3 и 10 дней после операции. Для введения внутриглазных инъекций животных анестезировали изофлураном и помещали в стереотаксическую рамку под постоянной анестезией (2% изофлуран; скорость потока кислорода 0,8% л / мин), подаваемой через противогаз.Для внутриглазных инъекций использовали вытянутую стеклянную микропипетку, присоединенную к шприцу Hamilton объемом 10 мкл через гидравлическое соединение. Инъекция производилась в стекловидную камеру глаза, позади лимба, с осторожностью, чтобы предотвратить повреждение хрусталика или передних структур глаза. После введения соответствующего раствора пипетку удерживали на месте в течение 5 секунд, чтобы предотвратить рефлюкс, а затем осторожно вынимали из глаза. Инъекции выполнялись под хирургическим микроскопом для визуализации входа пипетки в соответствующее место и подтверждения доставки раствора в камеру стекловидного тела.

    ДНК-конструкция, упаковка AAV2 и инфекция нейронов

    Векторы AAV2, используемые для экспрессии EGFP и shRNA, были сконструированы и упакованы VectorBuilder (Cyagen Biosciences, Санта-Клара, Калифорния). Последовательности shRNA перечислены ниже. Вся экспрессия shRNA управлялась промотором U6, тогда как индикатор EGFP управлялся промотором фосфоглицераткиназы (PGK). Последовательности векторов следующие:

    IFT88: 5’-TTGACGAAGACGATAAATATA CTCGAG TATATTTATCGTCTTCGTCAA-3 ’

    Kif2a: 5’-CCTGGGATGTGATGGTTATTT CTCGAG AAATAACCATCACATCCCAGG-3 ’

    HEF1: 5’-GAAAGGACTGGTTGAATAATT CTCGAG AATTATTCAACCAGTCCTTTC-3 ’

    PLK1: 5’-CCTCTCACAGTCCTTAATAAA CTCGAG TTTATTAAGGACTGTGAGAGG-3 ’

    NDE1 5’-ACTTCCAGCTGAAGCTATATT CTCGAG AATATAGCTTCAGCTGGAAGT-3 ’

    Контроль: 5’-CCTAAGGTTAAGTCGCCCTCG CTCGAG CGAGGGCGACTTAACCTTAGG-3 ’

    TCHP: 5’-GAGGTCACACACTGCTTTATA CTCGAG TATAAAGCAGTGTGTGACCTC-3 ’

    RGC были инфицированы AAV2 путем внутриглазной инъекции 4 мкл исходного титра вируса (> 10 11 GC) и 1 мкл 0.0002% проназы E (Sigma-Aldrich Corp., Оквилл, Онтарио) для переваривания внутренней ограничивающей мембраны сетчатки и улучшения проникновения вируса через GCL. Все инъекции проводились в лабораториях BSL2 животноводческого центра U of T персоналом, обученным биобезопасности и обращению с AAV2. Приблизительно 3 недели давали на экспрессию shРНК перед перерезкой зрительного нерва или экстракцией сетчатки.

    Вестерн-блоттинг

    Животных анестезировали в камере, содержащей 4% изофлурана, чтобы уменьшить страдания перед эвтаназией из-за смещения шейных позвонков.Глубина анестезии подтверждена защемлением пальца стопы. Глаза были энуклеированы, и сетчатку немедленно экстрагировали ледяным PBS. Сетчатку по отдельности обрабатывали ультразвуком в 400 мкл растворов ледяного SDS-буфера для лизиса (2% SDS, 0,3% DTT, 10% глицерина в 40 мМ Трис-Cl, pH 6,8) перед денатурацией (нагревали до 90 ° C в течение 8 минут). и удаление клеточного мусора центрифугированием (12000 об / мин, 10 мин, 4 ° C). Белки разделяли с помощью SDS-PAGE на 4–20% полиакриламидных гелях Bio-Rad TGX, а затем переносили полусухим методом на 0.Нитроцеллюлозная мембрана с размером пор 2 мкм. Мембраны блокировали в 5% молочном растворе на 1 час при комнатной температуре. Первичные антитела растворяли в 1% молоке, и блоты инкубировали в растворе в течение ночи при 4 ° C на платформе-качалке. Вторичное антитело конъюгировали с HRP, и блоты инкубировали во вторичном режиме в течение 1 часа при комнатной температуре на платформе-качалке. Визуализацию выполняли с использованием тепловизора Bio-Rad Fluor-S Max (Bio-Rad, Mississauga, ON). Нагрузку проверяли повторным зондированием блотов антисывороткой, направленной против GAPDH (1: 1000; кроличьи поликлональные; Cell Signaling Technology).

    Иммуногистохимия и количественная оценка выживаемости RGC

    Сетчатка для плоского монтажа.

    Животных анестезировали в камере, содержащей 4% изофлурана, чтобы уменьшить страдания перед эвтаназией из-за смещения шейки матки. Глубина анестезии подтверждена защемлением пальца стопы. Животных умерщвляли через 7 или 14 дней после перерезки зрительного нерва. Глаза были энуклеированы, и наглазники, содержащие сетчатку, были зафиксированы в 4% параформальдегиде (PFA) (Bioshop Canada Inc., Берлингтон, ОН) в течение 1 часа при комнатной температуре.Затем сетчатку экстрагировали, промывали 3 × 10 мин в PBS и блокировали в PBS, содержащем 0,3% Triton X-100 (TPBS), 3% нормальную ослиную сыворотку (NDS) (Sigma-Aldrich Corp., Oakville, ON) и 1 % Бычьего сывороточного альбумина (BSA) (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс) в течение 1 часа. После блокирования образцы инкубировали с первичными антителами в блокирующем растворе в течение ночи при 4 ° C в концентрациях, перечисленных ниже. Образцы промывали 3 × 10 мин в PBS и инкубировали со вторичными антителами, конъюгированными с флуорофорами Cy2 или Cy3 (1: 500) (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA) в течение ночи при 4 ° C. Наконец, образцы промывали 3 × 10 мин в PBS и устанавливали на плоской поверхности. Сетчатку закрывали раствором 50:50 глицерин / PBS и покрывали лаком для ногтей.

    Использовали следующие первичные антитела:

    Кроличьи поликлональные анти-ACIII (Санта-Крус Биотехнология, Даллас, Техас, sc-588, 1: 250), Козьи поликлональные анти-Brn3a (Санта-Крус Биотехнология, Даллас, Техас, sc-31984, 1: 250), мышиные моноклональные антитела -AcTub (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, sc-23950, 1: 100), мышиный моноклональный анти-pRb (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, sc-377528, 1: 250), козий поликлональный анти-SSTR3 (Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас, sc-11617, 1: 250), Мышиные моноклональные антитела против NeuN (United States Biological, Салем, Массачусетс, N2173, 1: 250), Поликлональные анти-RBPMS морских свинок (Phosphosolutions, Aurora, CO, 1832-RBPMS, 1: 500), кроличьи поликлональные анти-RBPMS (Phosphosolutions, Aurora, CO, 1830-RBPMS, 1: 500), козьи поликлональные анти-Ki67 (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, sc-7844, 1: 100),

    Сетчатку глаза визуализировали с помощью камеры Andor iXon 885+ EMCCD (Andor Technology, Белфаст, Северная Ирландия), присоединенной к микроскопу Leica DM LFSA (Leica Microsystems, Конкорд, Канада), с источником света Sutter Lambda XL (Quorum Technologies, Гуэлф, Канада).Для измерения плотности RGC образцы были взяты при трех разных эксцентриситетах квадрантов сетчатки: внутреннем (1/6 радиуса сетчатки от центра), среднем (1/2 радиуса сетчатки от центра), внешнем (5/6 сетчатки от центра). радиус от центра).

    Поперечные срезы сетчатки.

    Животным вводили внутрисердечную перфузию 4% PFA и изолировали наглазник. Наглазник подвергали дальнейшей фиксации в 4% PFA в течение 1 часа при комнатной температуре и промывали PBS (3 × 15 минут). Затем наглазник подвергали криозащите путем погружения в 30% сахарозу в PBS до тех пор, пока ткань не перестала быть плавучей в растворе сахарозы (1-2 дня).Затем сетчатку делали на срезы с помощью микротома-криостата Leica CM1950. Поперечные срезы толщиной 14 мкм собирали на предметные стекла, покрытые APTEX (Sigma-Aldrich Corp., Oakville, ON), и хранили при -20 ° C до проведения иммуноокрашивания.

    Иммуногистохимия выполнялась с антителами, направленными против pRb и RBPMS. Водоотталкивающая граница была нарисована вокруг срезов сетчатки с помощью бумажной ручки, чтобы сконцентрировать раствор антител в образцах. Поперечные срезы нервов инкубировали в течение ночи при 4 ° C с первичными антителами, разведенными в TPBS, содержащем 3% NDS и 1% BSA.После периода инкубации с первичным антителом срезы промывали трижды в PBS в течение 15 минут. После этого следовали 3-часовой инкубационный период с вторичным антителом, конъюгированным с Cy3 (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA), при комнатной температуре и три последующих 15-минутных полоскания в PBS. Затем срезы закрывали смесью 50:50 глицерин / PBS. Образцы исследовали с помощью инвертированного моторизованного микроскопа AxioObserverZ1 (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио), оборудованного CSU-X1 SDC (Yokogawa Canada Inc., Калгари, AB) с камерой высокого разрешения Axiocam 506 (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио). Вариация глубины ткани и фокуса учитывалась во время визуализации путем захвата увеличенной глубины резкости, созданной путем объединения проекций максимальной интенсивности Z-стека в Zen 2 (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио).

    Иммуногистохимия клеточных культур.

    Для иммунофлуоресценции клеточных культур клетки выращивали на покровных стеклах, предварительно покрытых (PDL) (Neuvitro, Vancouver, WA), и фиксировали 4% PFA в течение 10 минут.Покровные стекла промывали 3 раза PBS, повышали проницаемость с помощью TPBS в течение 10 минут и блокировали PBS, содержащим 1% BSA и 3% NDS. Покровные стекла покрывали первичными антителами, разведенными в блокирующем буфере при 4 ° C в течение ночи, и промывали 3 раза PBS перед инкубацией со вторичными антителами в блокирующем растворе при комнатной температуре в течение 1 часа. Первичные и вторичные антитела разводили до указанных выше концентраций.

    TUNEL assay.

    Срезы сетчатки инкубировали в растворе, содержащем 0.67% концевой дезоксинуклеотидилтрансферазы, 0,67% биотина dUTP, 20% CoCl2 (Roche Diagnostics, Индианаполис, Индиана) в течение 2 часов при 37 ° C. Затем образцы промывали 3 × 10 минут 1% -ным твином PBS и инкубировали в 1% -ном растворе PBS-твин с конъюгатом стрептавидина Alexa 555 (1: 750, ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывания 3 × 10 мин 1% PBS твина образцы закрывали и герметизировали в растворе 50:50 глицерин / PBS.

    Z-стеки конфокальной микроскопии с вращающимся диском

    Для создания трехмерных изображений первичных ресничек для измерения длины инвертированный моторизованный микроскоп AxioObserverZ1 (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио), оборудованный SDC CSU-X1 (Yokogawa Canada Inc., Калгари, AB), с камерой высокого разрешения Axiocam 506 (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио) в лаборатории микроскопической визуализации Университета Торонто. . Подобно выборке плотности RGC, изображения были получены при трех различных эксцентриситетах (внутренний, средний, внешний) квадрантов сетчатки с использованием масляной линзы объектива 63x (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио). Z-стеки были созданы из изображений с помощью программного обеспечения Zen 2 (Carl Zeiss Canada Ltd., Торонто, Онтарио). Z-стеки анализировали с использованием Imaris (Bitplane, Белфаст, Соединенное Королевство) для определения длины ресничек.

    Статистический анализ

    Непарный двусторонний t-критерий Стьюдента использовался для определения статистической значимости между двумя группами. Значение p <0,05 считалось статистически значимым. Среднее значение ± стандартная ошибка среднего (SEM) для каждой группы отображается в результатах. GraphPad InStat использовался для проведения статистического анализа (GraphPad Software Inc., Ла-Хойя, Калифорния). Статистически значимые различия между обработками, которые использовались для оценки выживаемости RGC после аксотомии, были рассчитаны с помощью апостериорных тестов Тьюки после ANOVA.

    Результаты

    Сублетальный гипоксический стресс вызывает укорочение ресничек, которое отменяется нормоксией

    Чтобы исследовать, может ли ACC модулироваться первичными ресничками, мы стремились установить, изменяют ли апоптотические стимулы экспрессию ресничек в нейронах. Гипоксическое повреждение использовалось, потому что его можно легко контролировать и прекратить, и было показано, что оно индуцирует повторный вход в клеточный цикл в постмитотических нейронах [25,26].Дифференцированные культуры нейробластомы N1E-115 мыши подвергали гипоксии в течение 5 часов, затем возвращали в нормоксические условия на дополнительные 24 часа. Экспрессию ресничек исследовали с помощью иммунофлуоресценции против маркера аксонемы, ацетилированного альфа-тубулина (AcTub). Первичные реснички наблюдались в прегипоксических культурах нормальных клеток (рис. 1А, слева), но отсутствовали через 5 часов после гипоксии, а AcTub рассредоточен по цитоплазме (рис. 1А, в центре). Напротив, культуры, которые были возвращены в нормоксические условия после гипоксии, демонстрировали повторную экспрессию первичных ресничек, которые были короче по длине по сравнению с прегипоксическими клетками (Рис. 1A, справа).Затем мы измерили жизнеспособность N1E-115 и обнаружили значительное увеличение метаболической активности через 5 часов гипоксии, одновременно с ретракцией ресничек, которая вернулась к нормальным уровням после 24 часов нормоксии (рис. 1C, ** p <0,01). Затем мы воспроизвели эти фенотипы в иммортализованной линии клеток гиппокампа мыши HT-22. Эти клетки также демонстрируют устойчивую экспрессию ресничек (рис. 1B, слева), которая исчезает после гипоксии (рис. 1B, в центре). Кроме того, эти культуры демонстрировали такое же цитоплазматическое распределение AcTub, которое было характерно для клеток N1E-115 после гипоксии.Когда культуры, подвергшиеся воздействию гипоксии, возвращались к 24-часовой нормоксии, культуры аналогичным образом повторно экспрессировали укороченные реснички (рис. 1B, справа). Эти находки подтверждают, что гипоксический инсульт вызывает ретракцию первичных ресничек, и клетки, которые выживают при гипоксии, повторно экспрессируют реснички после первоначального распространения AcTub по цитоплазме.

    Рис. 1. Гипоксия вызывает обратимую резорбцию нейрональных ресничек.

    (A и B) Нормальные клетки N1E-115 (слева A) и культуры HT22 (слева B) демонстрировали первичные реснички (стрелки на A), продемонстрированные иммунофлуоресценцией против Actub.Пять часов гипоксии (в центре) привели к потере первичных ресничек и диффузному окрашиванию Actub в обеих клеточных линиях (средняя панель). После гипоксии 24 часа нормоксии вернули экспрессию первичных ресничек в обеих клеточных линиях (справа). N1E-115 Масштабная линейка = 25 мкм, масштабная шкала HT22 = 10 мкм. (C) Количественная оценка выживаемости клеток N1E-115 с помощью анализа WST-8, показывающая повышенную метаболическую активность через 5 часов гипоксии, которая нормализовалась после 24 часов нормоксии. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего по отношению к норме.** р <0,01.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g001

    Стабильность первичных ресничек влияет на апоптоз нейронов

    in vitro

    После наблюдения корреляции между гипоксическим стрессом и резорбцией ресничек мы оценили, будет ли принудительная разборка ресничек влиять на выживаемость нейронов после травмы. Учитывая, что мутации компонентов IFT препятствуют собственному цилиогенезу и лежат в основе заболеваний, возникающих в результате мальформации ресничек [27,28], мы ингибировали моторный белок dynein, чтобы нарушить сборку и поддержание первичных ресничек.Для этого мы обработали реснитчатые клетки пигментного эпителия сетчатки 1 (RPE1) 30 мкМ цилиобревин D (рис. 2А), ингибитора мотора динеин-АТФазы. Через 24 часа произошла потеря первичных ресничек, замененная дезорганизованной полимеризацией AcTub (рис. 2А, правый столбец), напоминающей расположение тубулина в обработанных гипоксией линиях нейрональных клеток. Учитывая, что цилиобревин D разрушает первичные реснички, мы установили кривую доза-токсичность для цилиобревина D с культурами N1E-115 (Рис. 2B). Цилиобревин D становился токсичным для клеток N1E-115 при концентрациях 10 мкМ и выше (рис. 2B, * p <0.05 и ** p <0,01). Иммуногистохимия для AcTub показала, что 30 мкМ концентрации цилиобревина D вызывали потерю нейритов и ресничек в N1E-115 (рис. 2C).

    Рис. 2. Нарушение IFT удаляет реснички и повышает чувствительность клеток N1E-115 к гипоксии.

    (A) Ингибирование динеина через 24 часа обработки Ciliobrevin D нарушило нормальную организацию аксонемы, что привело к потере первичных ресничек в клетках RPE1 и нарушению организации тубулина (справа). Зеленый = рецептор соматостатина 3, красный = ацетилированный альфа-тубулин.Масштабная линейка = 10 мкм. (B) Кривая токсичности N1E-115 Ciliobrevin D, измеренная с помощью анализа WST-8 (G) (** p <0,01, * p <0,05), демонстрирующая увеличение клеточной токсичности при более высоких концентрациях. (C) Типичные микрофотографии иммунофлуоресценции против AcTub в нормальных клетках N1E-115 для идентификации первичных ресничек (стрелка) по сравнению с культурой, обработанной 30 мкМ Ciliobrevin D (справа). Первичные реснички были потеряны, и невриты также были удалены. (D) Количественная оценка выживаемости N1E-115 с помощью WST-8 после гипоксии. Обработка цилиобревином D увеличивала чувствительность к сублетальной гипоксии по сравнению с контролем ДМСО, который не оказывал эффекта.** р <0,01, * р <0,05. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g002

    Чтобы определить, сенсибилизирует ли клетки к апоптотическим стимулам разрушение ресничек, клетки N1E-115 предварительно обрабатывали в течение ночи минимально токсичными концентрациями 1 мкМ или 10 мкМ Цилиобревин. D. Эти культуры затем подвергали 8-часовой гипоксии, которая была сублетальной для контроля, обработанного ДМСО. Культуры, обработанные как 1 мкМ, так и 10 мкМ Ciliobrevin D, показали значительное увеличение гибели клеток после 8 часов гипоксии по сравнению с контролем (рис. 2D, ** p <0.01), что указывает на то, что потеря ресничек увеличивает чувствительность нейронов к апоптозу.

    Затем мы оценили, может ли предотвращение резорбции ресничек предотвратить дегенерацию нейронов. С этой целью мы культивировали первичные нейроны коры головного мозга крыс, которые несут реснички при созревании (Рис. 3A). Первичные реснички кортикальных нейронов визуализировали с помощью иммунофлуоресценции против аденилилциклазы III (ACIII) [29]. Мы наблюдали, что без каких-либо этапов очистки количество иммунопозитивных клеток GFAP превышало количество нейронов в наших культурах (рис. 3B и 3C), поэтому глиальное загрязнение было устранено обработкой культур AraC.Этопозид, ингибитор топоизомеразы, использовался для повреждения нейронов, поскольку было показано, что он вызывает повторное вступление в клеточный цикл кортикальных нейронов крыс [30]. Более того, Di Giovanni et al. (2005) обнаружили, что ингибиторы CDK флавопиридол, росковитин и оломоуцин снижают гибель клеток после лечения этопозидом in vitro , подтверждая, что соединение является индуктором АСС.

    Рис. 3. Тубастатин A, но не ингибитор Aurora A, защищает очищенные первичные культуры кортикальных нейронов от этопозида.

    (A) Микрофотография, показывающая, что культивируемые первичные кортикальные нейроны покрыты ресничками (стрелки). Масштабные линейки = 10 мкм. (B) Типичные изображения первичных культур кортикальных нейронов с обработкой AraC и без нее, демонстрирующие пролиферацию глиальных клеток в культуре без обработки. Масштабная полоса = 100 мкм. (C) Количественная оценка клеточных культур с обработкой AraC или без нее, показывающая значительно более высокую долю GFAP-положительных клеток в культурах без очистки AraC. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.(D) Типичные изображения кристаллизации МТТ в выживших корковых нейронах после токсичности этопозида в нормальных (необработанных) культурах, контрольных культурах с ДМСО или ТБА. (E) Обработка TBA значительно увеличивала выживаемость клеток после инсульта этопозидом по сравнению с контролем DMSO, но не в культурах, которые не получали AraC. (F) Количественная оценка выживаемости кортикальных нейронов после лечения ингибитором AurA I, показывающая повышенную гибель клеток после повреждения этопозидом.

    https://doi.org/10.1371 / journal.pone.0220056.g003

    Чтобы помешать ретракции ресничек, мы использовали тубастатин A (TBA), ингибитор HDAC6, и ингибитор Aurora Kinase A I (AAi). AAi в 1000 раз более селективен к AurA, чем киназа Aurora B [31]. Тубастатин А является высокоселективным в отношении HDAC6 с 1000-кратной большей селективностью по отношению к другим изоформам, за исключением HDAC8, где он имеет 57-кратную большую избирательность [32]. Было показано, что TBA восстанавливает экспрессию ресничек в холангиокарциноме [33] и предотвращает децилизацию RPE1 за счет сверхэкспрессии HDAC6 [34].Предварительная обработка культур кортикальных нейронов 100 мкМ TBA приводила к значительному увеличению выживаемости от апоптоза, индуцированного этопозидом, по сравнению с контролями DMSO, как измерено с помощью анализа MTT (фиг. 3D и 3E, ** p <0,01). Интересно, что нейропротекторные эффекты TBA были отменены в культурах нейронов, которые не были очищены от глиальных клеток (рис. 3E). Это предполагает, что TBA обеспечивает нейрозащиту посредством ингибирования клеточного цикла, а не стабилизацию экстрацилиарного нейронального тубулина, поскольку он цитотоксичен для делящихся глиальных клеток.Напротив, хотя ингибирование AurA стабилизирует реснички от индуцированной сывороткой резорбции [12], AAi не оказывал нейропротекторного действия для культивируемых кортикальных нейронов крыс (Fig 3F).

    Пересечение зрительного нерва вызывает абортивный клеточный цикл и укорочение ресничек в ганглиозных клетках сетчатки

    Мы дополнительно исследовали взаимосвязь между первичными ресничками и ACC in vivo , используя модель повреждения ЦНС при перерезке зрительного нерва (ONT) у взрослых крыс. ONT приводит к апоптотической дегенерации 90% ганглиозных клеток сетчатки (RGC) в течение 14 дней после аксотомии [35].Во-первых, мы стремились подтвердить ONT как подходящую модель нейронального ACC. Мы исследовали экспрессию pRb в RGCs после ONT, поскольку этот белок клеточного цикла наблюдается в ряде человеческих и экспериментальных моделей патологий ЦНС [25,36-40]. Кроме того, pRb является критическим маркером клеточного деления, инициируя повторное вхождение в клеточный цикл [41]. Через 1, 4 и 7 дней после ONT сетчатки были подвергнуты криосрезу и RGC были идентифицированы путем зондирования РНК-связывающего белка с помощью множественного сплайсинга (RBPMS). Наивные крысы не показали экспрессии pRb в RGC, тогда как RGC через 1, 4 и 7 дней после аксотомии показали заметное ядерное окрашивание на pRb (рис. 4A), подтверждая, что ONT индуцировал клеточный цикл.Поскольку экспрессия pRb была ограничена слоем ганглиозных клеток (GCL), мы провели вестерн-блот-анализ целых лизатов сетчатки и аналогичным образом обнаружили повышение pRb через 1, 4 и 7 дней после ONT (рис. 4B).

    Рис. 4. ONT индуцирует экспрессию pRb.

    (A) Иммунофлуоресцентные микрофотографии поперечных срезов сетчатки, показывающие ядерную экспрессию pRb в RGC после ONT, через 1, 4 или 7 дней после аксотомии. Масштабная линейка = 100 мкм. (B) Вестерн-блоттинг целых лизатов сетчатки, демонстрирующий повышенные уровни pRb в пересеченных сетчатках.Каждая полоса представляет собой целую сетчатку.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g004

    Чтобы дополнить экспрессию pRb, мы исследовали Ki67, который обнаруживается во всех фазах клеточного цикла и, как сообщается, присутствует во время ACC [26 , 38,42]. Мы обнаружили положительную иммунореактивность Ki67 в GCL аксотомированных сетчаток (рис. 5A). Кроме того, мы также обнаружили фрагментацию ДНК с помощью анализа TUNEL в аксотомизированных RGC (рис. 5B), который подтвердил, что апоптоз происходил одновременно с цикличностью клеток.

    Рис. 5. ONT индуцирует экспрессию Ki67 и повреждение ДНК в RGC.

    (A) Иммунофлуоресцентные микрофотографии поперечных срезов сетчатки, показывающие диффузную экспрессию Ki67 в GCL после ONT, через 1, 4 или 7 дней после аксотомии. Масштабная линейка = 50 мкм. (B) Иммунофлуоресцентные микрофотографии поперечных срезов сетчатки, показывающие экспрессию TUNEL в RGC после ONT, через 1, 4 или 7 дней после аксотомии. Масштабная линейка = 50 мкм.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g005

    После подтверждения того, что аксотомированные RGCs подвергались ACC, мы предположили, что будет происходить укорочение или полная потеря ресничек RGC после ONT. Чтобы точно определить длину первичных ресничек, реснички визуализировали в трехмерных Z-стеках с помощью конфокальной микроскопии (Рис. 6A). RGCs были идентифицированы с использованием Brn3α, ядерного маркера, который маркирует более 90% RGCs [43]. Используя 3D-реконструкции GCL, мы количественно определили длину ресничек RGC из наивных сетчаток, а также сетчатки через 7, 10 и 14 дней после ONT.Сначала мы оценили общую длину ресничек по разным эксцентриситетам сетчатки (внутренняя, средняя, ​​внешняя) в указанные моменты времени (рис. 6С). Было отмечено значительное уменьшение длины ресничек после аксотомии при всех эксцентриситетах сетчатки; аксотомизированные RGCs содержат реснички, которые были примерно вдвое короче тех, что обнаруживаются в нормальных RGCs (Рис. 6C, ** p <0,01). Чтобы лучше понять изменения длины ресничек после ONT, реснички были расслоены на короткие (<4 мкм), средние (4-7,5 мкм) и длинные группы (> 7.5 мкм) (рис. 6D). Это выявило непрерывные изменения доли длины ресничек во всех измеренных временных точках после аксотомии. Это выявило резкое уменьшение доли длинных ресничек вместе с увеличением доли коротких ресничек (Рис. 6D, ** p <0,01). Доля ресничек средней длины оставалась стабильной через 7 дней после аксотомии; однако наблюдалось значительное увеличение их доли через 10 дней после аксотомии, возможно, из-за продолжающегося исчезновения коротких ресничек за счет полной резорбции (Рис. 6D, * p <0.05).

    Рис. 6. ONT вызывает укорочение ресничек в RGC.

    (A) Репрезентативное изображение создания трехмерных вокселей иммуноокрашивания для ресничек (серый) и ядер RGC (красный), используемых в количественной оценке ресничек. (B) Слева: репрезентативное изображение иммунофлуоресцентного Z-стека наивной сетчатки, показывающее ядра RGC (красный) и реснички (зеленый). Справа: репрезентативное изображение иммунофлуоресцентного Z-стека сетчатки через 14 дней после ONT. Шкала шкалы = 20 мкМ. (C) Средняя длина первичных ресничек RGC (мкМ) ± SEM, до и после ONT.** р <0,01. (D) Количественная оценка ресничек RGC в нормальной и аксотомированной сетчатке, стратифицированной по длине. ONT индуцировал значительное увеличение доли коротких ресничек и резкое уменьшение доли длинных ресничек в каждый момент времени после ONT. ** р <0,01. * р <0,05. (E) Среднее количество первичных ресничек RGC ± SEM, определенное количественно до и после ONT. ** р <0,01. (F) Средний процент реснитчатых RGC ± SEM. Ресничные RGC были значительно уменьшены после аксотомии, что указывает на полную потерю ресничек в некоторых RGC после повреждения (* p <0.05, ** p <0,01). Всего было измерено> 50 ресничек для каждой группы, n = 3 сетчатки на группу.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g006

    Как и ожидалось, количество ресничек RGC уменьшилось со временем, которое коррелировало со смертью RGC после ONT [35], со значительным сокращением количества ресничек. через 7 дней после ONT, который продолжался до 14 дней (рис. 6E, ** p <0,01). Более того, процент реснитчатых RGC значительно снизился после ONT (рис. 6F, * p <0.05, ** p <0,01). В нормальных сетчатках можно было объяснить 88,5 ± 2,5% ресничек RGC, но это уменьшилось до 71,0 ± 5% через 7 дней после аксотомии (** p <0,01), а затем снизилось до 60 ± 5,7% через 10 дней (* р <0,05). Интересно, что через 14 дней после травмы наблюдалось увеличение ресничек RGC. Это может быть связано с замедлением гибели RGC через 2 недели после ONT и увеличенной выживаемостью оставшихся RGC [35,44], приводящей к более высокой доле реснитчатых клеток, которые выжили после ACC.

    Модуляция резорбции ресничек влияет на чувствительность ганглиозных клеток сетчатки к апоптозу

    Продемонстрировав, что поврежденные RGCs одновременно претерпевают клеточный цикл и резорбцию ресничек, мы стремились связать два явления, манипулируя стабильностью ресничек и исследуя его влияние на выживаемость нейронов.Во-первых, мы нацелились на специфический для ресничек белок IFT88 для нокдауна. IFT88 является белковой субъединицей внутрижгутикового комплекса B, и его мутации приводят к неспособности образовывать реснички [45,46]. Мы стабильно трансдуцировали RGC с помощью shRNA, кодирующих вирусные векторы, посредством внутриглазной инъекции аденоассоциированного вируса 2 (AAV2) (> 4 × 10 8 GC на сетчатку) (рис. 7A, справа). Конфокальные Z-стеки показали, что через 3 недели после вирусной инъекции положительные по shРНК EGFP-IFT88 клетки демонстрировали значительно более короткие реснички (2.4 ± 0,9 мкм) по сравнению с нормальными и контрольными RGC, обработанными shРНК (фиг. 7B, 5,6 ± 1,0 мкм и 6,1 ± 1,0 мкм, ** p <0,01). Кроме того, процент мерцательных клеток значительно снизился в сетчатке, обработанной IFT88 shRNA (47,1 ± 6,0%), по сравнению с нормальной и контрольной сетчаткой (90,9 ± 2,5% и 89,7 ± 1,3%, рис. 7C, ** p <0,01). Затем проводили ONT на крысах, обработанных векторами, кодирующими shRNA IFT88. По сравнению с контрольной shRNA, сетчатка, экспрессирующая shRNA IFT88, показала значительно сниженную выживаемость RGC при всех эксцентриситетах сетчатки через 7 дней после аксотомии (рис. 7D и 7E, ** p <0.01).

    Рис. 7. КшРНК IFT88 укорачивает реснички и усиливает дегенерацию RGC после ONT.

    (A) Слева: микрофотографии сетчатки, установленной на плоской поверхности, демонстрирующие иммуномечение ACIII первичных ресничек в RBPMS-положительных RGC. Справа: микрофотографии, показывающие GFP-положительные RGC, экспрессирующие векторы AAV2, кодирующие кшРНК IFT88. Масштабные линейки = 10 мкм. (B и C) Длина ресничек RGC (B) и доля реснитчатых RGC (C) уменьшались через 3 недели после инъекции вектора AAV2-IFT88-shRNA. ** р <0,01. (D) Типичные эпифлуоресцентные микрофотографии иммуномеченных RBPMS RGC во внутреннем эксцентриситете плоских сетчаток через 7 дней после ONT, экспрессирующих контрольную shRNA (вверху) или IFT88 shRNA (внизу).Масштабная линейка = 100 мкм. (E) Количественная оценка RGC, показывающая, что экспрессия кшРНК IFT88 значительно снижает выживаемость RGC через 7 дней после ONT по сравнению с контрольной шпилькой со скремблированием. ** p <0,01, n = 4 сетчатки.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g007

    Поскольку усечение ресничек усугубило гибель RGC после ONT, мы проверили противоположную возможность, что стабилизация ресничек фармакологическим ингибированием белков разборки ресничек может способствовать выживанию RGC. TBA (6.8 мкг / мкл) или AAi (2,9 мкг / мкл), разведенные в ДМСО, вводили отдельно в камеру стекловидного тела через 3 и 7 дней после ONT. Сетчатку извлекали через 2 недели после ONT, и выживаемость RGC количественно определяли с помощью иммуномечения RBPMS [24]. Наблюдалось значительное увеличение выживаемости RGC после лечения TBA или AAi при количественной оценке через 14 дней после аксотомии (рис. 8A и 8B, ** p <0,01).

    Рис. 8. Ингибирование разборки ресничек защищает RGC и подавляет клеточный цикл после ONT.

    (A) Типичные эпифлуоресцентные микрофотографии, показывающие RGC, иммуно меченные RBPMS, во внутреннем эксцентриситете плоских сетчаток через 14 дней после ONT, с обработкой DMSO (вверху) или TBA (внизу).Масштабная линейка = 100 мкм. (B) Количественная оценка RGC после интравитреальной инъекции TBA (n = 4 сетчатки) или ингибитора AurA I (n = 5 сетчатки), демонстрирующая значительно увеличенную выживаемость RGC через 14 дней после ONT по сравнению с контрольной обработкой DMSO (** p < 0,01). (C) Эпифлуоресцентные микрофотографии, показывающие RGC с иммуноактивными RBPMS в среднем эксцентриситете плоских сетчаток через 14 дней после ONT, после доставки контроля (скремблированная shRNA) или AAV-HEF1-shRNA. Масштабная линейка = 100 мкм. (D) Количественная оценка выживаемости RGC через 14 дней после ONT с опосредованной AAV2 экспрессией shРНК, нацеленной на HEF1, NDE1, PLK1 или Kif2a.ShRNA значительно увеличивали выживаемость аксотомированных RGC по сравнению с скремблированным контролем (n = 4 сетчатки на обработку) (** p <0,01, * p <0,05). (E) Вестерн-блоттинг целых лизатов сетчатки из нормальной сетчатки или сетчатки через 5 дней после ONT, причем каждая полоса представляет собой целую сетчатку. ShRNA против HEF1, Kif2a, NDE1, PLK1 или TCHP снижали уровни pRb по сравнению со скремблированной контрольной shRNA.

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220056.g008

    Основываясь на этих находках, мы нацелены на дополнительные белки разборки ресничек для AAV-опосредованного нокдауна с помощью shRNA.Нокдаун HEF1, PLK1 или Kif2a приводил к значительному улучшению выживаемости RGC при всех эксцентриситетах сетчатки (рис. 8C и 8D, ** p <0,01) по сравнению с сетчатками, которые получали контрольные (скремблированные) вирусные векторы, экспрессирующие shРНК. Кроме того, нокдаун NDE1 привел к значительному увеличению RGC в среднем и внешнем эксцентриситетах (рис. 8D, * p <0,05) по сравнению с контролем.

    Наконец, мы исследовали экспрессию pRb с помощью вестерн-блоттинга в сетчатках, обработанных AAV-shRNA, через 4 дня после ONT.Повышенные уровни pRb, которые были обнаружены в сетчатках, экспрессирующих контрольную shRNA, были снижены в сетчатках, экспрессирующих shRNA против HEF1, Kif2a, NDE1, PLK1 или Trichoplein (рис. 8E). В совокупности эти находки показывают, что разборка ресничек играет роль в инициации абортивного повторного входа в клеточный цикл, и вмешательство в процесс ресорбции ресничек может ослабить клеточный цикл и апоптоз нейронов в нейронах ЦНС взрослых млекопитающих.

    Обсуждение

    Участие повторного входа клеточного цикла в апоптоз нейронов было продемонстрировано на животных моделях и патологоанатомических исследованиях ЦНС человека [5].Первичные реснички очень важны в этом отношении, так как признано, что они являются привратниками клеточного цикла, секвестрируя центриоли на клеточной мембране [21]. Насколько нам известно, это первая демонстрация того, что повреждение нейронов вызывает укорочение первичных ресничек и что ингибирование механизма разборки ресничек снижает повторное вступление в клеточный цикл. Таким образом, мы обращаемся к несоответствию, которое существует между знанием о контроле цилиарного клеточного цикла и наблюдением повторного входа в клеточный цикл при нейрональных заболеваниях и повреждениях.

    Мы обнаружили, что как гипоксия, так и ONT индуцируют укорочение ресничек в линиях нейрональных клеток и RGCs соответственно. В сочетании с предыдущими исследованиями, показывающими, что ACC инициируется в др. Моделях апоптоза нейронов, это наблюдение подчеркивает связь между резорбцией ресничек и инициацией передачи сигналов пролиферации [26,47]. Кроме того, повышенная метаболическая активность клеток N1E-115, наблюдаемая через 5 часов гипоксического стресса, соответствует энергоемкому характеру активации клеточного цикла.Когда клетки возвращались к нормоксии и метаболическая активность нормализовалась, происходила одновременная повторная экспрессия первичных ресничек, указывающая на возможное обращение инициации клеточного цикла и спасение выживших клеток. Кроме того, мы продемонстрировали, что укорочение первичных ресничек усиливает апоптоз, поскольку оно сенсибилизирует культивируемые нейроны к гипоксии и ускоряет дегенерацию RGCs после ONT. Это предположительно происходит за счет ускоренного входа в ACC, потому что было показано, что более длинные реснички задерживают прогрессирование клеточного цикла [17].

    В отличие от принудительного укорачивания ресничек, фармакологическое ингибирование HDAC6 защищает культуры кортикальных нейронов от апоптоза, индуцированного этопозидом; однако только культуры нейронов, которые были очищены от глиального загрязнения, обладали этим преимуществом, что указывает на то, что TBA действует через ингибирование клеточного цикла и токсичен для других митотических клеток. Напротив, ингибирование AurA увеличивает гибель кортикальных нейронов. Это может быть связано с ранней ролью AurA в удлинении нейритов за счет активации белка ядерного распределения nudE-like1 [48].AurA обильно экспрессируется в молодых постмитотических нейронах, и его ингибирование может отрицательно повлиять на растущую культуру кортикальных нейронов, маскируя любые защитные эффекты стабилизации ресничек. Это подчеркивает, что некоторые функции белков перекрываются между нейрогенезом и разборкой ресничек, вероятно, связанными со способностью реорганизовывать тубулин и важностью инактивации при созревании нейронов. Ингибирование HDAC6 и AurA вместе с нокдауном shRNA HEF1, NDE1, PLK1 или Kif2a оказывало нейрозащитное действие по отношению к RGC после ONT.Более того, эти обработки, наряду с нокдауном TCHP, снижали уровни экспрессии pRb в RGC после ONT, демонстрируя, что нейропротекция происходит посредством первичного опосредованного ресничками подавления ACC. Снижение уровней pRb является решающим признаком прекращения клеточного цикла, поскольку pRb означает преодоление точки рестрикции, когда клетка необратимо предана пролиферации [49]. Это уменьшение pRb дополняет предыдущие открытия, что активность белков разборки ресничек повышается в прогрессии клеточного цикла, но их нокдаун или ингибирование отменяет пролиферацию [13,17,50-52].

    Дополнительные белки, участвующие в разборке ресничек, которые не были исследованы в нашем исследовании, но заслуживают упоминания, это Pitchfork (Pifo) и Tctex. Pifo активирует AurA и концентрируется в базальном теле узловых ресничек эмбрионов мышей на ранних стадиях разборки ресничек [53]. Tctex-1 представляет собой компонент легкой цепи динеина, который активирует локальную полимеризацию F-актина, чтобы запустить эндоцитоз цилиарного кармана и ускорить резорбцию ресничек [54]. Гаплонедостаточность Pifo приводит к дефектам разборки ресничек [53], тогда как нокдаун shRNA Tctex-1 нарушает резорбцию ресничек, вызывая преждевременную дифференцировку нейральных клеток-предшественников [55].Нацеливание на эти белки при апоптозе нейронов может представлять интерес для будущих исследований ACC.

    Общность ACC подтверждается его наблюдением на животных моделях болезней Альцгеймера, Хантингтона и Паркинсона, а также инсульта и черепно-мозговой травмы [36,56-59]. Более того, митогенные маркеры, такие как ядерный антиген пролиферирующих клеток, pRb, циклины и CDK, были обнаружены в образцах ЦНС пациентов с болезнью Альцгеймера и Паркинсона, тогда как пациенты с болезнью Хантингтона и БАС продемонстрировали повышенные уровни pRB и циклина D1 в ЦНС.Это подчеркивает важность изучения механизмов контроля клеточного цикла, которые применимы к множеству моделей дегенерации ЦНС, с целью разработки терапевтических стратегий для этих неизлечимых заболеваний. С этой целью повсеместность первичных ресничек среди нейронов и их широкий контроль над клеточным циклом делают реснички идеальной мишенью для предотвращения нейрональной патологии в ЦНС взрослых.

    Наше исследование сфокусировано на компоненте разборки ресничек, но механизм, с помощью которого резорбция передается в цитоплазму или ядро, полностью не изучен [60].Предполагается, что ресничный контроль клеточного цикла происходит посредством секвестрации регуляторов клеточного цикла внутри органелл. Таким образом, втягивание ресничек высвобождает эти молекулярные сигналы в ядро, чтобы инициировать клеточный цикл [60,61]. Это может происходить посредством путей передачи сигналов Wnt и Hh, которые модулируются ресничками [60,61]. Активация канонического пути Wnt приводит к накоплению β-катенина, который активирует транскрипцию циклина D [62]. Джуберин (Jbn) связывается с β-катенином, чтобы предотвратить его протеасомную деградацию и помогает перемещать его в ядро ​​[63].Lancaster et al. (2011) продемонстрировали, что в эмбриональных фибробластах мышей (MEF) первичные реснички секвестируют Jbn от тела клетки с помощью IFT и нарушение ретроградного IFT вызывает накопление Jbn на дистальном конце ресничек. Кроме того, индукция бицилитации в клетках MEF снижает ядерный β-катенин и ответ Wnt [64]. Это указывает на то, что разборка ресничек высвобождает дополнительный Jbn в цитозоль, чтобы увеличить зависимую от β catenin активацию клеточного цикла [61,64].

    Передача сигналов

    Hh происходит через его поверхностные рецепторы, Patched (Ptc), и его эффекторы Hh, факторы транскрипции Gli1-3, которые локализованы внутри ресничек [65].Эти эффекторы активируют гены, участвующие в пролиферации и метастазировании [66]. В отсутствие Hh Gli2 неактивен, а Gli3 процессируется в свою репрессорную форму Gli3R в ресничках [67]. При стимуляции Hh Ptc снимает ингибирование Smo, который перемещается в ресничку, чтобы предотвратить процессинг Gli3R. Это активирует Gli2, чтобы способствовать транскрипции Gli1 [65,68,69]. Gli1-3 затем способствует транскрипции Cyclin D, Cyclin E и E2F1, чтобы ускорить переход G1 / S [70]. Поскольку и Gli, и Jbn концентрируются в ресничках [65], деконструкция органелл с помощью HDAC6 и его активаторов может высвобождать эти факторы в ядро, чтобы инициировать пролиферацию [61].Дальнейшее выяснение этого механизма представляет собой следующий шаг в понимании цилиарной регуляции ACC. В заключение, наше исследование далее разрушает давнюю догму о том, что первичные реснички являются рудиментарными органеллами, демонстрируя их важность в поддержании покоя нейронов и регуляции запрограммированной гибели клеток в ЦНС взрослых млекопитающих.

    Благодарности

    Мы хотели бы поблагодарить доктора Моше Кима из лаборатории доктора Уильяма Тримбла в Центре Питера Гилгана за его щедрое пожертвование линии клеток RPE1 и Dr.Джереми Сивак из Исследовательского института Крембил за щедрое пожертвование линии клеток HT22.

    Ссылки

    1. 1. Джордан-Скиутто К.Л., Дорси Р., Чалович Е.М., Хаммонд Р.Р., Ахим К.Л. Паттерны экспрессии белка ретинобластомы при болезни Паркинсона. J Neuropathol Exp Neurol. 2003. 62 (1): 68–74. pmid: 12528819
    2. 2. Чжу X, Райна А. К., Перри Г., Смит М. А.. Болезнь Альцгеймера: гипотеза двух ударов. Lancet Neurol. 2004. 3 (4): 219–26. pmid: 15039034
    3. 3.Рашидиан Дж., Иирхиаро ГО, Парк ДС. Машины клеточного цикла и инсульт. Biochim Biophys Acta — Mol Basis Dis. 2007; 1772 (4): 484–93.
    4. 4. Ди Джованни С., Мовсесян В., Ахмед Ф., Чернак И., Шинелли С., Стойка Б. и др. Ингибирование клеточного цикла обеспечивает нейрозащиту и снижает глиальную пролиферацию и образование рубцов после черепно-мозговой травмы. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2005; 102 (23): 8333–8. pmid: 150
    5. 5. Folch J, Junyent F, Verdaguer E, Auladell C, Pizarro JG, Beas-Zarate C и др.Роль повторного входа в клеточный цикл в нейронах: общий апоптотический механизм гибели нейрональных клеток. Neurotox Res. 2012. 22 (3): 195–207. pmid: 21965004
    6. 6. Dai Y, Grant S. Низкомолекулярные ингибиторы, нацеленные на циклин-зависимые киназы в качестве противораковых агентов. Curr Oncol Rep. 2004; 6 (2): 123–30. pmid: 14751090
    7. 7. Tian D-S, Yu Z-Y, Xie M-J, Bu B-T, Witte OW, Wang W. Подавление образования астроглиальных рубцов и усиленная регенерация аксонов, связанная с функциональным восстановлением на модели повреждения спинного мозга на крысах с помощью ингибитора клеточного цикла оломоуцина.J Neurosci Res. 2006. 84 (5): 1053–63. pmid: 16862564
    8. 8. Менн Б., Бах С., Блевинс Т.Л., Кэмпбелл М., Мейер Л., Тимсит С. Отсроченное лечение системным (S) -росковитином обеспечивает нейропротекцию и ингибирует повышение активности CDK5 in vivo в моделях инсульта у животных. PLoS One. 2010; 5 (8): e12117. pmid: 20711428
    9. 9. Сатир П., Кристенсен СТ. Обзор структуры и функции ресничек млекопитающих. Annu Rev Physiol. 2007. 69 (1): 377–400.
    10. 10. Сатир П.Исследования ресничек. J Cell Biol. 1968; 39.
    11. 11. Нигг EA, Рафф JW. Центриоли, центросомы и реснички в здоровье и болезнях. Клетка. 2009. 139 (4): 663–78. pmid: 193
    12. 12. Пугачева Е.Н., Яблонски С.А., Хартман Т.Р., Хенске Е.П., Големис Е.А. HEF1-зависимая активация Aurora A вызывает разборку первичной реснички. Клетка. 2007. 129 (7): 1351–63. pmid: 17604723
    13. 13. Иноко А., Мацуяма М., Гото Х., Омуро-Мацуяма Й., Хаяси Ю., Эномото М. и др.Трихоплейн и Аврора Блокируют аберрантную сборку первичных ресничек в пролиферирующих клетках. J Cell Biol. 2012 30 апреля; 197 (3): 391–405. pmid: 22529102
    14. 14. Ли KH, Johmura Y, Yu L-R, Park JE, Gao Y, Bang JK и др. Идентификация нового Wnt5a-CK1ɛ-Dvl2-Plk1-обеспечиваемого пути разборки первичных ресничек. EMBO J. 18 июля 2012 г.; 31 (14): 3104–17. pmid: 22609948
    15. 15. Ван Г, Чен Кью, Чжан Х, Чжан Б, Чжо Х, Лю Дж и др. PCM1 рекрутирует Plk1 в перицентриолярный матрикс, чтобы способствовать разборке первичных ресничек перед входом в митоз.J Cell Sci. 2013. 126 (6): 1355–65.
    16. 16. Миямото Т., Хособа К., Очиай Х., Ройба Э., Изуми Х., Сакума Т. и др. Активность митотического кинезинового белка KIF2A по деполимеризации микротрубочек приводит к разборке первичных ресничек в сочетании с пролиферацией клеток. Cell Rep.2015; 10 (5): 664–73. pmid: 25660017
    17. 17. Ким С., Заглул Н.А., Бубенщикова Е., О, Э.С., Ранкин С., Кацанис Н. и др. Nde1-опосредованное ингибирование цилиогенеза влияет на повторный вход в клеточный цикл. Nat Cell Biol.2011; 13 (4): 351–60. pmid: 21394081
    18. 18. Коул Д.Г., Динер Д.Р., Химельблау А.Л., Бук П.Л., Фустер Дж.С., Розенбаум Дж.Л. Chlamydomonas kinesin-II-зависимый внутрижладжковый транспорт (IFT): частицы IFT содержат белки, необходимые для сборки ресничек в сенсорных нейронах Caenorhabditis elegans. J Cell Biol. 1998; 141.
    19. 19. Хассуна Н.Б., Банч Т.А., Макдермотт К.М. Молекулярные пути: роль первичных ресничек в прогрессировании рака и терапии с акцентом на передачу сигналов ежа.Clin Cancer Res. 2012; 18 (9): 2429 LP– 2435.
    20. 20. Цао М., Чжун К. Реснички при аутофагии и раке. Реснички. 2016; 5: 4. pmid: 26848389
    21. 21. Плотникова О.В., Пугачева Е.Н., Големис Е.А. Первичные реснички и клеточный цикл. Методы Cell Biol. 2009; 94: 137–60. pmid: 20362089
    22. 22. Идзава И., Гото Х., Касахара К., Инагаки М. Актуальные темы функциональных связей между первичными ресничками и клеточным циклом. Vol. 4, Реснички. 2015. с. 12.
    23. 23. Беркелаар М., Кларк Д.Б., Ван Ю.К., Брей Г.М., Агуайо А.Дж.Аксотомия приводит к замедленной гибели и апоптозу ганглиозных клеток сетчатки у взрослых крыс. J Neurosci. 1994. 14 (7): 4368–74. pmid: 8027784
    24. 24. Магариус М.М., Д’Онофрио П.М., Коберле П.Д. Пересечение зрительного нерва: модель апоптоза взрослых нейронов в центральной нервной системе. J Vis Exp. 2011; (51): 2241.
    25. 25. Юй Ю, Рен Кью Джи, Чжан Зи Х, Чжоу К., Ю Зи Й, Ло Х и др. Фосфо-Rb, опосредующий повторный вход клеточного цикла, вызывает ранний апоптоз после кислородно-глюкозной депривации в корковых нейронах крыс.Neurochem Res. 2012; 37 (3): 503–11. pmid: 22037842
    26. 26. Куан Си-И, Шлёмер А.Дж., Лу А., Бернс К.А., Венг В.Л., Уильямс М.Т. и др. Гипоксия-ишемия вызывает синтез ДНК без пролиферации клеток в умирающих нейронах мозга взрослых грызунов. J Neurosci. 2004. 24 (47): 10763–72. pmid: 15564594
    27. 27. Карлен Б., Стенрам У. Первичная цилиарная дискинезия: обзор. Ultrastruct Pathol. 2005. 29 (3–4): 217–20. pmid: 16036877
    28. 28. Розенбаум JL, Уитман GB.Внутрилагеллярный транспорт. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002; 3.
    29. 29. Bishop GA, Berbari NF, Lewis J, Mykytyn K. Аденилилциклаза типа III локализуется в первичных ресничках по всему мозгу взрослой мыши. J Comp Neurol. 2007. 505 (5): 562–71. pmid: 173
    30. 30. Круман II, Версто Р.П., Кардозо-Пелаез Ф., Смиленов Л., Чан С.Л., Чрест Ф.Дж. и др. Активация клеточного цикла связана с гибелью нейронных клеток, вызванной повреждением ДНК. Нейрон. 2004. 41 (4): 549–61. pmid: 14980204
    31. 31.Алиагас-Мартин I, Бердик Д., Корсон Л., Дотсон Дж., Драммонд Дж., Филдс С. и др. Класс 2,4-бисанилинопиримидиновых ингибиторов Aurora A с необычно высокой селективностью против Aurora B . J Med Chem. 2009. 52 (10): 3300–7. pmid: 19402633
    32. 32. Батлер К. В., Калин Дж., Брошьер С., Вистоли Дж., Лэнгли Б., Козиковски А. П.. Рациональный дизайн и простой химический состав позволяют получить превосходный нейропротекторный ингибитор HDAC6, тубастатин A. J Am Chem Soc. 2010. 132 (31): 10842–6. pmid: 20614936
    33. 33.Gradilone SA, Radtke BN, Bogert PS, Huang BQ, Gajdos GB, LaRusso NF. Ингибирование HDAC6 восстанавливает экспрессию ресничек и снижает рост опухоли. Cancer Res. 2013; 73 (7): 2259 LP– 2270.
    34. 34. Ran J, Yang Y, Li D, Liu M, Zhou J. Деацетилирование α-тубулина и кортактина необходимо для HDAC6, чтобы запустить разборку ресничек. Научный доклад 2015; 5: 12917. pmid: 26246421
    35. 35. Член парламента Вильегас-Перес, М. Видал-Санс, ГМ Брей, А.Дж. Агуайо. Влияние трансплантатов периферических нервов на выживание и рост аксотомированных ганглиозных клеток сетчатки у взрослых крыс.J Neurosci. 1988. 8 (1): 265–80. pmid: 2448429
    36. 36. Höglinger GU, Breunig JJ, Depboylu C, Rouaux C, Michel PP, Alvarez-fischer D, et al. Путь клеточного цикла pRb / E2F опосредует гибель клеток при болезни Паркинсона. Proc Natl Acad Sci USA. 2007. 104 (9): 3585–90. pmid: 17360686
    37. 37. Ранганатан С., Баузер Р. Изменения в регуляторах клеточного цикла фазы G (1) на S при боковом амиотрофическом склерозе. Am J Pathol. 2003. 162 (3): 823–35. pmid: 12598317
    38. 38.Абсалон С, Кочанек Д.М., Рагхаван В, Кричевский А.М. MiR-26b, активируемый при болезни Альцгеймера, активирует вступление в клеточный цикл, тау-фосфорилирование и апоптоз в постмитотических нейронах. J Neurosci. 2013. 33 (37): 14645–59. pmid: 24027266
    39. 39. Gendron TF, Mealing GAR, Paris J, Lou A, Edwards A, Hou ST и др. Ослабление нейротоксичности в кортикальных культурах и срезах гиппокампа мышей с нокаутом E2F1. J Neurochem. 2001. 78 (2): 316–24. pmid: 11461967
    40. 40.Ван Ф., Корбетт Д., Осуга Х., Осуга С., Икеда Дж. Э., Slack RS и др. Ингибирование циклинзависимых киназ улучшает выживаемость нейронов CA1 и поведенческие характеристики после глобальной ишемии у крыс. J Cereb Blood Flow Metab. 2002. 22 (2): 171–82. pmid: 11823715
    41. 41. Schafer KA. Клеточный цикл: обзор. Vet Pathol. 1998. 35 (6): 461–78. pmid: 9823588
    42. 42. Смит Т.В., Липпа К.Ф. Иммунореактивность Ki-67 при болезни Альцгеймера и других нейродегенеративных заболеваниях.J Neuropathol Exp Neurol. 1995. 54 (3): 297–303. pmid: 7745428
    43. 43. Надаль-Николас FM, Хименес-Лопес М., Собрадо-Кальво П., Ньето-Лопес Л., Кановас-Мартинес I, Салинас-Наварро М. и др. Brn3a как маркер ганглиозных клеток сетчатки: качественные и количественные исследования времени в наивном и поврежденном зрительном нерве сетчатки. Инвестируйте Ophthalmol Vis Sci. 2009. 50 (8): 3860–8. pmid: 1

      88
    44. 44. Виллегас-Перес М.П., ​​Видал-Санс М., Расмински М., Брей Г.М., Агуайо А.Дж. Быстрая и длительная фазы потери ганглиозных клеток сетчатки следуют за аксотомией зрительного нерва взрослых крыс.J Neurobiol. 1993. 24 (1): 23–36. pmid: 8419522
    45. 45. Тиан Х, Фэн Дж, Ли Дж, Хо Т-В, Юань Ю, Лю Й и др. Внутрилагеллярный транспорт 88 (IFT88) является критическим для черепно-лицевого развития у мышей и является геном-кандидатом для заячьей губы и неба у человека. Hum Mol Genet. 2017; 26 (5): ddx002.
    46. 46. Pazour GJ, Dickert BL, Vucica Y, Seeley ES, Rosenbaum JL, Witman GB, et al. Хламидомонада IFT88 и ее мышиный гомолог, ген поликистозной болезни почек tg737, необходимы для сборки ресничек и жгутиков.J Cell Biol. 2000; 151.
    47. 47. Галан А., Дергам П., Эсколл П., Де-ла-Хера А., Д’Онофрио П.М., Магариус М.М. и др. Повреждение нейронов снаружи сетчатки быстро активирует глию сетчатки с последующим повышением маркеров повторного входа в клеточный цикл и гибели ганглиозных клеток сетчатки. PLoS One. 2014; 9 (7).
    48. 48. Мори Д., Ямада М., Мимори-Кийосуэ Й, Шираи Й, Сузуки А., Оно С. и др. Существенная роль пути aPKC – Aurora A – NDEL1 в удлинении нейритов путем модуляции динамики микротрубочек.Nat Cell Biol. 2009. 11 (9): 1057–68. pmid: 19668197
    49. 49. Зеттерберг А., Ларссон О., Виман К.Г. Что такое точка ограничения? Curr Opin Cell Biol. 1995. 7 (6): 835–42. pmid: 8608014
    50. 50. Ху В., Кавана Дж. Дж., Диверс М., Фу С., Джонстон Д., Фридман Р.С. и др. Частая сверхэкспрессия STK15 / AURORA-A / BTAK и хромосомная нестабильность в культурах опухолегенных клеток, полученных из рака яичников человека. Cancer Res. 2014; 65 (9 приложение): 1350.
    51. 51. Натараджан М., Стюарт Дж. Э. мл., Големис Е. А., Пугачева Е. Н., Александропулос К., Кокс Б. Д. и др.HEF1 является необходимым и специфическим нижестоящим эффектором FAK, который способствует миграции клеток глиобластомы. Онкоген. 2005. 25 (12): 1721–32.
    52. 52. Yi Z-Y, Ma X-S, Liang Q-X, Zhang T, Xu Z-Y, Meng T-G и др. Kif2a регулирует организацию веретена и развитие клеточного цикла в мейотических ооцитах. Научный доклад 2016; 6 (1): 38574.
    53. 53. Kinzel D, Boldt K, Davis EE, Burtscher I, Trümbach D, Diplas B и др. Вилы регулируют первичную разборку ресничек и лево-правую асимметрию.Dev Cell. 2010. 19 (1): 66–77. pmid: 20643351
    54. 54. Сайто М., Оцу В., Хсу К.-С., Чуанг Дж-З., Янагисава Т., Шие В. и др. Tctex-1 контролирует резорбцию ресничек, регулируя полимеризацию разветвленного актина и эндоцитоз. EMBO Rep. 2017; 18 (8): 1460–72. pmid: 28607034
    55. 55. Ли А., Сайто М., Чуанг Дж. Z, Tseng Y-. Y, Dedesma C, Tomizawa K и др. Активация цилиарной переходной зоны фосфорилированного Tctex-1 контролирует резорбцию ресничек, вступление в S-фазу и судьбу нейральных предшественников.Nat Cell Biol. 2011; 13.
    56. 56. Варвел Н.Х., Бхаскар К., Патил А.Р., Пимпликар С.В., Херруп К., Лэмб Б.Т. Олигомеры Aβ вызывают события цикла нейрональных клеток при болезни Альцгеймера. J Neurosci. 2008. 28 (43): 10786–93. pmid: 18945886
    57. 57. Пелегри К., Дюран-Виларегут Дж, дель Валле Дж, Креспо-Биль Н., Феррер I, Паллас М. и др. Активация клеточного цикла в нейронах полосатого тела от пациентов с болезнью Хантингтона и крыс, получавших 3-нитропропионовую кислоту. Int J Dev Neurosci. 2008. 26 (7): 665–71.pmid: 18768156
    58. 58. Имаи Х, Харланд Дж, Маккалок Дж, Грэм Д.И., Браун С.М., Макрэй И.М. Специфическая экспрессия белков регуляции клеточного цикла, GADD34 и PCNA, в периинфарктной зоне после очаговой церебральной ишемии у крыс. Eur J Neurosci. 2002. 15 (12): 1929–36. pmid: 12099899
    59. 59. Кабади С. В., Стойка Б. А., Хэнском М., Лоан Д. Д., Харебава Г., Мюррей М. Г. II и др. CR8, селективный и мощный ингибитор CDK, обеспечивает нейрозащиту при экспериментальной травматической травме головного мозга.Нейротерапия. 2012. 9 (2): 405–21. pmid: 22167461
    60. 60. Goto H, Inoko A, Inagaki M. Прогрессирование клеточного цикла путем подавления образования первичных ресничек в пролиферирующих клетках. Cell Mol Life Sci. 2013. 70 (20): 3893–905. pmid: 23475109
    61. 61. Ким С., Циокас Л. Реснички и повторный вход в клеточный цикл: больше, чем совпадение. Клеточный цикл. 2011; 10 (16): 2683–90. pmid: 21814045
    62. 62. Полакис П. Многочисленные пути Wnt при раке. Curr Opin Genet Dev.2007. 17 (1): 45–51. pmid: 17208432
    63. 63. Lancaster MA, Louie CM, Silhavy JL, Sintasath L, DeCambre M, Nigam SK и др. Нарушение передачи сигналов Wnt-β-catenin нарушает почечный гомеостаз взрослых и приводит к кистозной цилиопатии почек. Nat Med. 2009. 15 (9): 1046–54. pmid: 19718039
    64. 64. Ланкастер Массачусетс, Шрот Дж, Глисон Дж. Субклеточная пространственная регуляция канонической передачи сигналов Wnt в первичной ресничке. Nat Cell Bio. 2011. 13 (6): 700–7.
    65. 65. Haycraft CJ, Banizs B, Aydin-Son Y, Zhang Q, Michaud EJ, Yoder BK.Gli2 и Gli3 локализуются в ресничках и нуждаются во внутрижгутичном транспортном белке Polaris для обработки и функционирования. Барш Г., редактор. PLoS Genet. 2005; 1 (4): e53. pmid: 16254602
    66. 66. Ingham PW, McMahon AP. Передача сигналов ежа в развитии животных: парадигмы и принципы. Genes Dev. 2001. 15 (23): 3059–87. pmid: 11731473
    67. 67. Sasaki H, Nishizaki Y, Hui C, Nakafuku M, Kondoh H. Регулирование активности Gli2 и Gli3 с помощью амино-концевого домена репрессии: участие Gli2 и Gli3 в качестве первичных медиаторов передачи сигналов Shh.Разработка. 1999. 126 (17): 3915–24. pmid: 10433919
    68. 68. Хуанфу Д., Андерсон К. В. Реагирование ресничек и ежа у мыши. Proc Natl Acad Sci USA. 2005; 102.
    69. 69. May SR, Ashique AM, Karlen M, Wang B, Shen Y, Zarbalis K и др. Потеря ретроградного мотора для IFT нарушает локализацию Smo в ресничках и предотвращает экспрессию как активаторных, так и репрессорных функций Gli. Dev Biol. 2005. 287 (2): 378–89. pmid: 16229832
    70. 70. Каспер М., Регл Дж., Фришауф А.М., Абергер Ф.Факторы транскрипции GLI: медиаторы онкогенной передачи сигналов Hedgehog. Eur J Cancer. 2017; 42 (4): 437–45.

    Певица Наташа Королева: биография, личная жизнь, семья, муж, дети - фото. Повзрослевший сын Наташи Королевы


    31 мая Наташе Королевой исполнилось 45 лет. Отметить это событие певица решила грандиозным концертом. 20 октября в Государственном Кремлевском дворце состоится юбилейное бенефис заслуженного артиста России «Ягода».Поклонников творчества Queen ждет грандиозное шоу со спецэффектами, легкой феерией, живым звуком и невероятными сюрпризами от ее семьи.

    Об одном таком сюрпризе Королева рассказала сегодня в своем Instagram. Певица выложила видео, на котором она и ее 16-летний сын Архип исполняют дуэтную песню Алексея Рыбникова «Веришь ты мне или нет». В конце ролика певица целует юношу в губы. «20 октября Бенефис в Кремле !!! А мы с # перевязкой живем на нашей репетиционной базе !!! »- написал певец (орфография и пунктуация авторов здесь и далее без изменений, - Ред.). Подписчики отметили, что у Архипа красивый голос, очень похожий на голос его отца Сергея Глушко. Некоторые даже предлагали маме и сыну взять папу на танцы.

    Наташа Королева поет дуэтом с сыном Архипом

    «Как мило, взрослый сын и такая миниатюрная и красивая мама», «У Архипа очень хороший голос. Мамины гены »,« Ошеломленный голос сына такой же, как у Сергея, если бы я не смотрел, а слушал, я бы подумал о нем »,« Дура, поцеловал в губы. От щеки не дождался.Мальчик, стеснительный ... мама как девочка, ты такая классная !!! «- обрадовались поклонники певицы. Многие отметили, что мама и сын вместе похожи на брата и сестру, и заявили, что более 30 певцов отдать категорически невозможно.


    Наташа Королева с сыном Архипом

    Напомним, две недели назад Наташа Королева появилась на пре-пати премии «ЖАРА» в смелом молодежном наряде. Для выхода по торжественной водной артерии певица выбрала наряд в морском стиле: жилет-рубашку, яркие брюки в белую полоску и серебряный жакет.Завершали образ аксессуары в виде цепочек, больших очков и сумки от LouisVuitton.

    45-летняя Наташа Королева удивила по-молодому на пре-пати премии «ЖАРА»

    Наташа Королева и Сергей Глушко поженились в 2003 году. За год до свадьбы певица родила танцору сына. Их свадьба наделала много шума, но год за годом пара показывала, что в браке они абсолютно счастливы. В 2015 году Королева и Глушко были втянуты в секс-скандал, когда в Сети были запечатлены фотографии интимного содержания, на которых запечатлены певица и ее муж.Королеве пришлось обратиться к психологу, чтобы тот научил ее «достойно, без лишних эмоций пережить всю эту ненормальную ситуацию». Сын Архипа как мог поддерживал маму: «Я чувствовал безмолвную поддержку сына. Хотя мы с ним эту тему не обсуждали, я чувствовал, что он всех порвет за свою маму! она сказала. - Может, нескромно так говорить, но я человек по натуре добрый, никому не причиняю вреда. Поэтому грязь ко мне не прилипала, несмотря на то, что некоторые люди очень старались очернить меня.”

    Архип Глушко заинтересовался японским языком и японской культурой.

    Серьезные перемены произошли в жизни Наташи Королевой, ее 15-летний сын Архип нашел японскую маму. Парень уже улетел к своим новым родственникам в Токио. Наташа Королева всегда гордилась сыном. Два года назад она отправила Архипа учиться в Америку. Знаменитая мама Люда настояла на том, чтобы парень учился за границей, видя, что ее внук не может свободно говорить по-английски.

    Во время учебы сын Королевы добился хороших успехов.« Мне, конечно, было непросто отпустить моего ребенка в Америку. - говорит Наташа Королева. - Но я понимала, что для него будет лучше в первую очередь. Мы постоянно общались, общались. Интернет, звонят по несколько раз в день. Я вам скажу: когда рождаются дети, у любой мамы есть постоянный страх. Я хочу, чтобы с ребенком все было хорошо ».


    Теперь опыт певца добавлен. Ее Архип неожиданно нашел для себя японскую семью.Он уже улетел к своим новым родственникам в Токио. « Да, сейчас мой ребенок в Японии , - призналась Королева, - Там у него была местная семья, мама японка. Я лично с ней не знаком: я видела замечательных людей, и это меня очень радует ».

    В Японии Архип не теряет времени даром. Он ходит в местную школу, где активно преподает японский язык. Не исключено, что в ближайшее время он навсегда уедет в Токио. « Сын улетел впервые в жизни , - продолжает Наташа.- Это его выбор! Мы ни на чем не настаивали. Ему там нравится: ему пришла в голову идея выучить японский на отлично. Он в школу ходит на метро! Японская культура Архипа вызывает интерес уже несколько лет. В прошлом году даже ездили в Страну восходящего солнца на разведку. А моему сыну там очень понравилось ».

    Архип пробудет в японской семье три недели. Он вернется в Москву в августе, но ненадолго. « Я просто не могу понять: откуда у него такая любовь к Японии? , - продолжает королева.- Не раз спрашивала мужа: «Сережа, как мог белорус с хохлушкой сделать ребенка, обожающего Японию?» »

    Пока его сын был в Японии, его звездные родители уехали на Ибицу. Однако связь с Архипом Королевым не теряет и держит руку на пульсе. Певица не раз признавалась: для сына она лучшая дружба, которая все объяснит и посоветует. Она призывает сына почаще делать добрые дела, потому что тогда будет легче жить.« Бумеранг существует, и все, что ты делаешь в своей жизни, обязательно вернет , - считает певец. - Иногда мы делаем какие-то неправильные поступки, которые приносят боль и страдания другим людям. Тогда они обязательно вернутся к тебе. Я тоже согрешил в своей жизни. И заплатил за это сполна. Но не жалею ».

    Услышав имя Наташа Королева, многие вспоминают смехотворную певицу, которая поражает поклонников своим талантом. Она невероятно популярна и востребована, ее гастроли очень загружены работой.Кто не знает ее песен, таких как «Маленькая страна», «Желтые тюльпаны», «Голубые лебеди» и многих других, некоторые из которых она писала сама, сочиняя стихи.

    К тому же она прекрасная жена и мама, чему не устают удивляться многие ценители ее таланта. Она заботится о своих племянниках, хотя они находятся далеко от России, в Канаде.

    Наташа Королева радует своих поклонников с начала 90-х, часто поражая сменой образов и нестандартным решением.

    Рост, вес, возраст. Сколько лет Наташе Королеве

    Рост, вес, возраст, сколько лет Наташа Королева известна всем истинным поклонникам творчества певицы. Ей 43 года, но девушка выглядит намного моложе своих лет.

    В последнее время певица поражает поклонников своими формами. Она всегда была манекеном, учитывая идеальный вес 49-50 кг. Сейчас формы певицы близки к идеальным. Ее вес 51 кг при росте 160 см.

    Певица сейчас занимается активными видами спорта, в частности фитнесом.Недавно она перешла на здоровый образ жизни. Все это сразу благоприятно сказалось на фигуре исполнительницы, о которой восторженно отзываются все мужчины, а женщины завидуют с белой завистью.

    Биография Наташи Королевой

    Наталья Королева родилась в столице Украинской ССР (Киеве) 31 мая 1973 года. Настоящее имя - Рип. В 3 года начала петь в Большом хоре радио и телевидения Украины. В 7 лет начала учиться игре на фортепиано.После школы она после мелких проблем отправляется в эстрадное цирковое училище, которое блестяще окончила. Далее были гастроли по США. В 1991 году состоялось знакомство с композитором Игорем Николаевым. Вскоре с написанной им песней «Желтые тюльпаны», а затем с «Голубыми лебедями» Наташа Королева (такой псевдоним придумал Николаев) выиграла фестиваль «Песня года», они же стали визитной карточкой молодежи. певица.

    С этого момента Наташа Королева становится очень популярной.В конце 90-х певец начинает писать стихи на музыку, написанную Николаевым. Певица поступает и успешно заканчивает ГИТИС.

    Биография Наташи Королевой обретает деловые черты в 2008 году. Она выпускает коллекцию украшений «Мамы и дочки».

    Певица много гастролировала, участвовала в ряде телепроектов, наиболее успешными из которых были «Две звезды» и «Танцы со звездами». Она участвовала в съемках программы «Пора обедать» вместе с мамой.

    Неожиданно певец пропал с экранов страны. Она не гастролировала и не выпускала сольных альбомов. Начали появляться слухи, что Наташа Королева прекратила творческую деятельность. Но вопреки всему, артист неожиданно в 2015 году проводит грандиозный тур, который в 2016 году завершился фурор в Концертном зале России. В начале 2017 года Наташа Королева появилась в программе «Секрет на миллион», где раскрыла все свои секреты, заявив, что ее работа просто выходит на другой уровень.Для этих целей ей понадобился небольшой перерыв.

    Личная жизнь Наташи Королевой

    Личная жизнь Наташи Королевой началась вскоре после знакомства с композитором Игорем Николаевым. Изначально между ними были только деловые отношения. Но через некоторое время Игорь, который был намного старше, стал проявлять к молодой девушке признаки внимания. Сначала она восприняла это как шутку, хотя сама потеряла голову от партнера. Вскоре Игорю предложили жить вместе, но Наташа отказалась.Она сказала, что отношения между молодыми людьми могут быть только после свадьбы. Игорь немного подумал и вскоре сделал предложение. В квартире Николаева прошла скромная свадебная церемония, на которой присутствовали только самые близкие люди, а после - несколько лет счастливой жизни. Казалось, что их никто не разделяет.

    Но в начале нового века Наташа уходит от мужа. Она утверждает, что причиной тому стали многочисленные измены Игоря Николаева, о которых ей сообщили доброжелатели.

    Вскоре певица познакомилась с молодым стриптизером Сергеем Глушко, выступавшим под псевдонимом Тарзан. Вскоре у молодой пары рождается сын, которого Наташа и Сергей назвали Архипом. Через год после рождения сына они поженились. Их брак счастливый, что они демонстрируют, не скрывая своих чувств, иногда выкладывая откровенные снимки в социальных сетях.

    Семья Наташи Королевой

    Семья Наташи Королевой сейчас проживает в нескольких штатах. Ее отец живет в Киеве, когда-то работал в Киевской хоровой капелле.Сейчас о его жизни ничего не известно, он ведет спокойный образ жизни обычного украинского пенсионера.

    Мать Наташи Людмила Ивановна сейчас живет с сыном певца в США, где ухаживает за внуком. Ранее она была Заслуженной артисткой Украины. Вела программу на российском телевидении «Пора обедать».

    У певца есть сестра, которую многие знают под псевдонимом Русь. Раньше она была популярной в Украине поп-певицей. Сейчас она живет в Канаде. У нее двое детей, один из которых серьезно болен.Наташа помогает сестре лечить ребенка.

    Дети Наташи Королевой

    Певица очень давно мечтала о рождении ребенка, но дети Наташи Коревой так и не появились в браке с Игорем Николаевым. Сначала из-за плотного гастрольного графика, а затем из-за разлада в семейных отношениях. После знакомства с Сергеем Глушко Наташа родила на сегодняшний день единственного сына, которого назвала Архипом.

    В январе 2017 года певица, пришедшая на передачу Лере Кудрявцевой «Секрет на миллион», сказала, что дети - очень болезненный для нее вопрос.Певица была беременна несколько раз, но рождение ребенка не произошло из-за выкидыша на ранних сроках. Наташа Королева отметила, что у нее отменное здоровье, поэтому она не исключает рождения брата или сестры с Архипом в будущем.

    Певица считает своих детей детьми сестры, известной под псевдонимом Русь. Наташа помогает сестре материально лечить сына Мэтью, страдающего аутизмом.

    Сын Наташи Королевой - Архип Глушко

    Сын Наташи Королевой - Архип Глушко родился в феврале 2003 года.Наташа долго прятала его, пытаясь уберечь от всех опасностей. Мальчик учился в одной из школ Москвы, был общительным, занимался спортом, успешно занимался, ходил в драматический кружок. В 2014 году Архип поступил в престижную американскую школу, которую выбрали его родители. Наташа говорит, что ее сын очень талантлив и всесторонне развит. В последнее время увлекся баскетболом и волейболом, в чем неплохо прогрессирует.

    Опять же со слов Наташи Королевой стало известно, что молодой человек будет учиться в Оксфорде, поэтому было решено отправить его в Штаты, чтобы подтянуть разговорный английский.Она говорит, что ее сын - ее гордость. Особенно мальчик преуспевает в точных науках, поэтому специальность будет связана с экономикой.

    Бывший муж Натальи Королевой - Игорь Николаев

    Бывший муж Натальи Королевой - Игорь Николаев - популярный певец, композитор, общественный деятель. Их первая встреча ничего не оставила в их сердцах. У него несколько раз были серьезные отношения, наиболее значимыми из которых были роман с советской и российской примадонной Аллой Пугачевой и личные отношения с его бывшей женой, от которой у Игоря родилась дочь.Она юный смех, ничего не знавший о романтических встречах. Через некоторое время их творческий союз перерос в супружеские отношения, которые продлились около 10 лет.

    Но Игорь - красивый, импозантный мужчина, которого на шее повесили многочисленные поклонники. С некоторыми из них у него были сексуальные отношения, о чем тут же доложили его жене Наташе.

    Через некоторое время они развелись. После этого бывшие супруги несколько лет не общались.Потом они стали друзьями.

    Сейчас Игорь счастлив в браке с молодой певицей Юлией Проскуриковой, родившей ему дочь.

    Муж Натальи Королевой - Сергей Глушко (Тарзан)

    Муж Натальи Королевой - Сергей Глушко (Тарзан) провел детство и юность в Мирном, что в Архангельской области. Сергей хотел стать солдатом, как его отец, и служить на космодроме Плесецк. Рано женился на Елене Переведенцевой, которая работала здесь, на космодроме.После развода в 90-х переехал в столицу, где стал охранником, рекламистом, торговцем мебелью. Ему предложили попробовать стать моделью, чем он и стал заниматься, сомневаясь в своем успехе. Но это удалось.

    Его стали приглашать на съемки рекламных роликов. Особой популярностью пользовался клип группы «Белый орел», снятый на песню «Потому что на свете нельзя быть таким красивым». Вскоре его пригласили участвовать в стриптизе. Он получил псевдоним Тарзан.

    В начале века его пригласили поучаствовать в клипе Наташи Королевой, где они и познакомились. Вскоре дружба быстро переросла в любовь. Также Тарзан проявил отличные вокальные данные, самым запоминающимся из его дуэтных выступлений стало исполнение песни «Веришь ты мне или нет».

    Интимная жизнь Наташи Королевы и Тарзана, цензура фото

    «Наташа Королева и Тарзан: интимная жизнь, фото цензуры» - под этим заголовком вышло несколько газетных изданий.Оказалось, что недоброжелатели украли откровенные интимные снимки. Помимо снимков в Интернете появилось интимное видео, снятое на телефон певицы.

    Супруги ужасно разозлились по этому поводу, подали в суд на злоумышленников, посягавших на частную жизнь людей. Откровенные фото получили негативный отзыв от депутата Виталия Милонова. Он заявил, что Наташа Королева не заслуживает звания народной артистки РФ, и потребовал лишить ее этого звания.

    Но суд признал действия злоумышленников незаконными.

    Но несколько экстравагантных людей, в том числе Никита Джигурда, поддержали звездную пару, пожелав ей успехов.

    Фото Наташи Королевой до и после пластики

    На днях Наташа Королева, спустя небольшой год, появилась на публике. Все отметили, что певица очень хорошо выглядит. Она похудела, стала стройной и красивой, о чем ей вскоре сообщили.

    Неожиданно в череде желтых публикаций появилась информация: Фото Наташи Королевой до и после пластики.Певицу обвинили в проведении общей коррекции фигуры, после чего она настолько похудела. Наталья Королева опровергает эту информацию, заявляя, что недавно она вернулась к любимым занятиям аэробикой, которые оставила из-за напряженной работы.

    Окружение певца отрицает всю информацию о пластических операциях. Говорят, что Наташа счастлива, и это благотворно сказалось на ее внешности.

    Инстаграм и Википедия Наташи Королевой

    Страница в Инстаграм и Википедия Наташи Королевой, конечно же, есть.Вот фотографии артиста за долгое время, начиная с самого первого выступления с Игорем Николаевым. Здесь можно найти многочисленные фотографии с мужем Сергеем Глушко, которого все знают под псевдонимом Тарзан.

    На страницу певца подписалось большое количество подписчиков, которые лайкают фото, оставляют сообщения и пожелания певице.

    Всем известно, что певица Наташа Королева не только творческая личность, но и бизнесвумен. У нее минимум два салона красоты в столице России.Соответственно, она регулярно их посещает, но ее последний визит привлек наибольшее внимание, поскольку она оказывала услуги непосредственно ей, говорится на сайте.

    Мать и сын: Архип Глушко в салоне красоты

    В ролике, который артистка решила показать своим подписчикам, снялся 16-летний Архип. Практически все лето юноша проводит каникулы с родителями, затем снова уезжает учиться в Америку, где живет с бабушкой.


    Логично, что находясь с мамой и папой, парень не только расслабляется, но и посещает с ними различные мероприятия и участвует во многих из них.Так, отправившись с Наташей в ее собственный салон красоты, расположенный в Москве, Архип попробовал себя в качестве представителя услуг индустрии красоты.

    Сын Сергея Глушко и Наташи Королевой тщательно мыл голову матери, видимо готовился. Но самое примечательное, что, намыливая волосы Королеве, Архип вдруг наклонился и поцеловал ее в лоб. Этот фрагмент поразил почти миллионную армию подписчиков певца.

    «Вот он жил, сын немного голову моет», - цитирует редакция JoeInfoMedia Королева.Потом добавляет: «Давай, массаж, массаж», и, поцеловав Архипа, скромно улыбнулась, воскликнув: «Боже мой, какая услуга!».

    Наташа Королева Instagram

    Актриса показала трогательный видеоролик, на котором показана любовь сына к матери. Казалось бы, банальность, но шквал эмоций вызвал. Поклонники звезды рассыпали комплименты, похвалили за то, что пара, несмотря на раздельное проживание с сыном, сумела внушить ему уважение к родителям.

    Но, как всегда, вышла вторая сторона медали. Критики не упускают случая придраться к чему-то. На этот раз им не понравилась растаманская шляпа Архипа. Ненавистники разбили стиль молодого человека вдребезги.


    Напомним, Наташа Королева вышла замуж в 2003 году. Мало кто верил в их отношения, в основном говорили о пиар-ходе, но годы доказали, что, наоборот, это одна из немногих пар, которые могут похвастаться сильной любовью и трепетом. чувства.Архип Глушко родился за полтора года до свадьбы родителей, 19 февраля 2002 года. Когда мальчик подрос, звезды решили отправить сына учиться в Майами, где он живет с бабушкой.

    .

    Related Posts

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2021 © Все права защищены.