Пп белки: Правильное питание. Белки – Лайфхакер

0

Содержание

Правильное питание. Белки – Лайфхакер

Продолжаем тему статей о правильном питании, начало которой можно найти здесь, и сегодня поговорим о белках. Вопреки популярному мнению, что белок нужен только качкам, стоит сказать, что белок — это такое же важное вещество для нашего организма, как и углеводы.

Белки — это природные органические вещества, состоящие из аминокислот и играющие фундаментальную роль в жизнедеятельности организма. Белки — это единственный источник аминокислот для людей. Так как многие аминокислоты, такие как лейцин, изолейцин, валин и прочие, не синтезируются нашим организмом, и единственный вариант их поступления к нам — это еда. Белки выполняют несколько основных ролей в нашем организме:

  • являются основой для создания мышечной ткани;
  • являются материалом для построения всех клеток, тканей и органов;
  • обеспечивают иммунитет организма и выступают в качества антител;
  • участвуют в пищеварительном процессе и энергетическом обмене.

Теперь, когда мы выяснили, что белок нам все-таки важен, нужно определиться с его количеством, так как и недостаток и избыток белка могут привести к плачевным результатам. Но среднестатистическому человеку, не связанному с миром профессионального спорта, избыток белка не грозит, гораздо более распространенная проблема — это его недостаток. Чем же он чреват? Во-первых, нарушение энергетического обмена; во-вторых, нарушение в работе внутренних органов, таких как печень и поджелудочная железа; также это ведет и к атрофии мышц. В таблице ниже представлена норма белка для мужчин и женщин.

Основными источниками белка являются мясо, рыба, молочные продукты и орехи. Если вы по каким-то причинам не едите мясо, то есть достаточное количество растительных продуктов, содержащих белок. В крупах также есть небольшое количество белка (примерно 5-7%), однако его аминокислотный состав отнюдь не совершенен, поэтому хорошим источником белка они не будут. Не стоит забывать и о том, что такие продукты, как молоко, свинина, орехи, помимо большого количества белка, также имеют и достаточное количество жиров, так что следует отталкиваться и от этого тоже.

Если распорядок дня не позволяет кушать на работе, то неплохим подспорьем может стать протеиновый коктейль, который заменяет один или несколько приемов белковой пищи. Вопреки распространенному мнению, их не колют в вену и от них не вырастут огромные и некрасивые мышцы за один день. Так что не стоит бояться того, что они принесут вам вред.

ПП рецепты с Яичный белок

Кокосовый ПП торт

Кто сказал, что на правильном питании нужно забыть про торты? …

1 час. 5 мин. 8

Морковный ПП рулет

Морковный рулет — это диетическая и вкусная закуска. Морковь содержит …

1 час. 10 мин. 4

Тирамису ПП

Все знают классический десерт тирамису. Но мало кто знает, что …

2 час. 50 мин. 2

Морковно-финиковый торт

Морковно-финиковый торт по этому рецепту можно позволить себе даже на …

50 мин. 4

ПП десерт “Клубника в облаках”

Хочу предложить Вам погрузиться в ягодное настроение. Попробуйте очень вкусный …

20 мин. 5

Кокосовые ПП шарики

Рецепт специально для любителей кокосовой выпечки. Минимум ингредиентов и затраченного …

30 мин. 4

ПП блинчики из шпината и гречневой муки

Яркие и красивые шпинатные блинчики не просто полезные — они …

45 мин. 2

Тыквенные ПП драники

Драники из тыквы — это отличная альтернатива мясным котлеткам и …

40 мин. 4

Творожное ПП суфле

Творожное суфле — нежный десерт, который нетрудно сделать низкокалорийным. Суфле …

50 мин. 4

Творожная ПП запеканка на белках

Когда придерживаешься диеты, зачастую приходится исключать из рациона яичные желтки. …

60 мин. 6

ПП тыквенные оладьи

Тыква — это кладезь витаминов в зимний период, ведь некоторые …

60 мин. 6

ПП безе

Безе – воздушное лакомство, которое готовится из яичного белка. Содержит …

1 час. 40 мин. 1

Морковные котлеты ПП

Никого не удивить драниками или кабачковыми котлетами. Давайте попробуем морковные …

35 мин. 3

Зефир без сахара

Вкусное лакомство, которое совершенно не содержит жира. А в этом …

20 час. 30 мин. 4

Кокосовое пп печенье

Представляю Вашему вниманию рецепт кокосового печенья. На вкус получается даже …

35 мин. 4

Яичный белок – самый популярный продукт в кулинарии. Его используют в выпечке, в первых и вторых блюдах, употребляют в сыром виде, активно жарят, варят и используют как основу для крема.

Белки в питании человека

Белки в питании человека играют одну из ключевых ролей в процессе жизнедеятельности организма.

Что такое белок

Белки это многомолекулярное вещество, состоящее из аминокислот, множество их комбинаций создают многообразие свойств белков.

Какие функции в организме выполняет белок

Белки катализируют протекание химических реакций, выполняют строительную функцию для материала клеток, образуют межклеточную основу соединительных тканей, являются важнейшим элементом обмена веществ, участвуют в выведении токсинов из организма, играют важную роль в формировании иммунитета – нейтрализуют бактерии, вирусы, чужеродные белки. Белки содержат в своем составе 20 основных аминокислот, из которых 8 классифицируются как незаменимые, в то время как остальные могут быть синтезированы в организме человека. Так как не все аминокислоты синтезируются организмом, часть их обязательно должна поступать извне с белковой пищей. В процессе пищеварения белки разрушаются до аминокислот, те в свою очередь используются для биосинтеза собственных белков организма или распадаются, вырабатывая энергию.

Продукты-источники белка

. В большом количестве белки содержатся в мясе, рыбе, птице, яйцах, орехах, молочных продуктах, бобовых (особенно сое). В меньшем количестве – в некоторых фруктах, ягодах, грибах, овощах. (См. “Продукты – источники животного белка”, “Продукты – источники растительного белка”.)

По российским нормам суточная потребность человека в белке составляет 80-120 г, в зависимости от интенсивности физических нагрузок. Причем 55-60% рекомендуемой нормы должны составлять белки животного происхождения.

Роль белка в похудении

Употребление белковых продуктов при похудении является ключевым элементом многих систем питания. Белки оказываются влияние на работу абсолютно каждого органа человека. При недостатке в пище белка, особенно при снижении общей калорийности пищевого рациона во время похудения, в организме нарушаются процессы обновления и синтеза белков. Прежде всего, это почувствуют на себе те органы, где наиболее быстрыми темпами происходит физиологическое обновление клеток: поджелудочная железа, костный мозг, кишечник. Следовательно, белок особенно необходим в рационе худеющих.

Пища, богатая белком, быстро дает чувство насыщения, утоляет голод, питает организм энергией. Стоит также упомянуть то, что белок, в отличие от углеводов, не синтезируется в жиры, а питает мышцы, которые впоследствии быстрее “сжигают” съеденные калории. Именно это свойство “эксплуатируют” составители различного рода белковых диет, основанных на преобладании в рационе белковых продуктов. Но следует понимать и помнить, что избыток белка может серьезно навредить здоровью! Нарушение белкового обмена приведет к накоплению в организме, крови и моче излишков продуктов распада, которые дадут повышенную нагрузку на почки и печень, ухудшается их функция, что может привести к серьезным проблемам (можно просто “посадить” эти органы).

Поэтому важно помнить, что во всем нужна мера. Избыток любого вещества всегда вреден. Идеальный вариант питания для здоровья и похудения – это сбалансированный рацион, в котором присутствуют все жизненно важные для человека элементы питания – и белки, и углеводы, и жиры. Здоровое правильное питание подразумевает во всем баланс. Помните об этом и будьте стройными и красивыми!

Распределение белков, жиров и углеводов в течение дня.

Здравствуйте, дорогие друзья! Расскажу, как правильно распределить белки, жиры и углеводы в дневном рационе. В здоровом питании важно не только выбор потребляемых продуктов и их количество. Полезно разбираться в вопросе, когда эти продукты лучше есть.

В разные часы тело человека исполняет разные биохимические процессы. Так, утром активность проявляют гормоны стресса, а ближе к вечеру на передовую выходят гормоны сна.

Белки, жиры и углеводы – наши базовые нутриенты – перерабатываются организмом по-разному. И во многом, назначение их различно. Давайте посмотрим, какому времени суток отдает предпочтение каждый нутриент.

На заметку! Я не раз писала, что мой рацион состоит из 5-6 небольших приемов пищи. Это наиболее оптимальный в большинстве случаев план, чтобы не перегружать пищеварительный тракт и не чувствовать голода.

Когда есть углеводы?

Углевод прежде всего выполняет энергетическую задачу. Это лучший нутриент для восстановления сил и это – калории. Утренние гормоны стресса стимулируют физическую активность, благодаря чему сжигание калорий более активное.

Отсюда следует, что львиную долю углеводов лучше есть в первой половине дня – это завтрак и обед. Углеводами являются каши, крупы, макароны, мучное, а также фрукты и овощи. Однако последние часто рекомендуют на полдник и ужин. Почему?

Продукты с большим количеством углеводов имеют много крахмала и клетчатки (крупы, картофель, бобовые и зерновые), поэтому их надо есть в первой половине дня. А овощи и фрукты – это в основном клетчатка и вода, поэтому калорий в них мало. Из можно на полдник или ужин.

Вывод: калорийные углеводы (в составе которых крахмал и клетчатка) лучше есть на завтрак, первый перекус и обед. Это зерновые, крупы, картофель, сладкое, мучное. Низкокалорийные углеводы, состоящие из клетчатки, можно есть и во второй половине дня. Это фрукты и овощи.

Когда есть жиры?

Жиры могут в некоторых случая стать заменой углеводу в качестве источника энергии.  Но только в одном приеме пищи. Распределить жиры можно на протяжении всего дня. Поскольку для здорового функционирования этого нутриента не нужно слишком много, то жиры и так «разбегутся» понемногу на каждый прием.

Стоит учесть, если прием пищи высокоуглеводный, то жиров нужно есть меньше. Если же в блюде в основном белки – то можно добавить больше жиров.

Вывод: жиры могут стать единоразовой энергетической заменой углеводам. Если в блюде много углеводов, то жиров должно быть меньше. Если приём пищи – белковый, то можно увеличить количество жиров. Учитывая предпочтительное время для углеводов, получается, то утром жиров нужно меньше, а вечером – больше.

Когда есть белки?

Для переваривания белков требуется больше энергии, чем на углеводы и жиры. И, учитывая, что в вечернее время метаболизм у нас замедляется, белок будет очень кстати, чтобы поддерживать этот процесс на должном уровне.

Белок – это строительный материал, потребность в котором растет в конце дня, для восстановления мышц и обновления тканей.

Учитывая, что для переваривания белка нужны и жиры, и углеводы, целесообразно распределить эти нутриенты на все приемы пищи с приоритетом на ужин.

Вывод: белки нужно распределить на все приемы пищи, но в разных количествах. На протяжении всего дня с утра и к вечеру доля белковых продуктов должная расти, а углеводных — уменьшаться. Самым белковым приемом пищи будет ужин.

Время фруктов

В свежем виде фрукты лучше есть отдельно от основных приемомв пищи, то есть на перекус. А в дополнение к обеду или ужину – не лучший выбор. Это обяъсняется тем, что свежие фрукты вместе с другой едой задерживаются в тракте, начинается спиртовое брожение, затруднение переваривания.

Но фрукты, прошедшие термическую обработку, перевариваются вместе с другой едой без проблем. Так, если потушить, например, яблоки с мясом, то фруктовые кислоты при нагревании разрушатся.

Подводим итог

Для здорового рациона нужно правильно распределить белки, жиры и углеводы на приемы пищи в течение дня.

  1. В первой половине дня (завтрак, перекус, обед) едим углеводы с небольшим добавлением белков и жиров. То есть крупы, бобовые, злаки, зерновые, фрукты и сладости.
  2. Во второй половине дня вступают белки и клетчатка. Это нежирное мясо и рыба, молочная продукция, овощи.
  3. На каждый прием пищи должна приходиться небольшая доля жиров.

Полезные перекусы на правильном питании для похудения: рецепты и примеры

Считается, что правильное питание подходит тем людям, которые хотят похудеть. Но это неверно, ведь сбалансированный рацион необходим каждому человеку, независимо от того, хочет ли он сбросить вес, нарастить мышечную массу или просто поддерживать себя в форме.

Основные принципы правильного питания

Основа сбалансированного рациона – это правильное распределение белков, жиров, углеводов в рационе и соблюдение нормы калорий. Соотношение нутриентов и калорийность подбираются индивидуально для каждого человека, исходя из его пола, возраста, образа жизни, метаболизма и поставленной цели. В среднем распределение БЖУ выглядит следующим образом:

  • при похудении необходимо придерживаться рациона с дефицитом калорий примерно 10-15%, где 30-35% от суточной нормы калорий составляют белки, 30% – жиры, 40% – углеводы.
  • для набора мышечной массы профицит калорий в рационе составляет 10-20% от дневной нормы, 30-35% из которой это белки, 25-30% жиры, 45-55% углеводы.

Правильный режим питания состоит из 5-6 приемов пищи, где помимо завтрака, обеда и ужина включено еще 2-3 перекуса. Помимо соблюдения КБЖУ стоит обращать внимание на качество потребляемых продуктов. Это должны быть преимущественно сложные углеводы, качественный белок, полиненасыщенные жиры растительного происхождения.

В чем важность перекусов?

Небольшие приемы пищи помогают сдерживать чувство голода и не переедать во время основной трапезы. Кроме того, так вы поддерживаете работу желудочно-кишечного тракта, улучшаете обмен веществ и стимулируете похудение. Перекус дает понять организму, что голодная смерть ему не грозит, уровень сахара в крови не снижается до критической отметки, поэтому можно успокоиться и расслабиться.

Обычно перекусы включают в схему питания между завтраком и обедом, обедом и ужином, а также перед сном. Но в разных ситуациях эта схема может меняться, например, если у вас поздний обед, то после завтрака можно позволить себе 2 перекуса.

Первый перекус или второй завтрак может включать в себя следующие сочетания: углеводы, углеводы и протеин, углеводы и жиры.

Второй перекус или полдник должен состоять из белка, белка и жиров, а также содержать клетчатку.

Для вечернего перекуса необходимо выбирать белковые продукты с минимальным количеством жира.

Калорийность каждого перекуса должна составлять примерно 150-250 ккал.

Топ-5 быстрых перекусов на ПП

Для тех, у кого нет времени готовить снеки дома или просто не хочется ежедневно думать о том, чем бы перекусить, мы подготовили рейтинг самых полезных продуктов, которые легко найти в магазине:

Для тех, кто постоянно придерживается сбалансированного питания, этот список может показаться скудным и неинтересным. Действительно, если каждый день питаться одними и теми же продуктами, то очень скоро вас потянет на вредные сладости и фаст-фуд. Чтобы этого не произошло, мы подготовили целый список полезных перекусов на разные случаи жизни.

Рецепты полезных перекусов при правильном питании

Вариант 1. Овсяноблин с начинкой: творожной, сырной, фруктовой или овощной.

Для двух овсяноблинов понадобится 2 яйца, 7 ст. ложек измельченных овсяных хлопьев, 7 ст. ложек молока, соль по вкусу. Смешиваем все ингредиенты до появления пузырьков. Жарим блины на сковороде с антипригарным покрытием без масла или с минимальным его количеством.

В качестве начинки можно использовать сыр с помидорами и болгарским перцем; творог с зеленью и кусочком слабосоленой рыбы; ложку ореховой пасты и половинку банана. Варианты для начинки можно придумывать бесконечно, главное, чтобы они вписывались в дневную норму калорий. Также вы можете обогатить овсяноблин протеином, добавив в него несколько скупов белкового порошка. В одной из наших статей мы уже рассказывали про популярные рецепты с протеином.

Вариант 2. Творожная запеканка

Предлагаем простой рецепт нежной запеканки, которую вы можете разнообразить любыми добавками на свой вкус: орехами, сухофруктами, ягодами.

Понадобится 400 гр творога низкой жирности, 2 яйца, бескалорийный сахарозаменитель PRIME SWEET по вкусу, 2 ст. ложки рисовой муки, несколько ложек натурального йогурта или обезжиренной сметаны (в зависимости от консистенции), 1 ч. ложка разрыхлителя.

Смешайте все ингредиенты в миске. Должна получиться достаточно густая масса, которая легко выкладывается ложкой. Выпекайте в духовке 20-25 минут до готовности. При желании в запеканку можно добавить изюм, курагу, орешки или даже сделать ее не сладкой, а соленой.

Вариант 3. Куриное суфле

Это полезный сытный перекус для тех, кому надоели привычные блюда из курицы. Суфле можно сочетать с овсяноблином или делать бутерброды с цельнозерновым хлебом и овощами.

Возьмите 400 гр домашнего фарша из куриной грудки, 100 мл натурального йогурта, 2 яйца, соль и специи по вкусу. Взбейте яичные белки в крепкую пену. Желтки, фарш и йогурт перемешайте до однородной консистенции. Добавьте соль и специи. Аккуратно введите в смесь белки и тщательно размешайте. Выпекайте в силиконовой форме в духовке или в мультиварке. Разнообразить блюдо можно грибами, овощами и зеленью.

Полезные перекусы в дорогу или на ходу

Если вы собираетесь в путешествие, на длительную прогулку или просто находитесь весь день на ногах, то вам не обойтись без быстрых полезных перекусов. Следует выбирать продукты, которые удобно есть даже на ходу и они не портятся от жары. Варианты:

  • Сытные: ореховая смесь, питьевой натуральный йогурт и хлебцы из цельного зерна, вяленое нежирное мясо в вакуумной упаковке.
  • Сладкие: сезонные фрукты, ягоды, горсть сухофруктов, полезные протеиновые батончики.
  • Не сладкие: сезонные овощи, небольшая порция сыра.

Перекус при правильном питании на работе

На работе питаться правильно намного легче, чем в дороге, так как есть возможность приготовить продукты дома, а потом разогреть их в микроволновке. Примеры правильных полезных перекусов на работе, которые подойдут как для худеющих, так и для набирающих массу:

  • Сытные: сырники, белковые блинчики, протеиновый суп, порция творога.
  • Сладкие: чашка ягод или фруктов, овсяное печенье домашнего приготовления.
  • Не сладкие: овощные палочки, полезные бутерброды, гуакамоле с цельнозерновыми хлебцами.

Домашние перекусы на правильном питании

Если вы перекусываете дома, то у вас появляется возможность максимально разнообразить свое меню, ведь вам ничего не мешает приготовить вкусное и полезное блюдо. Вот что можно приготовить на перекус при правильном питании:

  • Сытные: отварные яйца или омлет с овощами, ролл из тонкого лаваша с творожно-овощной начинкой, бутерброд из цельнозернового хлеба с красной рыбой.
  • Сладкие: печеные яблоки с корицей и орехами, смузи, порция белкового коктейля, сэндвич из цельнозернового хлеба с арахисовой пастой.
  • Не сладкие: салат из овощей, домашние зерновые хлебцы с семечками, творожный сыр.

Правильный перекус для похудения

Если вы находитесь в стадии активного похудения, то вам пригодятся следующие виды полезных низкокалорийных перекусов:

  • Нежирный творог с добавлением фруктов и ягод. Выбирайте продукты с меньшим содержанием сахара: зеленые яблоки, груши, цитрусовые, абрикосы, ананас, малина, клубника, голубика.
  • Овощной салат из некрахмалистых овощей и зелени с заправкой из натурального йогурта: помидоры, огурцы, сладкий перец, капуста, шпинат, щавель.
  • Омлет с овощами или отварные яйца.
  • Тыквенный сорбет без сахара.
  • Кабачковая запеканка с грибами.
  • Нежирные молочные продукты: кефир, натуральный йогурт, ряженка.

Для того чтобы утолить чувство голода и не переборщить с калориями, отдайте предпочтение продуктам с высоким содержанием клетчатки, но с минимальным количеством углеводов. Это могут быть стебли сельдерея, хлебцы с отрубями, смузи из овощей и зелени.

Вкусные и полезные перекусы на ночь

К ночным перекусам следует отнестись с особым вниманием. Как уже говорилось, он должен содержать белок с минимальным количеством жира, быть легкоусвояемым и при этом надолго насыщать организм (ведь впереди целая ночь!).

Вариантом вечернего перекуса может быть творог низкой жирности или порция казеинового коктейля MICELLAR CASEIN.

Как выбрать полезный перекус из магазина?

Выбирая полезные снеки на полках магазина, не забудьте взглянуть на составы продуктов. Часто полезные и низкокалорийные продукты, как это указано на упаковке, совсем не являются таковыми и скрывают в своем составе большое количество вредных компонентов. Какие ингредиенты вас должны насторожить:

  • Трансжиры и гидрогенизированные растительные масла;
  • Сахар, глюкозо-фруктозные сиропы и другие вредные сахарозаменители типа аспартама;
  • Мука и крахмал;
  • Сомнительные добавки: синтетические ароматизаторы, красители, ГМО и другие.

Особое внимание уделите составу при выборе полезных батончиков и печенья для правильного перекуса, ведь именно в этих продуктах чаще всего встречаются перечисленные выше ингредиенты. Правильные батончики для перекуса содержат злаки, фрукты и ягоды, а также семена льна, подсолнечника, кунжута или тыквы. В их составе нет добавленного сахара, трансжиров и красителей. Также белковый батончик без сахара и вышеназванных добавок может быть вкусным сладким перекусом, который идеально подойдет для второго завтрака.

А любители выпечки оценят вкусное протеиновое печенье PRIMEBAR от Prime Kraft с самым высоким содержанием белка на российском рынке. В составе продукта нет муки, трансжиров и сахара. При этом в одной порции печенья содержится 23 грамм протеина (1/3 суточной нормы) и пребиотик для хорошего пищеварения. Это настоящая мечта для сладкоежек. На одно печенье 55 грамм всего 9 грамм углеводов, а в формате mini – на 35 грамм печенья 7,7 грамм углеводов. Минимум вреда для фигуры и максимум сытости до следующего приема пищи.

Теперь вы знаете, как выбрать полезные снеки в магазине или приготовить их самостоятельно. С таким разнообразием правильных перекусов придерживаться сбалансированного питания будет легко и вкусно.

Питайтесь правильно и меняйтесь к лучшему вместе с Prime Kraft!

По промокоду BLOG в официальном интернет-магазине primekraft.ru скидка на весь ассортимент 10%! Доставка по всей России.

3 рецепта ПП-десертов

15.10.2019

Если вы перешли на правильное питание, значит, во многом себя ограничиваете. Во всяком случае, точно обходите магазинные тортики и сладости стороной. Но мы знаем: вкусненького хочется всем. Чтобы не сорваться на вредные продукты, отправляйтесь на кухню. Мы отыскали 3 рецепта ПП-десертов, готовить которые быстро и просто. И никакого вреда для фигуры! Честное слово.


Панакота

Всем, кто не прочь поностальгировать об ушедшем лете, посвящается. В этом десерте вы вновь ощутите вкус сочных ягод. А нежное молочно-кокосовое облачко станет приятным бонусом.

Количество калорий на 100 г: 56.


Ингредиенты:

  • 150 г коровьего молока (жирность 1,5 %),
  • 100 г ягод (подойдёт ежевика, малина, клубника или другие на ваш вкус),
  • 50 г воды,
  • 10 г кокосовой стружки,
  • 10 г желатина,
  • подсластитель по вкусу.

Как готовить

  1. С помощью блендера сделайте из ягод пюре. Влейте к ним воду, добавьте 5 г желатина и подсластитель. Подогревайте смесь на плите, пока желатин не растворится. Первый слой готов — разлейте его по формочкам или стаканам.
  2. Налейте в кастрюлю молоко, добавьте подсластитель и кокосовую стружку. Дождитесь, пока молоко нагреется, и покипятите его 3 минуты.
  3. Снимите молоко с огня и остудите. Всыпьте 5 г желатина и снова нагревайте, пока он не растворится. Важно не вскипятить смесь второй раз.
  4. Разлейте второй слой по формочкам и поставьте десерт в холодильник на час.
  5. Достаньте, украсьте сверху ягодами и затем наслаждайтесь.

Шоколадное суфле

Его можно готовить в двух видах: с бисквитной основой и без неё. Советуем выбрать первый вариант, если дома есть рисовая мука. И не пугайтесь, что рецепт длинноват, на самом деле всё просто. Правда, чашками придётся запастись 😊

Количество калорий на 100 г: без бисквита — 117, с бисквитом — 156.


Ингредиенты для суфле:

  • 240 г обезжиренного творога,
  • 2 яичных белка,
  • 80 г коровьего молока,
  • 30 г протеина (по желанию),
  • 10 г какао-порошка,
  • 5 г желатина,
  • подсластитель по вкусу.

Для бисквита:

  • 45 г коровьего молока,
  • 1 яйцо,
  • 10 г рисовой муки,
  • 10 г клетчатки,
  • 8 г какао-порошка,
  • 1 ч. л. разрыхлителя,
  • подсластитель по вкусу.

Как готовить суфле

  1. Возьмите 3 миски. В первой взбейте белки. Во второй смешайте творог, какао, подсластитель и протеин (если хотите его добавить). В третью насыпьте желатин и влейте к нему нагретое молоко (должно быть тёплым, а не горячим).
  2. Подождите 7 минут, пока желатин настоится. Затем подогрейте его в микроволновке. Гранулы должны расщепиться.
  3. Вытащите желатин из микроволновки и добавьте его к творожной смеси. Перемешайте вручную. Добавьте белки и снова перемешайте.

Как готовить бисквит

  1. Возьмите 2 миски. В первой взбейте белки. В другой смешайте оставшиеся ингредиенты для бисквита. Помешивая, аккуратно влейте белки во вторую чашу.
  2. Вылейте полученное тесто в форму диаметром не больше 15 см и выпекайте 10–15 минут при температуре 180 °С.

Как соединить слои

  1. Когда бисквит будет готов, выньте его и дайте остыть. Затем оберните форму пищевой плёнкой, положите внутрь бисквит и вылейте сверху смесь для суфле. Отправьте всё застывать в холодильник на 2–4 часа.
  2. Перед подачей украсьте листиками мяты. Также сверху можно растопить пару долек горького шоколада.


Умное пирожное

Умное оно не только потому, что бережёт фигуру: десерт самостоятельно делится на слои в процессе приготовления. Верхний слой напоминает нежный бисквит, средний — заварной крем, а нижний — густое суфле. Просто ум отъешь…

Количество калорий на 100 г: 145.


Ингредиенты:

  • 0,5 л коровьего молока,
  • 100 г рисовой муки,
  • 60 г кукурузного крахмала,
  • 4 яйца,
  • ванилин по вкусу,
  • подсластитель по вкусу.

Как готовить

  1. Отделите белки от желтков.
  2. Венчиком взбейте желтки с молоком и постепенно добавляйте к смеси сухие ингредиенты.
  3. Добавьте взбитые белки и хорошо перемешайте тесто.
  4. Вылейте тесто в форму и выпекайте при температуре 140 °С в течение 50 минут.
  5. Затем выключите духовку и оставьте десерт внутри на 3–5 часов. Обратите внимание: дверцу в это время (и во время выпечки тоже) открывать нельзя, иначе слои не получатся.

Ешьте вкусненькое и оставайтесь в форме!

Обратная сторона ПП – Green Gorillaz

Вставая на тропу правильного питания, ты и не подозреваешь, какими проблемами с головой и психикой это может обернуться, ПП в современном его понимании имеет мало общего со здоровым питанием.

ПП это строго лимитированный рацион, который состоит из скудного набора разрешенных продуктов. Готовятся эти продукты исключительно на пару или запекаются. В список, который можно, точно попадают овощи, яичные белки, овсяные хлопья, цельная овсянка, гречка,бурый или дикий рис, отруби и клетчатка, рыба и морепродукты, индейка.

Все остальное нельзя — ну, или в очень мизерном количестве.

Вся еда непременно взвешивается вплоть до грамма и проходит проверку на соответствие КБЖУ(калорийность, белки, жиры, углеводы).
Белки — это абсолютно безопасно, по версии ПП.
Углеводы откладываются в жир, поэтому за ними нужен глаз да глаз.
Дневной рацион дробится на 5−6 приемов пищи. Есть нужно каждые 2,5−3 часа.

Есть еще такое понятие, как читмил, он же санкционированный зажор. Но читмил звучит модно. Это когда раз в неделю ПП-адепт позволяет себе в один прием пищи съесть все, что ему захочется. В неограниченном количестве.

Чувство вины перед собой в этой истории случается гораздо чаще, чем удовольствие от еды. Ты приходишь на мероприятие и, когда видишь еду, начинаешь нервничать. Ты срываешься на сладкое и потом коришь себя за это, обещая непременно увеличить порцию кардио на следующей тренировке. Ты постоянно находишься в войне с самим собой и со своей едой.

Еда должна доставлять удовольствие так же, как и другие физиологические потребности человека! Если вы воспринимаете еду как белки, жиры и углеводы в строго разрешенных пропорциях, у вас уже проблемы. В тот момент, когда вы ловите себя на чувстве вины за съеденное, можете начинать бить тревогу: ваша голова и тело потеряли взаимопонимание. И дальше либо вы возьмете себя в руки сами, либо рано или поздно это придется сделать психотерапевту.

протеинов тегумента цитомегаловируса человека (стр65, стр71, стр150, стр28) | Журнал вирусологии

  • 1.

    Мокарски Э.С., Шенк Т., Пасс РФ: Цитомегаловирусы. В Поля вирусологии . 5-е издание. Отредактировано: Knipe DM, Howley PM. Филадельфия, Пенсильвания: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2007: 2701-2772.

    Google Scholar

  • 2.

    Селинский С., Люк С., Влох М., Геалл А., Хермансон Г., и др. .: Вакцина на основе ДНК для профилактики заболеваний, связанных с цитомегаловирусом человека. Human Vaccines 2005, 1: 16-23.

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 3.

    Sinzger C, Grefte A, Plachter B, Gouw ASH, The TH, Jahn G: Фибробласты, эпителиальные клетки, эндотелиальные клетки и клетки гладких мышц являются основными мишенями цитомегаловирусной инфекции человека в тканях легких и желудочно-кишечного тракта. J Gen Virol 1995, 76: 741-750. 10.1099 / 0022-1317-76-4-741

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 4.

    Soderberg-Naucler C: Играет ли цитомегаловирус причинную роль в развитии различных воспалительных заболеваний и рака? J Intern Med 2006, 259: 219-246. 10.1111 / j.1365-2796.2006.01618.x

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 5.

    Steininger C: Клиническая значимость цитомегаловирусной инфекции у пациентов с нарушениями иммунной системы. Clin Microbiol Infect 2007, 13: 953-963.10.1111 / j.1469-0691.2007.01781.x

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 6.

    Гросс С.Д., Росс Д.С., Доллард SC: Врожденная цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция как причина постоянной двусторонней потери слуха: количественная оценка. J Clin Virol 2008, 41: 57-62. 10.1016 / j.jcv.2007.09.004

    PubMed Статья Google Scholar

  • 7.

    Koch S, Solana R, Dela Rosa O, Pawelec G: Человеческая цитомегаловирусная инфекция и Т-клеточная иммуносенесценция: мини-обзор. Mech Aging Dev 2006, 127: 538-543. 10.1016 / j.mad.2006.01.011

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 8.

    Saffert RT, Penkert RR, Kalejta RF: Клеточный и вирусный контроль над начальными событиями экспериментальной латентности человеческого цитомегаловируса в CD34 + клеток. J Virol 2010, 84: 5594-5604. 10.1128 / JVI.00348-10

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 9.

    Мокарски Е.С., Шенк Т., Пасс РФ: Цитомегаловирусы. В областях вирусологии . 5-е издание. Отредактировано: Knipe DM, Howley PM. Филадельфия, Пенсильвания: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2007: 2701-2772.

    Google Scholar

  • 10.

    Biron KK: Противовирусные препараты от цитомегаловирусной болезни. Antivir Res 2006, 71: 154-163. 10.1016 / j.antiviral.2006.05.002

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 11.

    Шенк Томас, Стински Марк F: Цитомегаловирус человека. В Текущие темы в микробиологии и иммунологии . Том 325 . 1-е издание. Берлин: Springer; 2008. Печать

    Google Scholar

  • 12.

    Калейта РФ: Тегументные белки цитомегаловируса человека. Microbiol Mol Biol Rev 2008, 72: 249-265. 10.1128 / MMBR.00040-07

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 13.

    Sinclair J, Sissons P: Латентность и реактивация цитомегаловируса человека. J Gen Virol 2006, 87: 1763-1779. 10.1099 / vir.0.81891-0

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 14.

    Irmiere A, Gibson W: Выделение и характеристика неинфекционных вирионоподобных частиц, высвобождаемых из клеток, инфицированных человеческими штаммами цитомегаловируса. Вирусология 1983, 130: 118-133. 10.1016 / 0042-6822 (83)

    -8

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 15.

    Чен Д.Х., Цзян Х., Ли М., Лю Ф., Чжоу Чж .: Трехмерная визуализация взаимодействий тегумент / капсид в интактном цитомегаловирусе человека. Вирусология 1999, 260: 10-16. 10.1006 / viro.1999.9791

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 16.

    Варнум С.М., Стреблов Д.Н., Монро М.Э., Смит П., Окберри К.Дж., Паша-Толик Л., Ван Д., Кэмп Д.Г., Родланд К., Уайли С., Бритт В., Шенк Т., Смит Р.Д., Нельсон Дж .: Идентификация белков в частицах цитомегаловируса человека (HCMV): протеом HCMV. J Virol 2004, 78: 10960-10966.10.1128 / JVI.78.20.10960-10966.2004

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 17.

    Калейта РФ: Функции тегументных белков цитомегаловируса человека до экспрессии непосредственно ранних генов. Curr Top Microbiol Immunol 2008, 325: 101-116. 10.1007 / 978-3-540-77349-8_6

    PubMed CAS Google Scholar

  • 18.

    Chevillotte M, Landwehr S, Linta L, Frascaroli G, Lüske A, et al. .: Основной белок тегумента pp 65 цитомегаловируса человека необходим для включения pUL69 и pUL97 в вирусную частицу и для роста вируса в макрофагах . J Virol 2009, 83: 2480-2490. 10.1128 / JVI.01818-08

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 19.

    McLaughlin-Taylor E, Pande H, Forman SJ, Tanamachi B, Li CR, Zaia JA, Greenberg PD, Riddell SR: Идентификация основного белка pp 65 матрикса позднего цитомегаловируса человека в качестве антигена-мишени для CD8 вирусспецифические цитотоксические Т-лимфоциты. J Med Virol 1994, 43: 103-110. 10.1002 / jmv.18119

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 20.

    Odeberg J, Plachter B, Branden L, Soderberg-Naucler C: Человеческий цитомегаловирусный белок pp 65 опосредует накопление HLA-DR в лизосомах и разрушение альфа-цепи HLA-DR. Кровь 2003, 101: 4870-4877. 10.1182 / кровь-2002-05-1504

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 21.

    Gilbert MJ, Riddell SR, Plachter B, Greenberg PD: Цитомегаловирус избирательно блокирует процессинг антигена и презентацию своего генного продукта немедленного происхождения. Природа 1996, 383: 720-722. 10.1038 / 383720a0

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 22.

    Gilbert MJ, Riddell SR, Plachter B, Greenberg PD: Цитомегаловирус избирательно блокирует процессинг антигена и презентацию своего продукта гена немедленного раннего возраста. Природа 1996, 383: 720-722. 10.1038 / 383720a0

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 23.

    Арнон Т.И., Ахдаут Х., Леви О, Маркель Дж., Салех Н., Кац Дж., Газит Р., Гонен-Гросс Т., Ханна Дж., Нахари Е., Поргадор А., Хонигман А., Пласттер Б, Меворах Д., Вольф Д.Г., Мандельбойм O: Ингибирование активирующего рецептора NKp30 с помощью стр. 65 цитомегаловируса человека. Nat Immunol 2005, 6: 515-523.

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 24.

    Арнон Т.И., Маркель Г., Мандельбойм О: Распознавание опухолей и вирусов рецепторами естественных клеток-киллеров. Semin Cancer Biol 2006, 16: 348-358. 10.1016 / j.semcancer.2006.07.005

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 25.

    Abate DA, Watanabe S, Mocarski E: Основной структурный белок цитомегаловируса человека pp 65 (ppUL83) предотвращает активацию фактора 3 ответа на интерферон в ответе на интерферон. J Virol 2004, 78: 10995-11006. 10.1128 / JVI.78.20.10995-11006.2004

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 26.

    Spaete RR, Mocarski ES: Регулирование экспрессии гена цитомегаловируса: α- и β-промоторы трансактивируются вирусными функциями в пермиссивных фибробластах человека. Дж. Вирол 1985, 56: 135-143.

    PubMed CAS PubMed Central Google Scholar

  • 27.

    Саломони П., Хелифи А.Ф.: Daxx: белок смерти или выживания? Trends Cell Biol 2006, 16: 97-104. 10.1016 / j.tcb.2005.12.002

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 28.

    Saffert RT, Kalejta RF: Инактивация внутренней клеточной иммунной защиты, опосредованной Daxx, является механизмом, посредством которого белок pp 71 цитомегаловируса человека стимулирует экспрессию вирусных немедленных ранних генов. J Virol 2006, 80: 3863-3871. 10.1128 / JVI.80.8.3863-3871.2006

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 29.

    Baldick CJ, Marchini A, Patterson CE, Shenk T: Тегументный белок цитомегаловируса человека pp 71 (ppUL82) усиливает инфекционность вирусной ДНК и ускоряет инфекционный цикл. J Virol 1997, 71: 4400-4408.

    PubMed CAS PubMed Central Google Scholar

  • 30.

    Trgovcich J, Cebulla C, Zimmerman P, Sedmak DD: Человеческий цитомегаловирусный белок pp 71 нарушает экспрессию на поверхности клеток основного комплекса гистосовместимости класса I. J Virol 2006, 80: 951-63. 10.1128 / JVI.80.2.951-963.2006

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 31.

    Тандон Р., Мокарски ES: Контроль событий созревания цитоплазмы с помощью белка тегумента цитомегаловируса, стр. 150. J Virol 2008, 82: 9433-9444. 10.1128 / JVI.00533-08

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 32.

    Seo JY, Britt WJ: Цитоплазматическая оболочка цитомегаловируса человека требует постлокализационной функции тегументного белка pp 28 внутри сборочного отсека. J Virol 2007, 81: 6536-6547. 10.1128 / JVI.02852-06

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 33.

    Compton T, Nepomuceno RR, Nowlin DM: Человеческий цитомегаловирус проникает в клетки-хозяева путем pH-независимого слияния на поверхности клетки. Вирусология 1992, 191: 387-395. 10.1016 / 0042-6822 (92) -9

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 34.

    Arcangeletti MC, Rodighiero I, Mirandola P, De Conto F, Covan S, Germini D, Razin S, Dettori G, Chezzi C: Зависимая от клеточного цикла локализация фосфопротеина человеческого цитомегаловируса UL83 в ядрышке и модуляция экспрессии вирусных генов в фибробластах эмбриона человека in vitro. J Cell Biochem 2011, 112: 307-317. 10.1002 / jcb.22928

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 35.

    Sanchez V, Greis KD, Sztul E, Britt WJ: Накопление тегумента вириона и белков оболочки в стабильном цитоплазматическом компартменте во время репликации цитомегаловируса человека: характеристика потенциального сайта сборки вируса. J Virol 2000, 74: 975-986.10.1128 / JVI.74.2.975-986.2000

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 36.

    Sanchez V, Mahr JA, Orazio NI, Spector DH: Ядерный экспорт тегументного белка цитомегаловируса человека pp 65 требует активности циклин-зависимой киназы и экспортера Crm1. J Virol 2007, 81: 11730-11736. 10.1128 / JVI.02760-06

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 37.

    Saffert RT, Penkert RR, Kalejta RF: Клеточный и вирусный контроль над начальными событиями экспериментальной латентности человеческого цитомегаловируса в клетках CD34 +. J Virol 2010, 84: 5594-5604. 10.1128 / JVI.00348-10

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 38.

    Hensel GM, Meyer HH, Buchmann I, Pomnmerehne D, Schmolke S, Plachter B, Radsak K, Kern HF: Внутриклеточная локализация и экспрессия матричного фосфопротеина цитомегаловируса человека pp 71 (UL82): доказательства его транслокация в ядро. J Gen Virol 1996, 77: 3087-3097. 10.1099 / 0022-1317-77-12-3087

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 39.

    Hensel G, Meyer H, Gartner S, Brand G, Kern HF: Ядерная локализация тегументного белка цитомегаловируса человека pp 150 (ppUL32). J Gen Virol 1995, 76: 1591-1601. 10.1099 / 0022-1317-76-7-1591

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 40.

    AuCoin DP, Smith GB, Meiering CD, Mocarski ES: Бета-герпесвирус-консервативный белок тегумента цитомегаловируса ppUL32 (pp 150) контролирует цитоплазматические события во время созревания вириона. J Virol 2006, 80: 8199-8210. 10.1128 / JVI.00457-06

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 41.

    Sanchez V, Sztul E, Britt WJ: Человеческий цитомегаловирус pp 28 (UL99) локализуется в цитоплазматическом компартменте, который перекрывает эндоплазматический ретикулум-промежуточный компартмент Гольджи. Дж. Вирол 2000, 74: 3842-3851. 10.1128 / JVI.74.8.3842-3851.2000

    PubMed CAS PubMed Central Статья Google Scholar

  • 42.

    Shaner NC, Patterson GH, Davidson MW: Достижения в технологии флуоресцентных белков. J Cell Sci 2007, 120: 4247-4260. 10.1242 / jcs.005801

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 43.

    Chalfie M, Tu Y, Euskirchen G, Ward WW, Prasher DC: Зеленый флуоресцентный белок как маркер экспрессии гена. Наука 1994, 263: 802-805. 10.1126 / science.8303295

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 44.

    Цзянь Р.Ю.: Зеленый флуоресцентный белок. Анну Рев Биохим 1998, 67: 509-544. 10.1146 / annurev.biochem.67.1.509

    PubMed CAS Статья Google Scholar

  • 45.

    Томтишен Джон Пол: Субклеточная локализация тегументного белка человеческого цитомегаловируса . Бакнеллский университет, Льюисбург; 2011. Бакалавр с отличием. Печать

    Google Scholar

  • 46.

    Schmolke S, Drescher P, Jahn G, Plachter B: Ядерное нацеливание на белок тегумента pp 65 (UL83) цитомегаловируса человека: необычный сигнал двусторонней ядерной локализации функционирует вместе с другими частями белка, опосредуя его эффективный ядерный транспорт. J Virol 1995, 69: 1071-1078.

    PubMed CAS PubMed Central Google Scholar

  • D Белки и аминокислоты – Избранная библиография | Роль белка и аминокислот в поддержании и повышении производительности

    Aulick, L.H., and D.W. Уилмор. 1979. Повышенное высвобождение периферических аминокислот после ожоговой травмы. Хирургия 30: 196-197.

    Бейкер-Фулько, К.J., J.C. Buchbinder, S.A. Torri и E.W. Askew. 1992. Диетический статус кандидатов в офицеры морской пехоты. Кормили. Являюсь. Soc. Exp. Биол. J. [FASEB J] 6 (4): A1682.

    Бейкер-Фулько, К.Дж., С.А. Торри, Дж. Э. Арсено и Дж. К. Бухбиндер. 1994. Влияние изменений в меню, направленных на популяризацию тренировочной диеты [аннотация]. Варенье. Рацион питания. Ассн. 94: A9.

    Baker-Fulco, C.J. 1995. Обзор рациона питания во время военных учений. Стр. 121-149 в Недостаточное питание, преодоление недостаточного потребления военных пайков, Б.М. Марриотт, изд. Институт медицины. Вашингтон, округ Колумбия: National Academy Press.

    Balagopal, P., O.E. Ройакерс, Д. Адей, П.А. Адес, К.С. Наир. 1997. Влияние старения на синтез тяжелой цепи миозина и саркоплазматического белка в скелетных мышцах in vivo у людей. Являюсь. J. Physiol. 273: E790-E800

    Ballevre, O., A. Cadenhead, A.G. Calder, W.D. Rees, G.E. Лоблей, М.Ф. Фуллер и П.Дж. Гарлик. 1990. Количественное распределение окисления треонина у свиней: влияние диетического треонина.Являюсь. J. Physiol. 259: E483-E491.

    Бэмс, Дж. Л., и Д. Р. Миранда. 1985. Исход и стоимость интенсивной терапии. Intensive Care Med. 11: 234-241.

    Бандерет, Л.Е., и Х.Р. Либерман. 1989. Лечение тирозином, предшественником нейромедиаторов, снижает экологический стресс у людей. Brain Res. Бык. 22: 759-762.

    Банистер, E.W. и B.J.C. Кэмерон. 1990. Гипераммониемия, вызванная физической нагрузкой: периферические и центральные эффекты. Int. J. Sports Mad. 11: S129-S142.

    Барарк-Ньето, М., Г. Спурр, Х. Лотеро и М. Максуд. 1978. Состав тела при хроническом недоедании. Являюсь. J. Clin. Nutr. 31: 23-41.

    Barbul, A., S.A. Lazarou, D.T. Efron, H.L. Wasserkrug, and G.Efron. 1990. Аргинин усиливает заживление ран и иммунный ответ лимфоцитов у людей. Хирургия 108 (2): 331-336.

    Basile-Filho, A., L. Beaumier, A.E. El-Khoury, Y.M. Yu, M. Kenneway, R.E. Глисон, В. Молодой. 1998. Круглосуточная потребность в ароматических аминокислотах L- [L- 13 C] тирозина и L- [3,3- 2 H] фенилаланина для перорального применения в ароматических аминокислотах.Являюсь. J. Clin. Nutr. 67: 640-659

    Baumgartner, R.N., W.C. Chumlea и A.F. Roche. 1989. Оценка состава тела по биоэлектрическому импедансу сегментов тела. Являюсь. J. Clin. Nutr. 50 (2): 221-226.

    Баумгартнер Р.Н., Р.Л. Райн, П.Дж. Гарри, С.Б. Хеймсфилд. 1993. Методы визуализации и анатомический состав тела при старении. J Nutr. 123: 444-448.

    Баумгартнер, Р.Н., Р. Росс, С.Б. Хеймсфилд, З. Ван, Д. Галлахер, Ю. Мартель, Дж. Де Гиз, У. Брукс. Под давлением.Перекрестная проверка методов DXA и МРТ для количественной оценки аппендикулярных скелетных мышц. Прикладное излучение и изотопы.

    Bay, W.H., и L.A. Hebert. 1987. Доноры почек и потребление белка [письмо в редакцию]. Аня. Междунар. Med. 107: 427.

    Bean, WB., J.B. Youmans, W.F. Эш, Н. Нельсон, Д. Белл, Л.М. Ричардсон, К.Э. Френч, К.Р. Хендерсон, Р. Джонсон, Г. Эшмор, К. Халверсон и Дж. Райт. 1944. Проект № 30: Проверка приемлемости и адекватности оловянных пайков армии США C, K и 10-в-1 и канадской армии.Форт-Нокс, штат Кентукки: бронированная медицинская исследовательская лаборатория.

    Бин, У. Б., К. Р. Хендерсон, Р. Э. Джонсон и Л.М. Ричардсон. 1946. Обзор питания в Тихоокеанском театре военных действий. Сообщите главному хирургу. Бык. Мед. Отдел 5 (6): 697.

    Бегум, А., А.Н. Радхакришнан и С. Перейра. 1970. Влияние аминокислотного состава зерновых диет на рост дошкольников. Являюсь. J. Clin. Nutr. 23: 1175-1183.

    Beisel, W.R. 1992. Метаболические реакции хозяина на инфекции.Стр. 1-13 в Учебнике детских инфекционных болезней, Vol. I, 3-е изд., Р.Д. Фейгин, Дж. Д. Черри, ред. Филадельфия: W.B. Saunders Co.

    Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

    Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

    Отчетливые конформационные состояния спайкового белка SARS-CoV-2

    Динамический вирусный спайк

    Усилия по защите человеческих клеток от тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), были сосредоточены на тримерном спайковом белке (S).Несколько структур показали стабилизированный эктодомен шипа в его префузионной конформации. Cai et al. теперь дает представление о структурных изменениях в S-белке, которые приводят к слиянию мембран вируса и клетки-хозяина. Они очистили полноразмерный S-белок и определили структуры криоэлектронной микроскопии как до, так и после слияния. Эти структуры дополняют наше понимание функции S-белка и могут использоваться при разработке вакцины.

    Наука , в этом выпуске стр.1586

    Abstract

    Срочно необходимы стратегии вмешательства для борьбы с пандемией тяжелого острого респираторного синдрома, вызванного коронавирусом 2 (SARS-CoV-2). Белок тримерного вирусного шипа (S) катализирует слияние между вирусной и клеточной мембранами-мишенями, чтобы инициировать инфекцию. Здесь мы сообщаем о двух структурах для криоэлектронной микроскопии, полученных из препарата полноразмерного S-белка, представляющих его префузионные (разрешение 2,9 ангстрем) и пост-слияния (разрешение 3,0 ангстрем) конформации, соответственно.Спонтанный переход в состояние после слияния не зависит от клеток-мишеней. Тример до слияния имеет три рецептор-связывающих домена, зажатых сегментом, примыкающим к слитому пептиду. Постфузионная структура стратегически украшена N-связанными гликанами, что указывает на возможную защитную роль против иммунных ответов хозяина и суровых внешних условий. Эти результаты улучшают наше понимание проникновения SARS-CoV-2 и могут направлять разработку вакцин и терапевтических средств.

    Текущая пандемия коронавируса имеет разрушительные социальные и экономические последствия.Коронавирусы (CoV) представляют собой оболочечные вирусы с положительной цепью РНК. К ним относятся тяжелый острый респираторный синдром (SARS) и ближневосточный респираторный синдром (MERS), оба из которых были связаны со значительными летальными исходами ( 1 3 ), а также несколько эндемичных вирусов простуды ( 4 ). ). При большом количестве подобных вирусов, циркулирующих среди летучих мышей и верблюдов ( 5 8 ), возможность дополнительных вспышек представляет собой серьезную угрозу для здоровья населения во всем мире.Текущее заболевание, коронавирусное заболевание 2019 (COVID-19), которое вызывается новым вирусом SARS-CoV-2 ( 9 ), создало острую потребность в диагностике, терапии и вакцинах. Удовлетворение этих потребностей требует глубокого понимания взаимосвязи структура-функция вирусных белков и соответствующих факторов хозяина.

    Для всех вирусов в оболочке слияние мембран является ключевым ранним шагом для проникновения в клетки-хозяева и установления инфекции ( 10 ). Хотя это энергетически выгодный процесс, слияние мембран имеет высокие кинетические барьеры, когда две мембраны сближаются, в основном из-за сил отталкивания гидратации ( 11 , 12 ).Для слияния вирусных мембран свободная энергия для преодоления этих кинетических барьеров происходит от рефолдинга кодируемых вирусом слитых белков из праймированного, метастабильного конформационного состояния до слияния в стабильное состояние после слияния ( 13 15 ). Слитый белок для CoV – это его шипованный (S) белок, который украшает поверхность вириона в виде обширной короны (отсюда «корона»). Белок также вызывает нейтрализующие реакции антител и, следовательно, является важной мишенью для разработки вакцины ( 16 ).Белок S представляет собой сильно гликозилированный мембранный белок типа I, закрепленный в вирусной мембране. Сначала он продуцируется как предшественник, который тримеризируется и, как полагают, расщепляется фурин-подобной протеазой на два фрагмента: рецептор-связывающий фрагмент S1 и слитый фрагмент S2 (рис. 1A) ( 17 ). Связывание через рецептор-связывающий домен (RBD) в S1 с рецептором клетки-хозяина [ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2) как для SARS-CoV, так и для SARS-CoV-2] и дальнейшее протеолитическое расщепление на втором сайте в S2 ( S2 ‘) сериновой протеазой, трансмембранной сериновой протеазой 2 (TMPRSS2) ( 18 ) или эндосомными цистеиновыми протеазами, катепсинами B и L (CatB / L), которые, как полагают, запускают диссоциацию S1 и необратимое преобразование S2 в постфузионная конформация, тримерная шпилька, образованная гептадным повтором 1 (HR1) и гептадным повтором 2 (HR2) ( 19 , 20 ).Эти большие структурные перестройки объединяют вирусные и клеточные мембраны, в конечном итоге приводя к слиянию двух бислоев.

    Рис. 1. Приготовление полноразмерного спайкового белка SARS-CoV-2.

    ( A ) Схематическое изображение конструкции экспрессии полноразмерного белка SARS-CoV-2 S. Сегменты S1 и S2 включают NTD, RBD, CTD1, CTD2, S1 / S2, S2 ‘, FP, FPPR, HR1, CH, CD, HR2, TM, CT и древовидные символы для гликанов. Стреп-метку сливали с С-концом S-белка гибким линкером.( B ) Очищенный белок S разделяли гель-фильтрационной хроматографией на колонке Superose 6 в присутствии NP-40. Стандарты молекулярной массы включают тиоглобулин (670 кДа), γ-глобулин (158 кДа) и овальбумин (44 кДа). Три основных пика (пики I, II и III) содержат белок S. ( C ) Загружаемый образец и фракции пиков из (B) анализировали с помощью SDS-PAGE, окрашенного кумасси синим. Меченые полосы были подтверждены вестерн-блоттингом (S, S1 и S2) или секвенированием белков (S2 и Cont; полосы S и S1 не дали каких-либо значимых результатов, вероятно, из-за заблокированного N-конца).Cont, совместно очищенный загрязняющий белок, идентифицированный как предшественник BiP шаперона эндоплазматического ретикулума путем N-концевого секвенирования. * Предполагаемый фрагмент S1 / S2-S2 ‘. Также показаны репрезентативные изображения и двумерные средние значения трех фракций пиков, полученные с помощью ЭМ отрицательного окрашивания. Размер ящика двумерных средних составляет ~ 510 Å.

    С тех пор, как была выпущена первая последовательность генома SARS-CoV-2 ( 21 ), сообщалось о нескольких структурах для S-белковых комплексов, включая эктодомен, стабилизированный в конформации до слияния ( 22 24 ) и RBD -АСЕ2 комплексы ( 25 28 ) (рис.S1), опираясь на предыдущий успех структурной биологии белков S из других CoV ( 20 ). В стабилизированном S-эктодомене S1 складывается в четыре домена, N-концевой домен (NTD), RBD и два C-концевых домена (CTD), и защищает префузионную конформацию S2, в которой HR1 отклоняется назад к вирусной мембране. (рис. S1, A и B). RBD выбирает две различные конформации: «вверх» представляет состояние, доступное для рецептора, а «вниз» – состояние, недоступное для рецептора.Структуры, представляющие состояние после слияния S2 от вируса гепатита мышей (MHV) (рис. S1E), и структуры с более низким разрешением от SARS-CoV (рис. S1F) предполагают, как структурные перестройки S2 протекают, способствуя слиянию мембран и проникновению вируса. ( 29 , 30 ). Сравнение состояний до и после слияния показывает, что HR1 претерпевает переход «складной нож», который может вставлять слитый пептид (FP) в мембрану клетки-мишени. При складывании HR2 FP и трансмембранные (TM) сегменты располагаются на одном конце молекулы, в результате чего мембраны, с которыми они взаимодействуют, изгибаются друг к другу, эффективно приводя к слиянию мембран.В предыдущих структурах области около вирусной мембраны либо не присутствовали, либо были неупорядоченными, но все они, по-видимому, играли критические структурные и функциональные роли ( 31 35 ).

    Чтобы получить более глубокое понимание, мы стремились определить состояния до и после слияния полноразмерного белка S дикого типа SARS-CoV-2.

    Результаты

    Очистка интактного S-белка

    Для получения функционального S-белка SARS-CoV-2 мы трансфицировали клетки 293 эмбриональной почки человека (HEK) с помощью конструкции экспрессии полноразмерной S-последовательности дикого типа с С-концевой Strep-tag (рис.1А). Эти клетки эффективно сливались с клетками, трансфицированными интактной конструкцией ACE2 человека, даже без добавления каких-либо дополнительных протеаз (рис. S2), что позволяет предположить, что S-белок, экспрессируемый на поверхности клеток, полностью функционален для слияния мембран. С-концевой Strep-tag не влиял на эффективность слияния. Чтобы очистить полноразмерный S-белок, мы лизировали клетки и солюбилизировали все мембраносвязанные белки в 1% детергенте NP-40. Затем меченый Strep S-белок был захвачен на смоле Strep-Tactin в 0.3% НП-40. Очищенный белок S элюируется из колонки для исключения размера в виде трех отдельных пиков в 0,02% NP-40 (фиг. 1B). Анализ с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия, окрашенным кумасси синим (SDS-PAGE) (рис. 1C), показал, что пик 1 содержит как нерасщепленный предшественник S, так и расщепленный комплекс S1 / S2; пик 2 имел в основном расщепленный, но диссоциированный фрагмент S2; и пик 3 включал в основном диссоциированный фрагмент S1, что было оценено с помощью N-концевого секвенирования и вестерн-блоттинга (фиг. S3).Это было подтверждено с помощью электронной микроскопии (ЭМ) с отрицательным окрашиванием (рис. 1С). Пик 1 показал самое сильное связывание с растворимым ACE2, сравнимое с таковым для очищенного растворимого тримерного S-эктодомена, а пик 2 показал самое слабое связывание, поскольку он содержал в основном фрагмент S2 (фиг. S4). Хотя расщепление по сайту S1 / S2 (фурин) было четко продемонстрировано секвенированием белка N-конца фрагмента S2 в пике 2, расщепление по сайту S2 ‘не было очевидным. В некоторых препаратах мы наблюдали полосу около 20 кДа, размер, ожидаемый для фрагмента S1 / S2-S2 ‘(рис.1С). Мы получили аналогичный профиль гель-фильтрации при использовании другого детергента (додецилмальтозида) для солюбилизации S-белка (рис. S5), предполагая, что диссоциация S-белка во время гель-фильтрационной хроматографии не запускается каким-либо конкретным детергентом. Мы также идентифицировали основной загрязняющий белок в препарате как предшественник шаперон-связывающего белка эндоплазматического ретикулума (BiP) ( 36 ), который может играть роль в облегчении укладки S-белка.

    Определение структуры Cryo-EM

    Крио-EM изображения были получены с выбранными сетками, подготовленными из всех трех пиков на электронном микроскопе Titan Krios, работающем при 300 кэВ и оборудованном энергетическим фильтром BioQuantum и детектором прямых электронов Gatan K3.RELION ( 37 ) использовался для отбора частиц, двухмерной (2D) классификации, трехмерной классификации и уточнения. Определение структуры выполнялось с помощью этапов трехмерной классификации, уточнения и скрытого местного уточнения, как описано в дополнительных материалах. Конечное разрешение составляло 2,9 Å для белка S перед слиянием и 3,0 Å для белка S2 в конформации после слияния (фиг. S6 – S9).

    Структура тримера S до слияния

    Общая архитектура полноразмерного S-белка в конформации до слияния была очень похожа на опубликованные структуры растворимого S-тримера, стабилизированного С-концевой меткой тримеризации фолдона и двумя заменами пролина при граница между HR1 и центральной спиралью (CH) в S2 (рис.S1) ( 22 , 23 ). В нашей новой структуре упорядочены N-конец, несколько периферических петель и гликаны, которые были невидимы в структурах растворимых тримеров (рис. 2, A и B, и рис. S10A). Как описано ранее, четыре домена фрагмента S1, NTD, RBD, CTD1 и CTD2, охватывают тройную ось, покрывая фрагмент S2 внизу. Сайт расщепления фурина на границе S1 / S2 находится в открытой и неупорядоченной петле (рис. 2В), поэтому неясно, представляет ли эта структура нерасщепленный или расщепленный тример, хотя образец явно содержит обе формы (рис.1С). Точно так же фрагмент S2 имеет конформацию, почти идентичную конформации в предыдущих структурах тримеров, при этом большая часть полипептидной цепи упакована вокруг центральной трехцепочечной спиральной спирали, образованной СН, включая коннекторный домен (CD), который связывает СН и C-концевой HR2 через дополнительную линкерную область. Различие между нашей структурой и опубликованными структурами тримеров состоит в том, что сегмент из 25 остатков в S2 сразу после гибридного пептида упорядочен. Сегменты HR2, TM и CT, которые не наблюдались в предыдущих структурах, все еще не видны.

    Рис. 2 Крио-ЭМ-структура белка SARS-CoV-2 S в конформации до слияния.

    ( A ) Структура тримера S моделировалась на основе карты плотности 2,9 Å. Три протомера (A, B и C) окрашены в зеленый, синий и красный цвета соответственно. ( B ) Общая структура белка S в конформации до слияния показана в виде ленты. Различные структурные компоненты в цветовой схеме, показанной на рис. 1A, включают NTD, RBD, CTD1, CTD2, FP, FPPR, HR1, CH и CD.Указаны N-конец, сайт расщепления S1 / S2 и сайт расщепления S2 ‘.

    Наша структура отличается от ранее описанных конформаций перед сваркой несколькими особенностями. Во-первых, N-конец в нашей структуре упорядочен и принимает конформацию, аналогичную конформации SARS-CoV, включая дисульфидную связь (Cys 15 –Cys 136 ) и N-связанный гликан в Asn 17 (рис. . 3А) ( 38 ). Будет важно подтвердить, разворачивается ли эта область без дисульфидной связи в стабилизированных растворимых конструкциях или она сложена и просто плохо определяется по плотности, несмотря на дисульфидную связь, особенно если эти конструкции широко используются для исследований вакцин.

    Рис. 3 Избранные новые особенности тримера SARS-CoV-2 для предварительной слияния S.

    ( A ) N-концевой сегмент белка S. N-конец находится у остатка Gln 14 после отщепления сигнального пептида. Cys 15 образует дисульфидную связь с Cys 136 . Мы наблюдали хорошую плотность для N-связанного гликана в Asn 17 . ( B ) Сегмент, расположенный непосредственно ниже слитого пептида, обозначенный как FPPR, хотя и неупорядочен в структуре стабилизированного растворимого тримерного S-эктодомена, образует плотно упакованную структуру, примыкающую к CTD1.Недавно идентифицированная структура FPPR будет конфликтовать с CTD1 в конформации RBD up. Различные области показаны в цветовой схеме на фиг. 2B. Структура растворимого тримера S с одним RBD в восходящей конформации (ID PDB: 6vyb) показана серым цветом. В рамке показан увеличенный вид FPPR с соседним гибридным пептидом как в виде поверхности, так и в виде палочки. ( C ) Тример S перед слиянием SARS-CoV-2, если смотреть вдоль оси третьего порядка, накладывается на структуру стабилизированного растворимого тримерного S-эктодомена в закрытой конформации со всеми тремя RBD в нижней конформации (PDB ID: 6vxx ).Хотя область S2 хорошо выровнена, существует значительный сдвиг (например, ~ 12 Å между двумя остатками Ala 123 ) в S1. ( D ) Влияние мутаций пролина, введенных в остатки 986 и 987, на стабилизацию конформации до слияния. Мутация K986P удаляет солевой мостик между Lys 986 одного протомера и либо Asp 427 , либо Asp 428 другого протомера в интерфейсе тримера.

    Во-вторых, другой дисульфидсодержащий сегмент (остатки с 828 по 853) непосредственно после гибридного пептида также отсутствует в структурах растворимого эктодомена, но упорядочен в нашей структуре (рис.3Б). Мы обозначили его как проксимальную область гибридного пептида (FPPR). FPPR неупорядочен как в закрытой, так и в RBD-восходящей конформациях стабилизированного растворимого тримера S. В нашей полноразмерной структуре он довольно плотно упаковывается вокруг внутренней дисульфидной связи между Cys 840 и Cys 851 , дополнительно усиленной солевым мостиком между Lys 835 и Asp 848 , а также обширным сеть водородных связей. По сравнению с конформацией RBD-вверх путем наложения остальной части S2, FPPR конфликтует с CTD1, который вращается наружу с RBD в переходе с переворачиванием вверх.Таким образом, структурированный FPPR, примыкающий к противоположной стороне CTD1 от RBD, по-видимому, помогает зажать RBD и стабилизировать закрытую конформацию S-тримера. Не очевидно, почему FPPR также не виден в опубликованной закрытой структуре S-эктодомена со всеми тремя RBD в нисходящей конформации ( 23 ). Наша структура полноразмерного S-белка предполагает, что CTD1 является структурным реле между RBD и FPPR, которое может ощущать смещение с обеих сторон. Последний напрямую связан с гибридным пептидом.Отсутствие структурированного FPPR в стабилизированном растворимом тримере S может объяснить, почему в этом препарате легко обнаруживается конформация RBD-up. Кроме того, предполагается, что мутация D614G, которая была идентифицирована в недавних изолятах SARS-CoV-2, приводит к более эффективному проникновению ( 39 , 40 ). D614 образует солевой мостик с K854 в FPPR (рис. S10B), поддерживая функциональную роль FPPR в слиянии мембран. В трехмерной классификации наших частиц до слияния из двух независимых наборов данных наблюдался только один подкласс с перевернутым RBD (рис.S6), предполагая, что конформация RBD-up относительно редко встречается в нашем препарате S полной длины. Карта для этого подкласса была уточнена до 4,7 Å без симметрии C3, и мы не смогли смоделировать FPPR. FPPR упорядочен на всех других картах с разрешением 3,5 Å или выше.

    Когда мы выровняли нашу полноразмерную структуру со структурой растворимого тримера S по части S2, три субъединицы S1 в структуре растворимого тримера переместились наружу, от оси третьего порядка, до ~ 12 Å в периферийных областях (рис.3C и рис. S11), предполагая, что полноразмерный тример S более плотно упакован среди трех протомеров, чем мутантный растворимый тример. Исследуя область рядом с мутациями пролина между HR1 и CH, мы обнаружили, что мутация K986P, по-видимому, устраняет солевой мостик между Lys 986 в одном протомере и либо Asp 427 , либо Asp 428 в другом протомере; таким образом, мутация может создать чистый заряд (три на один тример) внутри границы раздела тримера. Это может объяснить, почему растворимый тример с мутацией PP имеет более рыхлую структуру, чем полноразмерный S с последовательностью дикого типа.Приводит ли это ослабление к неупорядоченным FPPR в закрытом тримере, потребует дополнительных экспериментальных доказательств. Однако мутации пролина, предназначенные для дестабилизации конформации после слияния и усиления структуры до слияния, также могут влиять на структуру до слияния.

    Структура тримера S2 после слияния

    Трехмерная реконструкция образца из пика 2 дала структуру тримера S2 после слияния, показанную на фиг. 4A. Общая архитектура SARS-CoV-2 S2 в конформации после слияния почти идентична архитектуре опубликованной структуры, полученной из эктодомена S2 MHV, продуцируемого в клетках насекомых (рис.S1) ( 29 ). В структуре HR1 и CH образуют необычно длинную центральную трехцепочечную спиральную спираль (~ 180 Å). Коннекторный домен вместе с сегментом (остатки с 718 по 729) во фрагменте S1 / S2-S2 ‘образуют трехцепочечный β-лист, который инвариантен между структурами до и после слияния. В состоянии после слияния остатки с 1127 по 1135 присоединяются к β-листу соединителя, расширяя его на четыре нити, одновременно проецируя C-концевой HR2 к вирусной мембране. Другой сегмент (остатки 737-769) во фрагменте S1 / S2-S2 ‘составляет три спиральные области, заблокированные двумя дисульфидными связями, которые упираются в канавку СН-части спиральной спирали, образуя короткую структуру пучка из шести спиралей. (6HB-1 на рис.4Б). Неясно, расщепляется ли сайт S2 ‘, потому что он находится в неупорядоченной области, охватывающей 142 остатка (Рис. 4B), как в структуре MHV S2. Тем не менее, фрагмент S1 / S2-S2 ‘является неотъемлемой частью постфузионной структуры и не диссоциирует независимо от расщепления по сайту S2’. N-концевой участок HR2 имеет спиральную форму с одним витком, а также упирается в канавку спиральной катушки HR1; С-концевой участок HR2 образует более длинную спираль, которая составляет вторую структуру пучка из шести спиралей с остальной частью спиральной спирали HR1 (6HB-2 на рис.4Б). Таким образом, длинная центральная спиральная катушка многократно усилена вдоль своей длинной оси, что делает ее очень жесткой структурой, что видно даже из средних значений частиц класса 2D на крио-ЭМ изображениях (рис. S8).

    Рис. 4 Крио-ЭМ-структура SARS-CoV-2 S2 в конформации после слияния.

    ( A ) Структуру тримера S2 моделировали на основе карты плотности 3,0 Å. Три протомера (A, B и C) окрашены в зеленый, синий и красный цвета соответственно. ( B ) Общая структура тримера S2 в постфузионной конформации показана на ленточной диаграмме.Различные структурные компоненты в цветовой схеме, показанной на рис. 1A, включают HR1, CH, CD и HR1. Сайт расщепления S2 ‘находится в неупорядоченной петле между Ile 770 и Thr 912 . Также указаны возможные местоположения конца S2 N (сайт расщепления S1 / S2), FP и FPPR. ( C ) Карта с низким разрешением, показывающая структуру плотности для пяти N-связанных гликанов с почти равным интервалом вдоль длинной оси.

    Отличительной особенностью постфузионного S2 является украшение его поверхности N-связанными гликанами (рис.4C), что также видно в средних значениях класса 2D (рис. S8). Пять гликанов на остатках Asn 1098 , Asn 1134 , Asn 1158 , Asn 1173 и Asn 1194 расположены вдоль длинной оси с постоянным интервалом, а четыре из них выровнены на одной стороне тример. Если эти сайты гликозилирования полностью заняты разветвленными сахарами, то они могут экранировать большую часть поверхностей тримеров S2 после слияния. Подобная картина была недавно описана ( 41 ) для препарата SARS-CoV S2, полученного из растворимой конструкции эктодомена, продуцируемой в клетках насекомых и запускаемой протеолизом и низким pH.Причина этого украшения неясна, учитывая, что постфузионная структура выполнила свою миссию, и ее не нужно скрывать от иммунной системы.

    Пик 3 содержит в основном диссоциированный мономерный фрагмент S1, который является самым маленьким (~ 100 кДа) и показывает самый низкий контраст в крио-ЭМ решетках из трех типов частиц, которые мы описываем. Мы выполнили предварительный анализ 3D-реконструкции (рис. S12), дополнительно подтвердив его идентичность.

    Обсуждение

    Архитектура S-белка на поверхности вириона SARS-CoV-2

    Тот факт, что расщепленный комплекс S1 / S2 диссоциирует в отсутствие ACE2 и что фрагмент S2 принимает конформацию после слияния в мягких условиях детергента, предполагает что кинетический барьер для конформационного перехода, относящегося к проникновению вируса, неожиданно низок для этого S-белка.Неясно, связано ли это наблюдение напрямую с эффективным слиянием мембран или инфекцией. Тем не менее, стоит отметить, что тример S2 после слияния не только имеет очень стабильную и жесткую структуру, но также стратегически декорирован N-связанными гликанами вдоль своей длинной оси, как если бы он находился под селективным давлением для функций, отличных от процесса слияния мембран. Хотя некоторые предполагают, что вирусные слитые белки могут дополнительно олигомеризоваться в их постфузионной конформации, чтобы способствовать образованию пор слияния ( 42 ), выступающие поверхностные гликаны SARS-CoV-2 S2 делают этот сценарий маловероятным.Более вероятной является защитная роль, которую может играть постфузионная структура S2, если она также присутствует на поверхности инфекционного и зрелого вириона. Он может вызывать ненейтрализующие реакции антител для уклонения от иммунной системы хозяина, а также может защищать более уязвимые тримеры S1 / S2 перед слиянием в условиях вне хозяина, декорируя вирусную поверхность чередующимися жесткими шипами (рис. 5A). Несколько недавних отчетов предоставили некоторые доказательства, подтверждающие эту возможность.Во-первых, ЭМ-изображения препарата вируса SARS-CoV-2, инактивированного β-пропиолактоном, очищенного градиентом плотности тартрата калия и глицерина, по-видимому, потеряли все субъединицы S1, оставив только постфузионный S2 на поверхности вириона ( 43 ). Аналогичным образом, ЭМ-изображения кандидата на вакцину от вируса SARS-CoV-2 (PiCoVacc), инактивированного β-пропиолактоном, также показали игольчатые шипы на его поверхности ( 44 ). Во-вторых, сообщалось о спонтанном выделении SARS-CoV-2 S1 из псевдовирусов в отсутствие ACE2 ( 39 ).В-третьих, связывающие антитела против S2 легко обнаруживаются у пациентов с COVID-19 ( 45 ), что позволяет предположить, что S2 более подвержен воздействию иммунной системы хозяина, чем указывается незащищенными поверхностями на структурах перед слиянием ( 22 , 23 ) (Рис. 2). Поэтому мы предполагаем, что тримеры S2 после слияния могут выполнять защитную функцию, составляя часть короны на поверхности зрелого и инфекционного вириона SARS-CoV-2 (рис. 5). Спайки S2 после слияния, вероятно, образуются после спонтанной диссоциации S1 независимо от клеток-мишеней.

    Рис. 5 Модель структурных перестроек белка SARS-Cov-2 S.

    ( A ) Структурные изменения не зависят от клетки-мишени. Мы предполагаем, что на поверхности зрелого вириона присутствуют как префузионные, так и постфузионные спайки, и соотношение между ними может варьироваться. Показана диаграмма вириона. Пики после слияния на вирионе образуются S2 после диссоциации S1 в отсутствие ACE2. ( B ) ACE2-зависимые структурные перестройки.Структурный переход от конформации до слияния к конформации после слияния, вызывающей слияние мембран, вероятно, происходит поэтапно, как показано ниже. Во-первых, FPPR зажимает RBD через CTD1 в тримере S перед слиянием (это исследование), но иногда смещается со своего места и позволяет RBD отбирать образец восходящей конформации (PDB ID: 6vyb). Во-вторых, связывание RBD с ACE2 (PDB ID: 6m17) создает гибкий FPPR, который позволяет выявить сайт расщепления S2 ‘непосредственно перед соседним FP. Расщепление по сайту S2 ‘, и, возможно, также по сайту S1 / S2, снимает структурные ограничения на слитый пептид и инициирует каскад событий рефолдинга в S2, вероятно, сопровождаемый полной диссоциацией S1.В-третьих, образуется длинная центральная трехцепочечная спиральная катушка, и HR2 отгибается. Наконец, формируется постфузионная структура S2 (это исследование), которая объединяет две мембраны, облегчая формирование поры слияния и проникновение вируса.

    Мембранное слияние

    Мы идентифицируем структуру около слитого пептида, FPPR, которая может играть критическую роль в слитых структурных перестройках S-белка. Похоже, что между RBD и FPPR существует перекрестное взаимодействие, опосредованное CTD1, потому что структурированный FPPR зажимает RBD, тогда как конформация RBD-up нарушает FPPR.Более того, FPPR находится близко к границе S1 / S2 и сайту расщепления S2 ‘и, таким образом, может быть центром активности, относящейся к конформационным изменениям в S. Одна возможность состоит в том, что один FPPR иногда смещается из положения из-за внутренней динамики белка, позволяя RBD отбирать верхнюю конформацию. Колебание такого рода приведет к разрыхлению всего S-тримера, как это наблюдается в модифицированных конструкциях растворимого S-тримера ( 22 , 23 ). Как только RBD фиксируется в верхнем положении за счет связывания с ACE2 на поверхности клетки-мишени, гибкий FPPR может сделать возможным экспонирование сайта расщепления S2 ‘непосредственно перед соседним слитым пептидом.Фенотип мутации D614G, по-видимому, согласуется с представлением о том, что FPPR участвует в слиянии мембран ( 39 , 40 ). Расщепление по сайту S2 ‘снимает структурные ограничения на слитый пептид, который может инициировать каскад событий рефолдинга в S2, включая образование длинной центральной трехцепочечной спиральной спирали; откидная спинка HR2; и в конечном итоге слияние мембран. Расщепление по сайту S1 / S2 делает возможным полную диссоциацию S1, что также может способствовать рефолдингу S2.

    Вопросы относительно слияния мембран остаются, потому что области около вирусной мембраны все еще не видны на реконструкциях. Однако все эти регионы играют важнейшие структурные и функциональные роли. Например, консервативная гидрофобная область, непосредственно предшествующая домену TM, и, возможно, сам TM, как было показано, имеет решающее значение для тримеризации S-белка и слияния мембран ( 31 ). Считается, что цитоплазматический хвост, содержащий пальмитоилированную, богатую цистеином область, участвует в сборке вирусов и слиянии клеток ( 32 35 ).Могут ли другие вирусные белки, такие как белок М, помочь стабилизировать спайк за счет взаимодействия с HR2, остается открытым вопросом. Таким образом, нам по-прежнему нужна структура интактного S-белка с высоким разрешением в контексте мембраны и других вирусных компонентов, чтобы ответить на эти вопросы.

    Соображения по поводу разработки вакцины

    Безопасная и эффективная вакцина – это основной медицинский вариант снижения или устранения угрозы, исходящей от SARS-CoV-2. Первый цикл вакцин-кандидатов с различными формами S-белка вируса быстро проходит доклинические исследования на животных моделях и клинические испытания на людях.Наше исследование вызывает несколько потенциальных опасений по поводу текущих стратегий вакцинации. Во-первых, вакцины, использующие полноразмерную последовательность S-белка дикого типа, могут продуцировать различные формы in vivo, которые мы здесь наблюдали. Конформации после слияния могут открывать иммунодоминантные, не нейтрализующие эпитопы, которые отвлекают иммунную систему хозяина, как это было зарегистрировано для других вирусов, таких как ВИЧ-1 и RSV ( 46 , 47 ). Во-вторых, подход к стабилизации конформации до слияния путем введения мутаций пролина в остатки 986 и 987 может быть неоптимальным, поскольку мутация K986P может разрушить солевой мост между протомерами, который способствует стабильности тримеров.Полученная в результате структура S-тримера с расслабленной вершиной может индуцировать антитела, которые не могут эффективно распознавать шипы S-тримера на вирусе, хотя она может быть более эффективной в индукции нейтрализующих ответов против RBD, чем закрытая форма. В-третьих, учитывая возможность того, что постфузионный S2 присутствует на инфекционных вирионах, вакцины с использованием вирусов, инактивированных β-пропиолактоном, могут потребовать дополнительных тестов контроля качества. Хотя PiCoVacc, по-видимому, обеспечивает защиту от проблем у нечеловеческих приматов после трех иммунизаций ( 44 ), неясно, как минимизировать количество тримеров S2 после слияния, чтобы избежать вариаций партии.Дизайн иммуногена на основе структуры может быть особенно важным, если SARS-CoV-2 становится сезонным и возвращается с дрейфом антигенов, как и вирусы гриппа ( 48 ).

    Благодарности: Мы благодарим М. Ляо за щедрый совет; команду SBGrid за техническую поддержку; и С. Харрисону, М. Ляо, А. Карфи и Д. Баруху за критическое прочтение рукописи. Данные отрицательного окрашивания и крио-ЭМ были собраны в отделении молекулярной электронной микроскопии и Гарвардском центре крио-ЭМ структурной биологии, соответственно, в Гарвардской медицинской школе. Финансирование: Эта работа была поддержана грантами NIH AI147884 (для BC), 3R01AI147884-01A1S1 (для BC), AI141002 (для BC) и AI127193 (для BC и Джеймса Чоу), а также награды COVID-19 от Массачусетский консорциум по готовности к патогенам (MassCPR; до Британской Колумбии). Вклад авторов: г. до н. Э. и Ю. задумал проект. Y.C. и H.P. экспрессировали и очищали полноразмерный S-белок. T.X. экспрессировали и очищали растворимый ACE2 и проводили эксперименты по SPR и слиянию клеток. Ю.К. и Дж. З. проведен EM-анализ с отрицательным окрашиванием. J.Z. подготовили крио-ЭМ сетки и выполнили сбор ЭМ данных при участии С.М.С. и R.M.W. J.Z. обработал крио-ЭМ данные и построил и уточнил атомные модели для тримера S до слияния и тримеров S2 после слияния. Y.C. обработал данные S1. S.R. участвовал в обработке данных для S1 и оказывал вычислительную поддержку. С.Р.-В. способствовал культивированию клеток и производству белка. Все авторы проанализировали данные. B.C., Y.C., J.Z. и T.X. написал рукопись при участии всех других авторов. Конкурирующие интересы: Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов. Доступность данных и материалов: Координаты атомной структуры были депонированы в RCSB Protein Data Bank (PDB) под номерами доступа 6XR8 и 6XRA, а карты электронной микроскопии были депонированы в банке данных электронной микроскопии (EMDB) под инвентарные номера EMD-22292 и EMD-22293. Все материалы, полученные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора в соответствии с соглашением о передаче материалов с Бостонской детской больницей.Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. Эта лицензия не применяется к рисункам / фотографиям / произведениям искусства или другому контенту, включенному в статью, приписываемому третьей стороне; получить разрешение от правообладателя перед использованием такого материала.

    протеинфосфатаз и киназ | NEB

    Протеиновые фосфатазы и киназы | NEB Принимать файлы cookie

    Мы используем файлы cookie, чтобы понять, как вы используете наш сайт, и улучшить общее впечатление пользователя. Это включает в себя персонализацию контента и рекламы. Чтобы узнать больше и управлять файлами cookie, обратитесь к нашему Положению о файлах cookie .

    Список продуктов Обзор приложения

    Киназа – это фермент, который присоединяет фосфатную группу к белку. Фосфатаза – это фермент, который удаляет фосфатную группу из белка.Вместе эти два семейства ферментов действуют, чтобы модулировать активность белков в клетке, часто в ответ на внешние раздражители. Настоящая система красный / зеленый свет, киназы обычно включают белок, а фосфатаза отключает белок.


    Выберите тип:
    Распознавание субстрата протеинкиназы Легальная информация

    Распознавание субстрата протеинкиназы

    NEB предлагает протеинкиназы для ряда различных мотивов специфичности.В каждой детерминанте распознавания остаток фосфоакцептора представляет собой серин, треонин или тирозин.

    Легальная информация

    Этот продукт защищен одним или несколькими патентами, товарными знаками и / или авторскими правами, принадлежащими или контролируемыми New England Biolabs, Inc (NEB).

    Хотя NEB разрабатывает и проверяет свои продукты для различных приложений, использование этого продукта может потребовать от покупателя получения дополнительных прав интеллектуальной собственности третьих лиц для определенных приложений.

    Для получения дополнительной информации о коммерческих правах, пожалуйста, свяжитесь с командой NEB по развитию глобального бизнеса по адресу gbd @ neb.com.

    Этот продукт предназначен только для исследовательских целей. Этот продукт не предназначен для использования в терапевтических или диагностических целях у людей или животных.

    Рекомендуемые товары

    Другой связанный контент

    Срок действия сеанса истек

    Вы бездействовали более 20 минут, в целях безопасности вы вышли из системы. Пожалуйста, войдите снова, чтобы продолжить сеанс.

    Войти

    Учреждение изменено

    Ваш профиль привязан к учреждению, пожалуйста, войдите еще раз, чтобы завершить обновление вашего профиля.

    Войти

    Идентификация неупорядоченных белков – группы и центры

    Традиционный взгляд на структуру белка, созданный за тридцать лет определения структуры с помощью рентгеновских лучей, рассматривает атомы белка как фиксированные в пространстве относительно друг друга, в сложной форме, содержащей области локальной структуры, такие как α-спирали и β-листы.

    Эта точка зрения, несомненно, верна для многих белков, однако ясно, что большое количество белков не имеет фиксированной структуры [1].Первоначально такие белки были идентифицированы, потому что области структуры не были видны в кристаллографических экспериментах по дифракции рентгеновских лучей, вследствие статического или динамического беспорядка [2,3]. Развитие методов ЯМР для исследования белковых структур в растворах сделало экспериментальное обнаружение структурных нарушений относительно простым, даже для больших белков [4]. Факторы, включая сложность аминокислотной последовательности и содержание заряженных и неполярных остатков, являются основными детерминантами нарушения [1-3,5].Применение таких соображений ко всем последовательностям генома с помощью биоинформатических инструментов привело к предположению, что большинство белков у некоторых эукариот, включая человека, имеют неупорядоченные домены длиной до пятидесяти аминокислот [2-3,6]. Внутренне неупорядоченные или «естественно развернутые» белки могут быть обычным явлением, поскольку нарушение приводит к высокой конформной энтропии, которая, как предполагается, является выгодной для белка, ищущего своего партнера по взаимодействию. Действительно, многие изначально развернутые белки сворачиваются в упорядоченную структуру при связывании с партнером [7,8], а дрожжевые белки с неупорядоченными областями из семидесяти или более смежных остатков имеют больше партнеров по взаимодействию белок-белок, чем другие белки [9].

    Целью данной работы является исследование использования современных методов машинного обучения, таких как машина опорных векторов (SVM), искусственная нейронная сеть (ANN) и машина вектора релевантности (RVM) для идентификации областей в белках, не имеющих фиксированной структуры. , на основе данных аминокислотной последовательности. Методы обучения ядра, такие как SVM, кажутся особенно многообещающими для работы такого рода, поскольку они могут работать непосредственно со структурированными данными, такими как графики, деревья или, в данном случае, данные последовательности.

    Online Disorder Prediction

    Щелкните следующую ссылку, чтобы получить Online Disorder Prediction.

    Выражение признательности

    Эта работа была поддержана грантом по изменению дисциплины, предоставленным совместно Советом медицинских исследований Великобритании (MRC), Советом по исследованиям в области инженерных и физических наук (EPSRC) и Советом по исследованиям биотехнологий и биологических наук (BBSRC), находящимся под управлением MRC (грант № 67192 – «Прогнозирование белковых расстройств с помощью передовых инструментов машинного обучения»).

    Каталожные номера

    N.B. DOI представляет собой ссылку на онлайн-материалы через систему цифрового идентификатора объекта DOI, если таковая имеется.

    1. Уверский В. Н., Естественно развернутые белки: точка, в которой биология ждет физики, Наука о белках, т. 11, pp. 739-756, 2002.
    2. Дункер, А. К., Браун, К. Дж., Лоусон, Дж. Д. и Якучова, Л. М. и Обрадович, З., Внутреннее расстройство и функция белков, Биохимия, том. 41, нет. 21, pp 6573-6582, 2002. (DOI)
    3. Dunker, A.К., Лоусон, Д. Д., Браун, Си-Джей, Уильямс, Р. М., Ромеро, П., О, Дж. С., Олдфилд, Си-Джей, Кэмпен, А. М., Рэтлифф, К. М., Хиппс, К. В., Аусио, Дж., Ниссен, М. С., Ривз , R., Kang, CH, Kissinger, CR, Bailey, RW, Griswold, MD, Chiu, W., Garner, EC, and Obradovic, Z., Внутренне неупорядоченный белок, Journal of Molecular Graphics and Modeling, vol. 19, нет. 1, стр. 26-59, 2001. (DOI)
    4. Дайсон, Х. Дж. И Райт, П. Э., Методы ядерного магнитного резонанса для выяснения структуры и динамики в неупорядоченных состояниях, Методы в энзимологии, т.39, pp. 258-270, 2001.
    5. Romero, P., Obradovic, Z., Li, X., Garner, EC, Brown, CJ, и Dunker, AK, Sequence sequence of беспорядок, Белки: структура, функция и Генетика, т. 42, нет. 1, pp. 38-48, 2000. (DOI)
    6. Дункер А. К. и Обрадович З., Белковая троица – связывающая функция и нарушение, Nature Biotechnology, vol. 19, pp. 805-806, 2001. (DOI)
    7. Дайсон, Х. Дж. И Райт, П. Э. Сцепление фолдинга и связывания для неструктурированных белков, Current Opinion in Structural Biology, vol.12, pp. 54-60, 2002. (DOI)
    8. Томпа П., Внутренне неструктурированные белки, Trends in Biochemical Sciences, vol. 27, нет. 10, pp. 527-533, 2002. (DOI)
    9. Лю, Дж. Ф., Тан, Х. П. и Рост, Б., Петлеобразные белки, по-видимому, консервативны в процессе эволюции, Journal of Molecular Biology, vol. 322, нет. 1, pp. 53-64, 2002. (DOI)

    Исследовательская группа

    Доктор Гэвин Коули, доктор Стивен Хейворд и Джефф Мор (CAP).

    Рекомбинантные белки, полученные из DSP-PP 240 и DSP 370

    Контекст 1

    … либо кДНК DSP-PP 240, либо кДНК DSP 370. После инфицирования клетки инкубировали в течение 4 дней, и рекомбинантные белки в собранной клеточной среде были частично очищены и сконцентрированы с использованием экстракции полианионов, разделены методом SDS-PAGE и окрашены Stains-All (см. «Материалы и методы»). ). Полученные профили белков показаны на фиг. 2. Пять основных полос синего окрашивания (т.е. полосы 1-5; BSA окрашивает оранжевый цвет) присутствовали в среде, полученной из клеток, инфицированных бактериофагом DSP-PP 240, тогда как три основных полосы синего окрашивания (я.е. полосы 1-3; BSA окрашивает оранжево-красный цвет) присутствовали в инфицированных DSP 370 клетках …

    Контекст 2

    … идентифицировать полосу 33 кДа 4 на фиг.2, профиль рекомбинантного белка, полученный из кДНК DSP 370 Конструкцию сравнивали с конструкцией, полученной из конструкции кДНК DSP-PP 240 (рис. 2, дорожки 1 и 2). Конструкция кДНК DSP 370 кодирует рекомбинантный белок размером 388 аминокислот (то есть белок DSP из 370 аминокислот плюс дополнительные 18 аминокислот …

    Контекст 3

    … идентифицировать полосу 33 кДа 4 на рис. 2, профиль рекомбинантного белка, полученный из конструкции кДНК DSP 370, сравнивали с профилем, полученным из конструкции кДНК DSP-PP 240 – struct (рис. 2, дорожки 1 и 2). Конструкция кДНК DSP 370 кодирует рекомбинантный белок размером 388 аминокислот (т.е. белок DSP из 370 аминокислот плюс дополнительная 18-аминокислотная последовательность, полученная из вируса). Полоса 2 представляет собой белок DSP из 388 аминокислот, который распознается антителом против DSP (не показано).Этот рекомбинантный белок DSP 370 не содержит …

    Контекст 4

    … 2 представляет собой белок DSP из 388 аминокислот, который распознается антителом против DSP (не показано). Этот рекомбинантный белок DSP 370 не содержит последовательности PP и короче полосы 2. Из фиг. 2 полосы 4 (33 кДа) и полосы 5 (29 кДа) не присутствуют в профиле DSP 370. Таким образом, эти полосы, скорее всего, представляют два белка, родственных PP. …

    Контекст 5

    … и не обнаружил последний пептид из 28 аминокислот (660-687) (т.е. SGNGNSDSDSDSDSEGSDSNHS-TSDD). Таким образом, полоса 5, скорее всего, представляет собой PP 211, в котором отсутствуют С-концевые 28 аминокислот (см. Фиг. 3D). Расчетное соотношение молекулярной массы белка PP 240 430, который состоит из DSP 350 и гликопротеина дентина (DGP 80). На фиг. 2 синяя полоса 1 (180 кДа), присутствующая в дорожке DSP 370, скорее всего, представляет димер DSP (полоса 2; 90 кДа). Синяя полоса 3 (70 кДа) и синяя полоса 3, присутствующие в дорожках DSP-PP 240 и DSP 370, соответственно, на рис.2, не всегда присутствовали в образцах рекомбинантных белков. Анализ масс-спектров показывает, что синяя полоса 3 представляет собой …

    Контекст 6

    … Расчетное соотношение молекулярной массы белка PP 240 430, который состоит из DSP 350 и гликопротеина дентина (DGP). 80). На фиг. 2 синяя полоса 1 (180 кДа), присутствующая в дорожке DSP 370, скорее всего, представляет димер DSP (полоса 2; 90 кДа). Синяя полоса 3 (70 кДа) и синяя полоса 3, присутствующие в дорожках DSP-PP 240 и DSP 370, соответственно, на рис.2, не всегда присутствовали в образцах рекомбинантных белков. Анализ масс-спектров позволяет предположить, что синяя полоса 3 представляет собой белок, подобный телокину-20 (т.е. связанный с бакуловирусом; данные не показаны). Таким образом, синяя полоса 3 могла быть произведена бакуловирусной системой. Меньшие слабые синие полосы между 22 и 6 кДа присутствовали в обоих продуктах, полученных из DSP-PP 240,

    Контекст 7

    … с бакуловирусом, содержащим кДНК DSP-PP 240. В разное время после заражения рекомбинантный DSP-PP 240 и родственные белки очищали из культуральной среды и запускали в 10% SDS-PAGE, который затем окрашивали Stains-All.Через 2 дня заражения наблюдались полосы, расположенные на уровне 120 кДа (т.е. DSP-PP 240) и 33 кДа (т.е. PP 240) (рис. 4A, дорожка …

    Контекст 8

    … и методы “) и инкубировали этот очищенный предшественник в 25 мМ Трис-HCl, pH 7,5, в течение 30 минут при 37 ° C. Полученный профиль белка показан на рис. 5. Первоначальный электроэлюированный DSP-PP 240 представлен в виде одного полоса (рис. 5, дорожка 1), которая затем претерпевает значительную белковую обработку в течение 30 мин с образованием полосы DSP 430 и полосы PP 240 (рис.5, дорожка 2). Таким образом, процессинг белка-предшественника DSP-PP 240, вероятно, не связан с протеазами в среде насекомых, что позволяет предположить, что вместо этого он может подвергаться …

    Контекст 9

    … кДа (то есть PP 240) (см.рис. 7, A (дорожка 1) и B (дорожка 1)), что указывает на желатинолитическую активность. В контрольных группах не наблюдалось белых полос в полианионных экстрактах среды, кондиционированной клетками насекомых Sf9, и в полианионных экстрактах сред, полученных из клеток насекомых Sf9, инфицированных бакуловирусом, содержащим антисмысловую кДНК DSP 370 (см. Рис.7, A (дорожки 2 и 3) и B (дорожка 2)). Это первое свидетельство того, что DSP-PP и PP обладают протеолитическими …

    Контекст 10

    … развитием и минеральными-240 и DSP 370 белками в системе экспрессии бакуловирусов. Рекомбинантный белок-предшественник DSP-PP 240, содержащий лидерную последовательность, был синтезирован из кДНК DSP-PP 240 в системе экспрессии бакуловируса. Лидерную последовательность удаляли, и белок-предшественник DSP-PP 240 секретировали в культуральную среду (см. Рис.2). Во время 30-минутной инкубации при 37 ° C в 25 мМ Трис-HCl, pH 7,5, белок-предшественник DSP-PP 240 был дополнительно переработан в DSP 430 и PP 240 (см. Фиг. 5). Лидерная последовательность белка-предшественника DSP-PP 240 изображена серым цветом, а N-концевая последовательность – черными полужирными буквами. Серый треугольник указывает на расщепление …

    Контекст 11

    … от кДНК DSP 370 в системе экспрессии бакуловируса. Лидерную последовательность удаляли, и белок-вирусную последовательность DSP 370 секретировали в культуральную среду.Размер белково-вирусной последовательности DSP 370 (т.е. 388 аминокислот) меньше, чем у DSP 430, и в профиле геля рекомбинантного белка DSP 370 не было полос, связанных с РР (см. Фиг. 2). Это позволяет точно настроить зародышеобразование минералов и рост гидроксиапатита на разных этапах программы минерализации (19). Мы использовали DSP-PP 240 инфицированные клетки насекомых Sf9 для получения и секреции рекомбинантного белкового продукта массой 120 кДа в кондиционированную клеточную среду (рис. 2, полоса 1). Анализ МС и МС / МС выявил ряд…

    Контекст 12

    … присутствовали в профиле геля рекомбинантного белка DSP 370 (см. Фиг. 2). Это позволяет точно настроить зародышеобразование минералов и рост гидроксиапатита на разных этапах программы минерализации (19). Мы использовали DSP-PP 240 инфицированные клетки насекомых Sf9 для получения и секреции рекомбинантного белкового продукта массой 120 кДа в кондиционированную клеточную среду (рис. 2, полоса 1). Анализ МС и МС / МС идентифицировал ряд распознаваемых триптических пептидов в части DSP предполагаемого белка-предшественника DSP-PP 240, а также обнаружение совпадающей аминокислотной последовательности PP 240 в положениях 524-542 (т.

    Related Posts

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2021 © Все права защищены.