Протеин SiS (сывороточный, изолят, батончики, порошки)
Сортировать по: По умолчанию Цена Цена
Белок необходим спортсменам, работающим на выносливость для восстановления мышц после нагрузок. Протеиновые продукты разработаны для любой цели и бюдж… Читать полностью
Производитель
SiS
В наличии
В наличии на складе
Доступен предзаказ
250 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Банан, 50 гр
250 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Клубника, 50 гр
250 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Шоколад, 50 гр
2 300 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Клубника, 500 гр
6 500 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Шоколад, 1,6 кг
6 500 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Клубника, 1. 6 кг
6 500 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Банан, 1,6 кг
6 500 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Ваниль, 1.6 кг
2 300 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Шоколад, 500 гр
10 000 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый PLUS в порошке, Малина, 1.54 кг
5 300 q
Сывороточный протеин в порошке, Шоколад
10 000 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый PLUS в порошке, Шоколад, 1.
400 q
Батончик протеиновый PROTEIN 20, Двойной Шоколадный Брауни, 55 гр
400 q
Батончик протеиновый PROTEIN 20, Шоколад & Арахис Хруст, 55 гр
2 300 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Ваниль, 500 гр
2 300 q
Напиток восстановительный углеводно-белковый в порошке, Банан, 500 г
Белок необходим спортсменам, работающим на выносливость для восстановления мышц после нагрузок. Протеиновые продукты разработаны для любой цели и бюджета, в том числе сывороточный протеин, наш улучшенный изолят сывороточного протеина премиум-класса, протеин Overnight Protein с отличным вкусом и восхитительные протеиновые батончики.
Белок необходим спортсменам, работающим на выносливость для восстановления мышц после нагрузок. Протеиновые продукты разработаны для любой цели и бюджета, в том числе сывороточный протеин, наш улучшенный изолят сывороточного протеина премиум-класса, протеин Overnight Protein с отличным вкусом и восхитительные протеиновые батончики. Все доступно в широком ассортименте объёмов и вкусов!
Протеин: что это, в чем есть и для чего его пьют
Вместе с эндокринологом и тренером разбираемся, кому стоит пить протеиновые коктейли и как это делать с максимальной пользой.
- Что такое протеин
- Продукты с протеином
- Виды протеиновых коктейлей
- Как и когда принимать протеин
- Вред протеина
Материал прокомментировали:
- Алевтина Федина, терапевт, медицинский директор сервиса управления здоровьем Checkme
- Екатерина Иванова, методист тренажерного зала сети фитнес-клубов WorldClass
Реклама на РБК www. adv.rbc.ru
Белок — главный строительный материал для нашего организма. Высокобелковая диета способствует росту мышц и набору силы, поэтому она пользуется популярностью у спортсменов. Но постоянно получать много белка из обычных продуктов очень сложно. Для того чтобы сделать питание спортсменов проще и приятнее, и были придуманы белковые коктейли (protein shakes) — в России их называют просто «протеины».
Зачем нужен белок
Из белков состоят мышцы, сухожилия, кожа, соединительные ткани, волосы и ногти. Также они участвуют во множестве других процессов в организме, начиная с производства гормонов и управления метаболизмом, заканчивая поддержанием иммунитета и регуляцией уровня жидкости.
Если мы получаем белки в достаточном количестве, кожа остается упругой, суставы — здоровыми, а мышцы растут. Если белка в рационе не хватает, даже тяжелые физические нагрузки не приведут к заметному росту мускулатуры.
Белок: функции, нормы, особенности и источники
Здоровому человеку, который не планирует быстро набрать мышечную массу и не занимается тяжелыми видами спорта, нужно потреблять 0,8 г белка на 1 кг массы тела. Их легко получить, придерживаясь обычной сбалансированной диеты. Пожилым людям, беременным и кормящим женщинам белка нужно в полтора раза больше.
Для спортсменов, которые хотят нарастить мускулатуру, необходимо потреблять уже от 1,5 до 2,2 г белка на 1 кг. Получается, что атлету весом 90 кг нужно по крайней мере 135 г белка ежедневно. Для этого он может, к примеру, съедать 100 г творога, 300 г куриной грудки и шесть яиц. Такая диета может стать как минимум испытанием, а то и настоящей пыткой. А для вегетарианцев или веганов получить такое количество белка из обычной еды почти нереально.
© shutterstock
Что такое протеин
По-английски белок — это protein. В русском языке это слово не используется. Но «протеинами» называют смеси для коктейлей и другие специальные добавки к пище с высоким содержанием белка.
Протеиновые коктейли — источник легкодоступного белка. Доказано, что они способствуют ускорению роста мышечной массы при занятиях спортом [1]. Кроме того, если пить их после тренировок, мышцы будут восстанавливаться быстрее [2]. Протеины продаются в виде порошков, которые нужно добавлять в молоко или воду. Чаще всего можно встретить ванильные, шоколадные и клубничные, но сегодня существует огромное количество других вкусов, например, дыни, сникерса или кофе.
Стандартная порция — 30 г смеси, которую разводят в 150–250 мл жидкости. В таком коктейле будет 15–29 г протеина, а также небольшое количество жиров и углеводов. Помимо порошковых коктейлей, существуют и другие высокобелковые продукты: смеси для выпечки, батончики и даже протеиновые чипсы.
В каких еще продуктах содержится протеин
Как отмечает Алевтина Федина, несмотря на удобство протеиновых коктейлей, самый лучший способ получать белки — обычная здоровая пища.
К натуральным продуктам — рекордсменам по содержанию белка относятся (на 100 г):
- птица — 27 г;
- свинина — 27 г;
- говядина — 26 г;
- тыквенные семечки — 25 г;
- рыба — 22 г;
- морепродукты — 22 г;
- красная чечевица — 18 г;
- красная фасоль — 16 г;
- маш, нут, черная фасоль — 14 г;
- гречка и цельнозерновой хлеб — 13 г;
- киноа и тофу — 8 г.
Какие бывают протеины
Есть несколько десятков разновидностей протеиновых порошков. Они различаются по двум параметрам.
Первый — способ изготовления, от которого зависит содержание белка. Здесь существуют три вида:
- Концентраты. Производятся с помощью экстракции белка из пищевых продуктов. Обычно они содержат 60–80% собственно протеина, а оставшиеся 20–40% приходятся на жиры и углеводы. Такие смеси менее удобны для спортсменов, зато стоят меньше остальных.
- Изоляты. Более очищенный белок, где примеси составляют 5–10%. Такие порошки хорошо подходят для набора мышечной массы и нормализации веса.
- Гидролизаты. Здесь белки с помощью химических процессов расщеплены на более мелкие цепочки аминокислот. Такой протеин усваивается быстрее всего, поэтому идеален для употребления после тренировки.
Второй параметр — продукт, из которого протеин изготовлен.
Сывороточные
Этот вид протеинов производится из молочной сыворотки. Такие смеси считаются наиболее эффективными по влиянию на рост мышц и ускорение метаболизма. Сывороточный протеин имеет самый разнообразный аминокислотный профиль, то есть с ним организм получит максимальное количество необходимых аминокислот. Кроме того, у него самая высокая биологическая усвояемость. «Все животные источники белка относятся к высокоценным по профилю аминокислот, — объясняет Екатерина Иванова. — Но в сывороточных белках содержится относительно больше аминокислот ВСАА, которые дают больший метаболический отклик в организме спортсмена, чем другие».
Наконец, у таких смесей нейтральный вкус, который позволяет делать вкусные коктейли, и высокая растворимость. Все эти свойства делают сывороточный протеин самым популярным, особенно среди спортсменов.
По-английски такой протеин называется whey — это слово на коробках и банках в спортивных магазинах можно увидеть так часто, что многие начинающие спортсмены принимают его за название бренда добавок.
Говяжьи
Этот тип порошков изготавливают из говяжьего мяса. По аминокислотному профилю и скорости усвоения он похож на сывороточный, однако у него меньшая биодоступность. Кроме того, в нем ниже содержание лейцина — аминокислоты, запускающей рост мышц. Еще одна проблема — худшая растворимость и специфический привкус, который производителям приходится забивать агрессивными ароматизаторами и подсластителями.
© unsplalsh
Казеиновые
Такие протеины тоже производятся из молока, но по другой технологии, чем сывороточные. Казеин, основной компонент такого порошка, — это главный белок молока, творога и сыров. Несмотря на одинаковое сырье такие коктейли — полная противоположность сывороточных. Они усваиваются дольше всего, так как обволакивают желудок, тем самым снижая аппетит. При этом они наиболее низкокалорийные, поэтому хорошо подходят для похудения.
Яичные
Это не самый распространенный вид протеинов. Его воздействие пока плохо изучено, но в целом его считают несколько менее эффективным, чем сывороточный. Главные плюсы яичного протеина — отсутствие лактозы.
Яичный белок содержит авидин — это вещество препятствует усвоению биотина, витамина B-комплекса [4]. Из обычных яиц мы получаем его слишком мало для того, чтобы он реально мог навредить. Но в протеиновых порошках из яичных белков его гораздо больше. Дефицит биотина приводит к сухости кожи, депрессии, сонливости, проблемам с сердечно-сосудистой системой и накоплением холестерина.
Веганские
Для тех, кто не может или не хочет потреблять в пищу продукты животного происхождения, существуют растительные протеины. Чаще всего встречаются соевый, гороховый и конопляный. В целом они менее эффективны, чем невеганские разновидности, поэтому для всеядных людей никаких преимуществ у растительных протеинов нет. Но для веганов такие коктейли могут стать отличным источником натурального белка, которого им часто не хватает.
Для спортсменов лучше всего подходит гороховый протеин, так как усваивается довольно быстро, хотя и медленнее, чем сывороточный, и содержит много BCAA. Одно исследование показало, что по влиянию на рост мышечной массы он сопоставим с сывороточным [5].
Конопляный протеин пока слабо исследован, однако известно, что в нем содержится множество полезных биоактивных соединений, которые повышают иммунитет, защищают сердечно-сосудистую систему и снижают окислительный стресс [6].
Соевый протеин — единственный из всех растительных — содержит весь набор незаменимых аминокислот. Тем не менее это самый спорный из всех видов протеина. Так, американский диетолог Кимберли Снайдер не рекомендует пить белковые коктейли на основе сои. Но доказательная наука не находит у такого протеина никаких серьезных противопоказаний. Ошибочно считается, что соя снижает количество тестостерона, необходимого в том числе и для быстрого роста мышц, и стимулирует производство женских половых гормонов, однако исследования опровергают это [7]. Кроме того, часто соевый протеин делают из ГМО-сои, но и здесь ученые не смогли найти никаких вредных свойств.
Многокомпонентные протеины
Часто можно встретить смешанные порошки, в которые входят и «быстрые», и «медленные» виды протеина. Это относительно универсальный вариант коктейля, который можно выпить и после тренировки, и в качестве высокобелкового перекуса.
«Среди порошковых белковых добавок быстрее всего усваивается гидролизат белка — сывороточный или говяжий, — рассказывает Екатерина Иванова. — Далее по удлинению времени усвоения следуют смесь гидролизата и изолята, изолят, концентрат. Если рассматривать скорость усвоения, то быстрее всего усваиваются сывороточные молочные белки, далее яичные, говяжьи, соевые и в конце иные растительные. Поэтому чаще выбор падает на сывороточные изоляты, в том числе и по соотношению с ценой. Они и представляют большую часть ассортимента белковых добавок».
Что надо знать о правильном питании: инструкция для начинающих
Гейнер
Отдельная разновидность протеина — гейнер. Это смесь, в которой, помимо белков, содержатся еще и углеводы. Это специализированное спортивное питание для профессиональных и полупрофессиональных спортсменов и бодибилдеров. Если вы о нем раньше не слышали — значит, он вам точно не понадобится.
«Задачи гейнера — создать высококалорийный заменитель пищи с высоким содержанием углеводов, значительно поднять энергетическую ценность рациона и при этом хоть немного разгрузить пищеварительную систему, — объясняет Екатерина Иванова. — С подобными задачами сталкиваются исключительно профессиональные спортсмены во время продолжительных интенсивных нагрузок. При этом гейнером заменяется один из приемов пищи, чаще до или после тренировки. Всем остальным людям такие коктейли не нужны».
© shutterstock
Как и когда принимать протеин
Как отмечает Алевтина Федина, если вы питаетесь сбалансированно, то, скорее всего, получаете достаточное количество белка из пищи, и протеиновые коктейли вам не нужны: «Если у человека недостаток массы тела, то протеин, действительно, может помочь. Разумеется, предварительно нужно проконсультироваться с врачом, ведь часто у людей с недостатком веса или анорексией начинаются проблемы с внутренними органами и их функциями. И неверная дозировка протеина может навредить».
Екатерина Иванова согласна — по ее словам, принимать протеины стоит лишь в случае доказанного дефицита белка: «Сами по себе протеины малополезны по сравнению с цельной пищей, богатой белком, разве что они превосходят ее в скорости усвоения, но и это не столь важно для здорового человека. А излишний белок может привести к белковой перегрузке и интоксикации».
Есть две стратегии приема протеиновых коктейлей, которые, впрочем, допустимо сочетать. Во-первых, можно принимать их с привязкой к занятиям спортом, до или после тренировки. Как отмечает Иванова, это стоит делать лишь в случае, если у спортсмена доказана нехватка белка, а получать его в достаточном количестве с обычной пищей не получается. В таком случае нужно рассчитать количество недостающего протеина и довести его с помощью коктейлей до 1,5 г на 1 кг массы тела в сутки.
По словам специалиста, восполнять запас аминокислот, то есть получать порцию белка, необходимо каждые пять-шесть часов. Поэтому рекомендуется употреблять белок за час-два часа до тренировки, лучше вместе с другими продуктами, особенно богатыми углеводами. А следующий прием пищи надо запланировать так, чтобы он уложился в пятичасовой промежуток. При этом, как отмечает Иванова, любую пищу стоит принимать не раньше чем через 40–60 минут после тренировки — так организму будет легче адекватно и последовательно включить собственные анаболические гормоны, необходимые для роста и восстановления мышц.
Кроме того, протеиновые коктейли и другие высокобелковые продукты можно использовать как перекус. Алевтина Федина допускает такую практику, но не рекомендует систематически заменять протеиновыми коктейлями полноценные завтрак, обед или ужин: «Любой прием пищи даст вам гораздо более усваиваемые белки, жиры и углеводы. Если вы не успеваете полноценно пообедать, тогда допустимо перехватить протеиновый коктейль или батончик, но на регулярной основе так делать категорически нельзя».
Вред протеина
По словам Алевтины Фединой, протеин запрещен при заболеваниях почек и желудочно-кишечного тракта, а также тем, у кого есть аллергия на компоненты протеиновой смеси. Людям с диабетом и заболеваниями печени можно принимать его только с одобрения врача.
В целом науке неизвестно о серьезных побочных эффектах протеиновых коктейлей. При употреблении в меру и под контролем врача и тренера они считаются безвредными.
«Протеин может быть безопасным, если подобрать качественный продукт и строго соблюдать дозировки, держа на контроле показатели собственного здоровья, — продолжает врач. — Но если заменять им приемы пищи, постоянно увеличивать его количество и игнорировать обследования организма, то все может закончиться снижением функции почек».
Тем не менее есть несколько научных свидетельств о вреде протеиновых коктейлей. Главная проблема заключается в том, что их производство почти никак не регулируется ни в США, ни в России, ни в Европе. Как показали исследования, во многих порошках на американском рынке содержатся опасные тяжелые металлы, такие как свинец, мышьяк и ртуть, следы пластика бисфенола-А, пестицидов и других загрязнителей [8].
Кроме того, пока еще мало изучены риски, связанные с долговременным употреблением больших доз чистого белка. Исследование 2013 года показало, что продолжительный прием протеиновых коктейлей может повредить почкам и печени, а также нарушить баланс кальция в организме [9].
«При бесконтрольном употреблении протеина страдают почки: от повышенной нагрузки снижается их функция, начинаются воспаление и ухудшение фильтрации. Впоследствии нарушаются обмен веществ и электролитный баланс, начиная с повышения содержания азотистых продуктов, — объясняет Алевтина Федина. — Это заканчивается отравлением организма и ацидозом. Нарушение функции почек также приводит к повышенному артериальному давлению, что чревато риском инфарктов и инсультов, и часто — развитием аневризмов. Также большое количество протеина без соразмерной физической нагрузки может привести к набору веса».
Спортивные врачи — о фитнесе, лечебной физкультуре и здоровом питании
Теги: фитнес , правильное питание
Обзор анализа межбелковых взаимодействий | Thermo Fisher Scientific
Белки контролируют все биологические системы клетки, и хотя многие белки выполняют свои функции независимо, подавляющее большинство белков взаимодействуют друг с другом для обеспечения надлежащей биологической активности. Характеристика белок-белковых взаимодействий с помощью таких методов, как ко-иммунопреципитация (co-IP), пулл-даун-анализ, перекрестное связывание, перенос метки и дальнезападный блот-анализ, имеет решающее значение для понимания функции белка и биологии клетки.
Посмотреть все продукты для анализа белковых взаимодействий
Содержание страницы
- Введение в белок-белковые взаимодействия
- Типы белок-белковых взаимодействий
- Ко-иммунопреципитация (ко-IP)
- Pull-down анализы
- Анализ взаимодействия сшивающих белков
- Анализ взаимодействия белков переноса метки
- Дальний вестерн-блоттинг
- Рекомендуемая литература
Посмотреть и выбрать продукты
- Руководство по выбору сшивающего агента
Введение в белок-белковые взаимодействия
Белки являются рабочими лошадками, которые облегчают большинство биологических процессов в клетке, включая экспрессию генов, рост клеток, пролиферацию, поглощение питательных веществ, морфологию, подвижность, межклеточную коммуникацию и апоптоз. Но клетки реагируют на множество раздражителей, и поэтому экспрессия белков — это динамический процесс; белки, которые используются для выполнения определенных задач, не всегда могут быть экспрессированы или активированы. Кроме того, не все клетки одинаковы, и многие белки экспрессируются в зависимости от типа клеток. Эти основные характеристики белков предполагают сложность, которую может быть трудно исследовать, особенно при попытке понять функцию белка в надлежащем биологическом контексте.
Критические аспекты, необходимые для понимания функции белка, включают:
- Последовательность и структура белка — используется для обнаружения мотивов, которые предсказывают функцию белка
- Эволюционная история и консервативные последовательности — идентифицирует ключевые регуляторные остатки профиль — раскрывает специфичность клеточного типа и то, как регулируется экспрессия
- Посттрансляционные модификации — фосфорилирование, ацилирование, гликозилирование и убиквитинирование указывают на локализацию, активацию и/или функцию
- Взаимодействие с другими белками — функцию можно экстраполировать, зная функцию партнеров по связыванию
- Внутриклеточная локализация — может указывать на функцию белка
белки. Однако, поскольку большинство белков взаимодействуют с другими белками для правильного функционирования, их следует изучать в контексте их взаимодействующих партнеров, чтобы полностью понять их функцию. С публикацией генома человека и развитием области протеомики понимание того, как белки взаимодействуют друг с другом, и определение биологических сетей стало жизненно важным для понимания того, как белки функционируют внутри клетки.
Справочник по приготовлению белков
Из этого 32-страничного руководства вы узнаете больше об обессоливании, замене буфера, концентрировании и/или удалении загрязняющих веществ из образцов белка, иммунопреципитации и других методах очистки и очистки белков с помощью различных инструментов Thermo Scientific для биологии белков.
- Иммунопреципитация (ИП), ко-ИП и хроматин-ИП
- Метки для очистки рекомбинантных белков
- Безопасный диализ образцов белков с использованием диализных кассет и устройств Slide-A-Lyzer
- Быстрое обессоление образцов с высоким извлечением белка с использованием вращающихся обессоливающих колонок и планшетов Zeba
- Эффективное извлечение определенных загрязнителей с помощью смол, оптимизированных для удаления детергентов или эндотоксинов
- Быстрое концентрирование разбавленных образцов белка с помощью концентраторов белка Pierce Узнать больше
- Ко-иммунопреципитация (Co-IP)
- Pull-Down Assays
- Анализ взаимодействия белков переноса метки
- Far-Western Blot Analysis
Отдельные продукты
- Руководство по выбору сшивающего агента
Типы белок-белковых взаимодействий слабый.
Стабильные взаимодействия связаны с белками, которые очищаются в виде мультисубъединичных комплексов, причем субъединицы этих комплексов могут быть одинаковыми или разными. Гемоглобин и ядерная РНК-полимераза являются примерами многосубъединичных взаимодействий, которые образуют стабильные комплексы.
Предполагается, что временные взаимодействия контролируют большинство клеточных процессов. Как следует из названия, временные взаимодействия носят временный характер и обычно требуют набора условий, способствующих взаимодействию, таких как фосфорилирование, конформационные изменения или локализация в отдельных областях клетки. Переходные взаимодействия могут быть сильными или слабыми, быстрыми или медленными. Находясь в контакте со своими партнерами по связыванию, временно взаимодействующие белки участвуют в широком спектре клеточных процессов, включая модификацию белков, транспорт, фолдинг, передачу сигналов, апоптоз и клеточный цикл. Следующий пример иллюстрирует взаимодействия белков, которые регулируют апоптотические и антиапоптотические процессы.
Тяжелое белок-белковое взаимодействие BAD. Панель A: окрашенный кумасси гель SDS-PAGE рекомбинантных легких и тяжелых BAD-GST-HA-6xHIS, очищенных от лизатов HeLa IVT (L), с использованием тандемной аффинности глутатионовой смолы (E1) и кобальтовой смолы (E2). Указан проток (FT) из каждой колонки. Панель B: Схема фосфорилирования BAD и белковых взаимодействий во время выживания и гибели клеток (т.е. апоптоза). Панель C: покрытие последовательности белка BAD, показывающее идентифицированные сайты согласованного фосфорилирования Akt (красный прямоугольник). Панель D: МС-спектры меченого стабильным изотопом BAD-пептида HSSYPAGTEDDEGmGEEPSPFr.Белки связываются друг с другом за счет комбинации гидрофобных связей, сил Ван-дер-Ваальса и солевых мостиков в специфических доменах связывания на каждом белке. Эти домены могут быть небольшими связывающими щелями или большими поверхностями и могут иметь длину всего в несколько пептидов или охватывать сотни аминокислот.
Сила связывания зависит от размера связывающего домена. Одним из примеров общего поверхностного домена, который способствует стабильному межбелковому взаимодействию, является лейциновая застежка-молния, которая состоит из α-спиралей на каждом белке, которые связываются друг с другом параллельным образом посредством гидрофобного связывания регулярно расположенных остатков лейцина на каждом α-белке. -спирали, выступающие между соседними спиральными пептидными цепями. Из-за плотной молекулярной упаковки лейциновые застежки-молнии обеспечивают стабильное связывание мультибелковых комплексов, хотя все лейциновые застежки не связываются одинаково из-за нелейциновых аминокислот в α-спирали, которые могут уменьшить молекулярную упаковку и, следовательно, прочность взаимодействие.
Два домена гомологии Src (SH), Sh3 и Sh4, являются примерами обычных доменов временного связывания, которые связывают короткие пептидные последовательности и обычно обнаруживаются в сигнальных белках. Домен Sh3 распознает пептидные последовательности с фосфорилированными остатками тирозина, которые часто указывают на активацию белка.
Домены Sh3 играют ключевую роль в передаче сигналов рецептора фактора роста, во время которой опосредованное лигандом фосфорилирование рецептора по остаткам тирозина привлекает нижестоящие эффекторы, которые распознают эти остатки через их домены Sh3. Домен Sh4 обычно распознает богатые пролином пептидные последовательности и обычно используется киназами, фосфолипазами и ГТФазами для идентификации белков-мишеней. Хотя оба домена Sh3 и Sh4 обычно связываются с этими мотивами, специфичность различных белковых взаимодействий определяется соседними аминокислотными остатками в соответствующем мотиве.
Биологические эффекты белок-белковых взаимодействий
Результат взаимодействия двух или более белков с определенной функциональной целью может быть продемонстрирован несколькими различными способами. Измеримые эффекты белковых взаимодействий были описаны следующим образом:
- Изменяют кинетические свойства ферментов, которые могут быть результатом незначительных изменений в связывании субстрата или аллостерических эффектов
- Обеспечение каналов субстрата путем перемещения субстрата между доменами или субъединицами , что в конечном итоге приводит к желаемому конечному продукту
- Создание нового сайта связывания, обычно для небольших эффекторных молекул
- Инактивация или разрушение белка
- Изменение специфичности белка в отношении его субстрата посредством взаимодействия с различными партнерами по связыванию, например, демонстрация новой функции, которую не может выполнять ни один из белков по отдельности
- Выполняют регулирующую роль как в восходящем, так и в последующем событии
Общие методы анализа белок-белковых взаимодействий
Обычно для проверки, характеристики и подтверждения белковых взаимодействий необходимо сочетание методов.
Ранее неизвестные белки могут быть обнаружены по их ассоциации с одним или несколькими известными белками. Анализ белковых взаимодействий может также раскрыть уникальные, непредвиденные функциональные роли хорошо известных белков. Открытие или проверка взаимодействия — первый шаг на пути к пониманию того, где, как и при каких условиях взаимодействуют эти белки in vivo и функциональные последствия этих взаимодействий.
Хотя различных методов и подходов к изучению белок-белковых взаимодействий слишком много, чтобы описать их здесь, в таблице ниже и в остальной части этого раздела основное внимание уделяется общим методам анализа белок-белковых взаимодействий и типам взаимодействий, которые можно изучать с помощью каждый метод. Таким образом, стабильные белок-белковые взаимодействия легче всего выделить с помощью физических методов, таких как ко-иммунопреципитация и пулл-даун-анализ, поскольку белковый комплекс не разрушается с течением времени. Слабые или временные взаимодействия можно идентифицировать с помощью этих методов, сначала ковалентно сшивая белки, чтобы заморозить взаимодействие во время co-IP или pull-down.
В качестве альтернативы перекрестное связывание вместе с переносом метки и анализом дальнезападного блоттинга можно проводить независимо от других методов для идентификации белок-белковых взаимодействий.
Общие методы анализа различных типов белковых взаимодействий
Method Protein–protein interactions Co-immunoprecipitation (co-IP) Stable or strong Pull-down assay Stable or strong Анализ взаимодействия перекрестно связывающихся белков Временный или слабый Анализ взаимодействия белков переноса метки Преходящая или слабая Дальний вестерн-блоттинг Умеренно стабильный Ко-иммунопреципитация (ко-ИП) .
Co-IP проводится по существу таким же образом, как иммунопреципитация (IP) одиночного белка, за исключением того, что белок-мишень, осажденный антителом, также называемый “приманкой”, используется для совместного осаждения комплекса связывающий партнер/белок. , или «добыча», из лизата. По существу, взаимодействующий белок связывается с антигеном-мишенью, который связывается с антителом, иммобилизованным на подложке. Иммунопреципитированные белки и их партнеры по связыванию обычно обнаруживаются с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и вестерн-блоттинга. При соосаждении ассоциированных белков обычно делается предположение, что эти белки связаны с функцией антигена-мишени на клеточном уровне. Однако это лишь предположение, которое подлежит дальнейшей проверке.
Коиммунопреципитация циклина B и Cdk1 . Магнитные шарики Thermo Scientific Pierce Protein A/G связываются с антителом Cdk1 в комплексе с Cdk1. Циклин B связывается с Cdk1 и захватывается вместе со своим партнером по связыванию.
Узнать больше
- Ко-иммунопреципитация (Co-IP)
- Обзор электрофореза белков
- Обзор вестерн-блоттинга
- Иммунопреципитация белков (IP), ко-иммунопреципитация (Co-IP9)0011
Pull-down анализы
Pull-down анализы сходны по методологии с ко-иммунопреципитацией из-за использования гранулированной подложки для очистки взаимодействующих белков. Разница между этими двумя подходами, однако, заключается в том, что в то время как co-IP использует антитела для захвата белковых комплексов, анализы pull-down используют белок-приманку для очистки любых белков в лизате, которые связываются с приманкой. Анализы pull-down идеально подходят для изучения сильных или стабильных взаимодействий или тех, для ко-иммунопреципитации которых нет антител.
Общая схема ниспадающего анализа. Анализ с вытягиванием вниз представляет собой мелкомасштабный метод аффинной очистки, аналогичный иммунопреципитации, за исключением того, что антитело заменяется какой-либо другой аффинной системой.
В этом случае аффинная система состоит из глутатион-S-трансферазы (GST)-, полигис- или стрептавидин-меченого белка или связывающего домена, который захватывается глутатион-, хелатом металла (кобальта или никеля) или покрытыми биотином агарозными шариками. , соответственно. Иммобилизованный белок с меткой слияния действует как «приманка» для захвата предполагаемого партнера по связыванию (то есть «добычи»). В типичном анализе методом pull-down иммобилизованный белок-приманка инкубируется с клеточным лизатом, и после предписанных стадий промывки комплексы селективно элюируются с использованием конкурирующих аналитов или буферов с низким pH или восстанавливающих буферов для анализа в геле или вестерн-блоттинга.
Учить больше
- Отсталкивающие анализы
- Обзор аффинной очистки
- GST-меченные белки-Производство и очистка
- HIS-мега Белковые взаимодействия преходящи, происходят только на короткое время как часть одного каскада или другой метаболической функции внутри клеток.
Сшивание взаимодействующих белков — это подход к стабилизации или постоянному присоединению компонентов взаимодействующих комплексов. Как только компоненты взаимодействия ковалентно сшиты, другие этапы (например, лизис клеток, аффинная очистка, электрофорез или масс-спектрометрия) могут быть использованы для анализа взаимодействия белок-белок при сохранении исходного взаимодействующего комплекса.
Гомобифункциональные, реагирующие с аминами сшивающие агенты могут быть добавлены к клеткам для сшивания вместе потенциально взаимодействующих белков, которые затем могут быть проанализированы после лизиса с помощью вестерн-блоттинга. Сшивающие агенты могут быть мембранопроницаемыми, например, DSS, для сшивания внутриклеточных белков, или они могут быть немембранопроницаемыми, например, BS3, для сшивания белков клеточной поверхности. Кроме того, некоторые сшивающие агенты могут быть расщеплены восстановителями, такими как DSP или DTSSP, для обращения сшивок.
В качестве альтернативы гетеробифункциональные сшивающие агенты, содержащие фотоактивируемую группу, такие как продукт SDA или сульфо-SDA, можно использовать для захвата временных взаимодействий, которые могут возникнуть, например, после определенного стимула.
Фотоактивация также может происходить после метаболического мечения фотоактивируемыми аминокислотами, такими как L-фотолейцин или L-фотометионин.
Сайты сшивки между белками могут быть картированы с высокой точностью с помощью масс-спектрометрии, особенно если используется расщепляемый МС сшиватель, такой как DSSO или DSBU.
Узнайте больше
- Анализ взаимодействия сшивающего белка
- in vivo Руководство по выбору сшивания
- Протеиновое взаимодействие сшивки для масс-спектрометрии
Select
- DSSS (Disuccinimid idydId). бис(сульфосукцинимидил)суберат), формат без взвешивания
- DSP (дитиобис(сукцинимидилпропионат)), реагент Ломана
- DTSSP (3,3′-дитиобис(сульфосукцинимидилпропионат))
- SDA (NHS-диазирин) (сукцинимидил 4,4′-азипентаноат)
- Сульфо-SDA (сульфо-NHS-диазирин) (сульфосукцинимидил 4,4′-азипентаноат)
- L-Photo-Leucine
- L-Photo -Метионин
- DSSO (дисукцинимидилсульфоксид)
- DSBU (дисукцинимидилдимасляная мочевина)
Анализ взаимодействия белка переноса метки
Перенос метки включает сшивание взаимодействующих молекул (т.
связь между приманкой и добычей, так что этикетка остается прикрепленной к добыче. Этот метод особенно ценен из-за его способности идентифицировать белки, которые слабо или временно взаимодействуют с интересующим белком. Новые неизотопные реагенты и методы продолжают делать этот метод более доступным и простым для любого исследователя.
Экспериментальная стратегия переноса биотиновой метки Sulfo-SBED и анализа методом вестерн-блоттинга.
Узнать больше
- Анализ взаимодействия белков с переносом метки
Дальний вестерн-блоттинг антитела, поэтому анализ дальнего вестерн-блоттинга отличается от вестерн-блоттинга , так как белок-белковые взаимодействия выявляются путем инкубации белков, подвергшихся электрофорезу, с очищенным меченым белком-приманкой вместо антитела, специфичного к целевому белку, соответственно. Термин «дальний» был принят, чтобы подчеркнуть это различие.
Схема дальнего вестерн-блоттинга для анализа белок-белковых взаимодействий.
В этом примере меченый белок-приманка используется для зондирования переносящей мембраны или геля на наличие белка-жертвы. После связывания антитело, конъюгированное с ферментом (пероксидаза хрена; HRP), которое нацелено на метку-приманку, используется для маркировки взаимодействия, которое затем обнаруживается с помощью ферментативной хемилюминесценции. Этот общий подход можно скорректировать, используя немеченый белок-приманку, который обнаруживается с помощью антител, биотинилированный белок-приманка, который обнаруживается с помощью конъюгированного с ферментом стрептавидина, или радиоактивно меченный белок-приманка, который обнаруживается при воздействии на пленку.
Учить больше
- Обзор вестерн-блоттинга
- иммунопреципитация белка (IP), коиммунопреципитации (Co-IP) и поддержка пульдоуна
Select Products
- Far-Westn чтение
- Golemis E (2002) Белковые взаимодействия: Руководство по молекулярному клонированию.
Колд-Спринг-Харбор (Нью-Йорк): Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор. p ix, 682.
- Phizicky EM, Fields S (1995) Белок-белковые взаимодействия: методы обнаружения и анализа. Microbiol Rev 59:94–123.
Белок | Определение, структура и классификация
синтез белка
Посмотреть все СМИ
- Ключевые люди:
- Джон Б. Фенн Джордж П. Смит Уильям Г. Кэлин-младший Тасуку Хондзё Ричард Хендерсон
- Похожие темы:
- фермент интерферон фактор транскрипции прион фосфорилирование белка
- Выдающиеся лауреаты:
- Родни Роберт Портер
Просмотреть весь связанный контент →
Популярные вопросы
Что такое белок?
Белок представляет собой встречающееся в природе чрезвычайно сложное вещество, состоящее из аминокислотных остатков, соединенных пептидными связями. Белки присутствуют во всех живых организмах и включают многие важные биологические соединения, такие как ферменты, гормоны и антитела.
Где происходит синтез белка?
Где хранится белок?
Белки не хранятся для последующего использования у животных. Когда животное потребляет избыточное количество белков, они превращаются в жиры (глюкозу или триглицериды) и используются для получения энергии или создания запасов энергии. Если животное не потребляет достаточного количества белка, организм начинает расщеплять богатые белком ткани, такие как мышцы, что приводит к истощению мышц и, в конечном итоге, к смерти, если дефицит является серьезным.
Что делают белки?
Белки необходимы для жизни и необходимы для широкого спектра клеточной активности. Белковые ферменты катализируют подавляющее большинство химических реакций, происходящих в клетке. Белки обеспечивают многие структурные элементы клетки и помогают связывать клетки вместе в ткани. Белки в форме антител защищают животных от болезней, и многие гормоны являются белками.
Белки контролируют активность генов и регулируют экспрессию генов.
Сводка
Прочтите краткий обзор этой темы
белок , очень сложное вещество, присутствующее во всех живых организмах. Белки имеют большую питательную ценность и принимают непосредственное участие в химических процессах, необходимых для жизни. Важность белков была признана химиками в начале 19 века, в том числе шведским химиком Йонсом Якобом Берцелиусом, который в 1838 году ввел термин белок , слово, происходящее от греческого proteios , что означает «занимающий первое место». Белки видоспецифичны; то есть белки одного вида отличаются от белков другого вида. Они также специфичны для органов; например, в пределах одного организма мышечные белки отличаются от белков мозга и печени.
Молекула белка очень велика по сравнению с молекулами сахара или соли и состоит из множества аминокислот, соединенных друг с другом в длинные цепи, подобно тому, как бусы расположены на нитке.
Существует около 20 различных аминокислот, которые естественным образом встречаются в белках. Белки с аналогичной функцией имеют сходный аминокислотный состав и последовательность. Хотя пока невозможно объяснить все функции белка исходя из его аминокислотной последовательности, установленные корреляции между структурой и функцией можно объяснить свойствами аминокислот, входящих в состав белков.
Растения могут синтезировать все аминокислоты; животные не могут, хотя все они необходимы для жизни. Растения могут расти в среде, содержащей неорганические питательные вещества, которые обеспечивают азот, калий и другие вещества, необходимые для роста. Они используют углекислый газ в воздухе в процессе фотосинтеза для образования органических соединений, таких как углеводы. Однако животные должны получать органические питательные вещества из внешних источников. Поскольку содержание белка в большинстве растений невелико, животным, например, жвачным животным (например, коровам), требуется очень большое количество растительного материала, чтобы удовлетворить свои потребности в аминокислотах.
Нежвачные животные, включая человека, получают белки в основном из животных и их продуктов, например, мяса, молока и яиц. Семена бобовых все чаще используются для приготовления недорогой пищи, богатой белком (9).0420 см. питание человека).
Содержание белка в органах животных обычно намного выше, чем в плазме крови. Мышцы, например, содержат около 30 процентов белка, печень — от 20 до 30 процентов, а эритроциты — 30 процентов. Более высокий процент белка содержится в волосах, костях и других органах и тканях с низким содержанием воды. Количество свободных аминокислот и пептидов у животных значительно меньше количества белка; белковые молекулы образуются в клетках путем ступенчатого выравнивания аминокислот и высвобождаются в жидкости организма только после завершения синтеза.
Викторина «Британника»
Викторина «Медицинские термины и пионеры»
Высокое содержание белка в некоторых органах не означает, что важность белков связана с их количеством в организме или ткани; напротив, некоторые наиболее важные белки, такие как ферменты и гормоны, встречаются в очень малых количествах.
- Golemis E (2002) Белковые взаимодействия: Руководство по молекулярному клонированию.